肝臟dna的提取專題知識(shí)講座

肝臟dna的提取專題知識(shí)講座肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第1頁核酸是含有主要生物化學(xué)功效生物大子，最初從細(xì)胞核分離出來，又含有酸性，故稱為核酸。

脫氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)細(xì)胞核遺傳信息攜帶者肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第2頁

核糖核酸(ribonucleicacid,RNA)細(xì)胞質(zhì)蛋白質(zhì)生物合成，表示調(diào)控肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第3頁DNA普通提取步驟：生物材料選擇從各種材料中提取DNA方法不一樣，分離提取難易程度也不一樣。對(duì)于低等生物。因?yàn)镈NA分子量較小，提取時(shí)易保持其結(jié)構(gòu)完整性。細(xì)菌及高等動(dòng)植物中，DNA分子量較大，易被機(jī)械張力剪斷。

肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第4頁細(xì)胞破碎機(jī)械法物理法化學(xué)破碎方法酶學(xué)破碎方法肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第5頁細(xì)胞器分離

在提取細(xì)胞線粒體和葉綠體DNA時(shí)，必須首先把線粒體和葉綠體與其它細(xì)胞器分離出來，普通采取在適當(dāng)介質(zhì)中差速離心法分離。肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第6頁DNA提取去除蛋白質(zhì)：酚、氯仿去除多糖、脂類：高鹽抑制DNase活性：去污劑，如SDS、CTABDNA沉淀：乙醇或異丙醇肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第7頁DNA純化有機(jī)溶劑抽提柱層析法梯度離心法酶溫和消化雜質(zhì)等肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第8頁DNA提取幾個(gè)方法：濃鹽法

利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不一樣，將二者分離。陰離子去污劑法

因?yàn)榧?xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵相結(jié)合，SDS或二甲苯酸鈉等陰離子去污劑能使蛋白質(zhì)發(fā)生變性,從而破壞這種價(jià)鍵，所以能夠采取陰離子去污劑提取DNA。此法能夠直接從生物材料中提取DNA。

肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第9頁苯酚抽提法

苯酚作為蛋白變性劑,同時(shí)抑制了DNase降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí),因?yàn)榈鞍着cDNA聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相同相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，屢次重復(fù)操作，再合并含DNA水相，利用核酸不溶于醇性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA。此法特點(diǎn)是使提取DNA保持天然狀態(tài)。肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第10頁試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)：掌握從動(dòng)物組織中提取、分離、純化DNA基礎(chǔ)原理及操作方法。學(xué)習(xí)DNA提取普通知識(shí)；肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第11頁試驗(yàn)原理：在細(xì)胞核內(nèi)，核酸通常是與一些組織蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合物，即以脫氧核糖核蛋白（DNP）和核糖核蛋白（RNP）形式存在。

肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第12頁

在提取時(shí)，通常采取0.14mol/L鹽溶液來除去RNP，使DNP仍保持在沉淀中，然后使用濃鹽溶液來提取DNP。

在不一樣濃度鹽溶液中，RNP與DNP溶解度有很大差異。核蛋白0.14mol/LNaCl1.0mol/LNaClRNP溶解度大溶解度小DNP溶解度?。▋H為水中1%）溶解度大(比在水中大2倍)肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第13頁利用去污劑使與DNA結(jié)合蛋白質(zhì)變性，而與DNA分離，本試驗(yàn)使用去污劑是SDS；利用蛋白質(zhì)不溶于氯仿-異丙醇，而DNA卻溶解于其中性質(zhì)，將蛋白質(zhì)除去；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中一些物質(zhì)則能夠溶于酒精。利用這一原理，能夠深入提取出含雜質(zhì)較少DNA。肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第14頁試驗(yàn)材料、試劑與器材：試驗(yàn)材料：新鮮豬肝試劑1）溶液A0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA-Na2。2）溶液B0.015mol/LNaCl-0.0015mol/L檸檬酸三鈉。3）溶液C1.5mol/LNaCl-0.15mol/L檸檬酸三鈉。4）溶液D3mol/L乙酸鈉-0.001mol/LEDTA-Na2。5）5mol/LNaCl。6）250g/LSDS。7）氯仿：異丙醇=24：1（V/V）。8）乙醇（70%、80%、95%、無水）。肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第15頁2.器材勻漿器或研缽研桿移液槍離心機(jī)天平恒溫水浴箱玻璃棒解剖剪及鑷子50ml離心管等肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第16頁離心前請(qǐng)兩兩離心管配平，對(duì)稱放置。肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第17頁⑴旋轉(zhuǎn)拇指按鈕設(shè)置吸收溶液體積值，數(shù)字要完整地出現(xiàn)在顯示窗中；⑵套上槍頭，旋緊；⑶垂直持握可調(diào)式移液器用大拇指按至第一檔；⑷將槍頭插入溶液，漸漸松開大拇指，使其復(fù)原；⑸將可調(diào)式移液器移出液面，必要時(shí)可用紗布或?yàn)V紙拭去附于槍頭表面液體(注意:不要接觸槍頭孔口)；⑹排放時(shí)，重新將大拇指按下，至第—檔后，繼續(xù)按至第二檔以排空液體。注意：移取另一樣品時(shí)，按卸尖按鈕棄掉吸頭并更換新吸頭。旋轉(zhuǎn)按鈕設(shè)置體積時(shí)，絕對(duì)不能超出每個(gè)移液器最大值，扭過頭。肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第18頁1.將肝臟置于研缽中，搗碎，并加入5ml溶液A。制成勻漿后，置于50ml離心管中，5000rpm離心8min。2.棄上清，加入溶液A4ml，然后滴加250g/LSDS溶液0.3ml，邊加邊用玻棒攪拌。3.加完后，置于60℃水浴保溫5min（不停攪拌），取出冷至室溫。4.加入5mol/LNaCl溶液1.0ml，攪拌5min，加入約一倍體積氯仿：異丙醇=24：1混合液，即5.3ml，振搖5min，離心8min（5000r/min）。小心吸收上清液至一潔凈50ml離心管中，記下體積，然后加入1.5倍體積95%乙醇，邊加邊用玻璃棒遲緩纏繞，DNA絲狀物即纏在玻璃棒上。操作步驟：肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第19頁5.將DNA粗制品置于溶液B2.7ml中，再加入溶液C0.3ml，攪勻，加入1倍體積氯仿：異丙醇=24：1混合液即3ml，振搖5min，離心8min（5000r/min），取上清，加入1.5倍體積95%乙醇，DNA即沉淀析出。離心8min（5000r/min），棄上清，沉淀為粗DNA。6.將上步所得沉淀物溶于溶液B中，加入溶液D0.3ml，攪勻。再加入氯仿：異丙醇=24：1混合液1.6ml，振搖，再加入1倍體積95%乙醇，邊加邊攪，取出絲狀物DNA。肝臟dna的提取專題知識(shí)講座第20頁