經(jīng)口急性毒性實驗

經(jīng)口急性毒性實驗經(jīng)口急性毒性實驗第1頁急性毒性試驗試驗動物選擇（物種和品系，年紀和體重，性別，分組，預(yù)檢，禁食）(who?)受試物（what?)染毒方法(how?)劑量選擇（how?)毒性作用觀察(ending)經(jīng)口急性毒性實驗第2頁

一、試驗?zāi)繕?.學(xué)習(xí)急性毒性試驗試驗設(shè)計標準2.掌握灌胃技術(shù)，隨機分組方法3.掌握LD50計算方法4.觀察和描述受試物中毒特征5.掌握急性毒性分級標準經(jīng)口急性毒性實驗第3頁急性毒性作用：指機體一次接觸或二十四小時內(nèi)屢次接觸化學(xué)物后在短期（最長到14天）內(nèi)所發(fā)生毒性效應(yīng)，包含普通行為、外觀改變、大致形態(tài)改變以及死亡效應(yīng)。經(jīng)口急性毒性實驗第4頁

LD50：半數(shù)致死劑量

指導(dǎo)起一組受試試驗動物半數(shù)死亡劑量。常見以表示急性毒性大小。其值越小，表示外源化學(xué)物毒性越強；反之，毒性越低。

LD50是經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)計算得到毒性參數(shù)，是一個統(tǒng)計量，受試驗動物個體易感性差異影響較小，所以是最主要急性毒性參數(shù)。經(jīng)口急性毒性實驗第5頁二、試驗原理

選擇健康試驗動物，依據(jù)體重按隨機分組方法，依據(jù)LD50計算設(shè)計標準將動物分成數(shù)個染毒組。給予受試物后，了解動物所產(chǎn)生急性毒性反應(yīng)及其嚴重程度，中毒死亡特征以及可能死亡原因，觀察受試物毒性反應(yīng)與劑量關(guān)系，求出半數(shù)致死劑量（LD50），并依據(jù)LD50值將受試物進行急性毒性分級。此次試驗采取改進寇氏法。改進寇氏法：利用劑量對數(shù)與死亡率呈S型曲線而設(shè)計方法。要求以下：

每個染毒劑量組動物數(shù)相同，各劑量組組距呈等比級數(shù)，死亡率呈正態(tài)分布，最低劑量組死亡率<20％，最高劑量組死亡率>80%。經(jīng)口急性毒性實驗第6頁三、材料和試劑

1.試驗動物：健康成年小鼠，昆明種，普通級，雌雄各60只2.器材：灌胃針，注射器，吸管，容量瓶，滴管，動物體重秤等3.試劑：受試物為1.3g/ml敵敵畏油溶液（湖北荊州），植物油，苦味酸（染色標識）。經(jīng)口急性毒性實驗第7頁四、操作步驟1.試驗動物選擇：昆明種小鼠，雌雄各60（早晨）2.試驗動物隨機分組和標識（早晨）3.劑量設(shè)計及受試物配制（早晨）4.經(jīng)口染毒（下午）5.中毒體征和動物死亡情況觀察統(tǒng)計（下午）6.LD50計算（次日下午）7.結(jié)果評價、完成實習(xí)匯報（次日下午）經(jīng)口急性毒性實驗第8頁

雌雄分開分組，每種性別分6組，每組10只1.動物稱重：按體重分在不一樣籠中待分組

<16g,16g~,18g~,20g~,22g~,>24g2.隨機分組方法每種性別隨機分為6組：A、B、C、D、E，F(xiàn),每輪分別從籠中取一只動物按以下次序到各組，直到動物取完。(雌雄分別分組）第一輪：A、B、C、D、E、F

第二輪：B、C、D、E、F、A

第三輪：C、D、E、F、A、B

第四輪：D、E、F、A、B、C

第五輪：E、F、A、B、C、D

第六輪：F、A、B、C、D、E......

雌雄各5組為劑量組，各剩一組作為溶劑對照（只灌植物油）和備用。分完組后在籠子上做好標識，動物暫不標識，下午灌胃前再標識。

試驗動物隨機分組

經(jīng)口急性毒性實驗第9頁

劑量設(shè)計預(yù)試驗得出LD100、LD0

，各設(shè)置五個劑量組，n=5i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)，k=10i雌性：LD100=240mg/kgLD0=90mg/kg雄性：LD100=250mg/kgLD0=100mg/kg經(jīng)口急性毒性實驗第10頁改進寇氏法1、劑量設(shè)置：雌雄，等比數(shù)級，灌胃容量：0.1ml/10g雌LD100=240mg/kg,LD0=90mg/kg,k=1.28

雄LD100=250mg/kg,LD0=100mg/kg,k=1.26

㈠雌性5個劑量組

各組濃度㈡雄性5個劑量組

各組濃度

240mg/Kg24mg/ml250mg/kg25mg/ml

187.5mg/Kg18.8mg/ml198.4mg/kg19.8mg/ml

146.5mg/Kg14.7mg/ml157.4mg/kg15.7mg/ml

114.4mg/Kg11.4mg/ml125.0mg/kg12.55mg/ml

90mg/Kg9mg/ml100mg/kg10mg/ml各組濃度＝各組劑量/灌胃容量例雌性最高劑量組濃度＝最高劑量/灌胃容量＝240mg/kg/0.1ml/10g＝24mg/ml2、每組實際需要量V＝最終體積＋損耗量＝動物數(shù)×平均體重×灌胃容量＋損耗量＝10×25g×0.1ml/10g+2.5ml＝5ml3、雌性最高劑量組溶液(即母液)：雄性最高劑量組溶液（母液）：

24mg/ml配置22.9ml25mg/ml配制24.2ml雌A＝V*K/(K-1)雄A=V*K/(K-1)＝5*1.28/(1.28－1)=5*1.26/(1.26-1)＝22.9ml=24.2ml4、下一組溶液配置：等比稀釋法A*（1/K）雌性=A×（1/k）=22.9×(1/1.28)=17.9ml雄性=A×（1/k）=24.2×(1/1.26)=19.2ml從最高劑量組溶液Aml中取出5ml,作為高劑量組。剩下(A-5)ml,加油5ml，混勻后，再從中取出5ml作為下一個劑量組，依次類推，完成時，最低劑量組體積為A，其余各組體積均為5ml.經(jīng)口急性毒性實驗第11頁經(jīng)口染毒1.稱重并標識:(每組10只）頭，背，尾，右前，右中，右后，左后，左中，左前，全白2.灌胃：0.1ml/10g3.中毒體征和動物死亡情況觀察（中毒表現(xiàn)參考教材《毒理學(xué)基礎(chǔ)》P123）

經(jīng)口急性毒性實驗第12頁

中毒體征和動物死亡情況觀察1、中毒過程：潛伏期、中毒期、恢復(fù)期或死亡時間（只需統(tǒng)計中毒出現(xiàn)時間＆死亡時間）2、中毒癥狀：參考《毒理學(xué)基礎(chǔ)》P123，表6-13、死亡判斷：呼吸、心跳停頓，瞳孔擴散4、尸體解剖：目標判斷發(fā)生毒作用靶器官，排除動物意外死亡經(jīng)口急性毒性實驗第13頁經(jīng)口急性毒性實驗第14頁

★急性毒性試驗原始統(tǒng)計（14天）

受試物名稱：敵敵畏

受試物性狀：乳油

受試物起源：毒理試驗室

動物種屬品系：小鼠，昆明種

動物起源：同濟醫(yī)學(xué)院試驗動物中心

染毒路徑：經(jīng)口灌胃室溫：日期：

劑量組別動物性別體重染毒量染毒體征及死亡（mg/kg）編號（g）(ml)時間出現(xiàn)時間時間試驗操作者：試驗統(tǒng)計者：經(jīng)口急性毒性實驗第15頁★

LD50計算小鼠經(jīng)口染毒死亡情況（14天）經(jīng)口急性毒性實驗第16頁

結(jié)果計算與分析

計算公式：m=lgLD50＝Xk－i（∑p－0.5）

Sm=

式中

Xk：最大劑量對數(shù)值

q：存活率

∑p：各劑量組死亡率總和

n：各組動物數(shù)

Sm：標準差

i:相鄰兩劑量組之對數(shù)劑量差值

lgLD50及95%可信區(qū)間=m±1.96*Sm

反對數(shù)求出LD50及95%可信區(qū)間

LD50：注明動物種屬，品系，性別，路徑，受試物純度經(jīng)口急性毒性實驗第17頁經(jīng)口急性毒性實驗第18頁等級劇毒高毒中等毒低毒微毒大鼠經(jīng)口LD50(mg/kg)≤55~50~500~>5000

急性毒性評價我國農(nóng)藥急性經(jīng)口毒性分級

/Article_Show.asp?ArticleID=659經(jīng)口急性毒性實驗第19頁LD50意義標準化化學(xué)物毒作用強度，評價其對機體毒性大小，比較不一樣化學(xué)物毒性大小；為其它毒理試驗設(shè)計提供參考；比較不一樣路徑LD50值，取得生物利用度信息；推測人類致死劑量以及中毒后體征，為臨床中毒治療提供參考。經(jīng)口急性毒性實驗第20頁實習(xí)匯報要求一、目標意義二、試驗原理三、試驗材料（試驗動物，受試物）及儀器四、試驗步驟(隨機分組，試劑配制）五、試驗結(jié)果（包含兩個表、計算結(jié)果）六、結(jié)果評價經(jīng)口急性毒性實驗第21頁1、說明受試物基礎(chǔ)情況（名稱、純度、狀態(tài)等）和配制方法；2、試驗動物種屬、等級。試驗前動物禁食情況和健康情況；3、染毒劑量（兩人小組）和動物分組，體重范圍；4、染毒時間，染毒連續(xù)時間，