分子流行病學(xué)

分子流行病學(xué)

MolecularEpidemiology

流行病學(xué)教研室王安輝1第1頁主要內(nèi)容分子流行病學(xué)為何產(chǎn)生？動力分子流行病學(xué)如何產(chǎn)生？條件分子流行病學(xué)是什么？

定義分子流行病學(xué)做什么？任務(wù)分子流行病學(xué)如何做？辦法2第2頁一、分子流行病學(xué)為何產(chǎn)生？實踐需求是學(xué)科發(fā)展主線動力疾病防治中新問題分子生物學(xué)發(fā)展

動力3第3頁暴露疾病吸煙MolecularEpidemiology肺癌BlackBoxBlackBox4第4頁

疾病“冰山現(xiàn)象”健康者亞臨床者患者“海平面”5第5頁二、分子流行病學(xué)如何產(chǎn)生？分子生物學(xué)發(fā)展分子遺傳學(xué)發(fā)展生物與化學(xué)分析技術(shù)發(fā)展6第6頁分子生物學(xué)技術(shù)突破DNA雙螺旋構(gòu)造限制性內(nèi)切酶重組DNA技術(shù)DNA堿基序列測定(1980)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（1987Mullis)7第7頁8第8頁9第9頁10第10頁G050035（肺腺癌）－EGFR－Exon21

L833VandH835L

T2497GL833V

A2504TH835L

11第11頁發(fā)展歷程分子流行病學(xué)產(chǎn)生于20世紀(jì)70年代，發(fā)展?fàn)畲笤?0年代1972年，Kilbourne提出“流感分子流行病學(xué)”1977年,法國Higginson提出應(yīng)用精細(xì)技術(shù)進(jìn)行生物材料流行病學(xué)研究12第12頁1986年，關(guān)鍵是利用試驗室辦法和分析流行病學(xué)，查明環(huán)境和宿主病因1993年，Schulte提出流行病學(xué)中應(yīng)用生物標(biāo)志或生物學(xué)測量功能定義1996年，測量作為暴露和效應(yīng)生物標(biāo)志即信息大分子如DNA、RNA和蛋白質(zhì)13第13頁國內(nèi)1988年，從基因水平分析病原體特性，處理傳染源和傳輸途徑等流行病學(xué)問題，輪狀病毒腹瀉、大腸桿菌腹瀉等1992年，從分子至基因水平上研究醫(yī)學(xué)事件分布及其決定原因和調(diào)控伎倆學(xué)科14第14頁分子流行病學(xué)從九十年代早期開始逐漸引入到了我國流行病學(xué)教學(xué)中1998年由第四軍醫(yī)大學(xué)主編出版了國內(nèi)首本《分子流行病學(xué)》專著15第15頁人類基因組流行病學(xué)

（humangenomeepidemiology,HuGE）應(yīng)用流行病學(xué)與基因組信息相結(jié)合研究辦法，開展以人群為基礎(chǔ)研究，評價基因組信息（基因或基因變異及其對應(yīng)編碼產(chǎn)物）對人群健康和疾病流行病學(xué)意義，是遺傳流行病學(xué)與分子流行病學(xué)交叉前沿領(lǐng)域16第16頁分子流行病學(xué)現(xiàn)狀研究內(nèi)容愈加豐富：從研究傳染病開始，拓展到流行病研究更多領(lǐng)域研究伎倆越來越多：芯片技術(shù)、色譜分析、蛋白質(zhì)譜分析等應(yīng)用范圍不停擴(kuò)大：傳染病、非傳染病、健康有關(guān)事件等17第17頁三、分子流行病學(xué)是什么?分子流行病學(xué)是說明疾病與健康狀態(tài)有關(guān)標(biāo)志（或分子事件）在人群和生物群體中分布及其影響原因，并研究防治疾病、促進(jìn)健康策略與措施科學(xué)“分子”指利用分子生物學(xué)技術(shù)辦法來處理流行病學(xué)中問題18第18頁國際上定義Theterm“molecularepidemiology”maybeusedtodescribesuchanApproach:theincorporationofmolecular,cellular,andotherbiologicmeasurementsintoepidemiologicresearch.

19第19頁生物學(xué)標(biāo)志

(biologicalmarkers，biomarkers)1、是指從暴露到疾病各個連續(xù)過程中可測量、能反應(yīng)構(gòu)造和功能變化多種細(xì)胞、生物化學(xué)、免疫學(xué)遺傳學(xué)或生理功能等2、分子流行病學(xué)關(guān)注反應(yīng)機(jī)體在分子水平微小變化，因此有人把能反應(yīng)分子水平、基因水平DNA損傷、變異和體現(xiàn)異常蛋白分子生物學(xué)標(biāo)志稱為分子生物學(xué)標(biāo)志(molecularbiomarkers)

20第20頁主要生物學(xué)標(biāo)志按從暴露到疾病連續(xù)事件分為1、暴露標(biāo)志(exposuremarker,EM)2、效應(yīng)標(biāo)志(effectivemarker)3、易感性標(biāo)志(susceptibilitymarker,SM)21第21頁1、暴露生物標(biāo)志

exposurebiomarker與疾病或健康狀態(tài)有關(guān)暴露原因生物標(biāo)志，稱為暴露標(biāo)志分為外暴露標(biāo)志和內(nèi)暴露標(biāo)志22第22頁外暴露標(biāo)志：是指暴露原因進(jìn)入機(jī)體之前標(biāo)志和劑量，如病毒、細(xì)菌、生物毒素、吸煙煙霧、環(huán)境物質(zhì)等內(nèi)暴露標(biāo)志：是指暴露原因進(jìn)入機(jī)體之后標(biāo)志；有人稱之為體內(nèi)劑量（internaldose）。如煙草中尼古丁(nicotine)代謝產(chǎn)物尿中可丁寧(cotinine)23第23頁體內(nèi)劑量標(biāo)志環(huán)境暴露物質(zhì)生物學(xué)標(biāo)標(biāo)志生物材料尼古丁可丁寧體液食物原料體液黃曲霉素食物亞硝胺化合物尿亞硝氨基酸24第24頁2、效應(yīng)標(biāo)志指宿主暴露后產(chǎn)生功能性或構(gòu)造性變化生物標(biāo)志，如突變基因、畸變?nèi)旧w、特異蛋白等包括疾病標(biāo)志（diseasemarker)健康狀態(tài)標(biāo)志（healthmarker）25第25頁健康狀態(tài)標(biāo)志(healthconditionmarker,HCM)早期生物效應(yīng)標(biāo)志(earlybiologicaleffectmarker,EBEM)構(gòu)造和功能變化標(biāo)志(alteredstructureandfunctionmarker,ASFM)26第26頁病理標(biāo)志(pathologicalmarker,PM)亞臨床態(tài)(sub-clinicalconditionmarker,SCCM)臨床疾病標(biāo)志(clinicaldiseasemarker,CDM)27第27頁健康狀態(tài)HCMEBEM亞健康狀態(tài)潛在疾病態(tài)ASFM亞臨床態(tài)SCCM臨界疾病態(tài)PM臨床態(tài)CDM28第28頁3、易感性標(biāo)志susceptibilitymarker宿主體內(nèi)在暴露之前就已存在遺傳性或取得性、決定著因暴露而造成疾病發(fā)生也許性可測量指標(biāo)易感性與暴露至疾病發(fā)生整個過程中每一種步驟都有關(guān)系，是決定暴露至發(fā)病整個進(jìn)程主要原因29第29頁健康狀態(tài)HCMEBEM亞健康狀態(tài)潛在疾病態(tài)ASFM亞臨床態(tài)SCCM臨界疾病態(tài)PM臨床態(tài)CDM易感性30第30頁四、分子流行病學(xué)做什么？

任務(wù)(一)疾病病因探討大多是環(huán)境原因與遺傳原因同步起作用遺傳原因起主要作用疾病往往與基因有關(guān)很多與環(huán)境原因有關(guān)疾病，也經(jīng)常需從基因方面去研究，由于環(huán)境原因能夠通過宿主基因突變或異常體現(xiàn)引發(fā)疾病分子流行病學(xué)研究有著非常主要作用31第31頁(二)危險因子致病機(jī)制研究

癌癥發(fā)病分子流行病學(xué)研究是個典型例子腫瘤病因十分復(fù)雜，是環(huán)境和宿主多原因作用成果32第32頁大腸癌發(fā)生基因異常模式正常上皮上皮形成過度早期腺癌中期腺癌晚期腺癌癌轉(zhuǎn)移5q變形或缺失

17q-P缺失p53K-ras17-變異

18q缺失DCCDNA低甲基化33第33頁從分子水平看腫瘤發(fā)生與發(fā)展與癌基因激活和抑癌基因失活密切有關(guān)但究竟是哪些危險原因起作用，其作用機(jī)制是什么分子流行病學(xué)研究將會提供深入證據(jù)34第34頁腫瘤發(fā)生過程促進(jìn)promotion啟動initiation轉(zhuǎn)化inversion發(fā)展progression35第35頁例如，大量流行病學(xué)調(diào)查顯示，黃曲霉毒素（aflatoxin,AFT）是肝癌發(fā)生主要危險原因深入分子流行病學(xué)研究發(fā)覺，AFT可在體內(nèi)氧化酶作用下，形成AFT環(huán)氧化物，其易與肝細(xì)胞內(nèi)DNA分子N7鳥嘌呤殘基結(jié)合，從而造成DNA損傷36第36頁另外，研究還發(fā)覺肝臟解毒酶之一，谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶（GST）在肝癌患者肝組織中T1基因缺失百分比遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組37第37頁(三)疾病易感性測定

近來分子生物學(xué)與免疫學(xué)研究發(fā)覺，猶如傳染病同樣，機(jī)體對慢性病也同樣存在著易感性，且往往與個體某些基因型別或序列或其體現(xiàn)產(chǎn)物有關(guān)，假如與遺傳有聯(lián)系，往往稱之為遺傳易感性

38第38頁1987年國外學(xué)者發(fā)覺了一種新病癥，家族性載脂蛋白-100缺陷由于其低密度脂蛋白受體結(jié)協(xié)力下降，發(fā)生高脂血癥39第39頁40第40頁載脂蛋白-100第10、708位堿基突變，結(jié)協(xié)力下降建立了等位基因特異性PCR檢測這個突變位點表白這些攜帶者為冠心病易感者流行病學(xué)研究，顯示此突變攜帶者中，50歲時男性40%、女性20%患冠心病41第41頁(四)流行規(guī)律研究

傳染病流行規(guī)律在傳輸范圍確實定；傳輸途徑判斷與傳染源追索方面；分子流行病學(xué)能夠發(fā)揮無與倫比作用42第42頁1.傳播范圍確定按照傳染病流行病學(xué)基本理論，在一次爆發(fā)或流行中，其受染范圍確實定應(yīng)根據(jù)如下標(biāo)準(zhǔn)在爆發(fā)或流行期間，有共同或有效暴露史，通過一種平均潛伏期發(fā)病或出現(xiàn)急性感染生物學(xué)標(biāo)志可判定為受染者，然后總計受染人員，結(jié)合這些人員活動區(qū)域以確定受染或流行包括范圍43第43頁可是，過去測定生物學(xué)標(biāo)志主要是屬于血清學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)范圍，缺乏基因型標(biāo)志，因而也許出現(xiàn)錯誤判斷44第44頁舉例：以色列海法市(Haifa)Rambam醫(yī)學(xué)中心急性乙型肝炎爆發(fā)分子流行病學(xué)調(diào)查就是典型一種例子1986年6月7日至26日有4例爆發(fā)性乙型肝炎(患者①-④)入院，均死亡8月17日又有1例(患者⑥)同樣入院后病故通過血清學(xué)調(diào)查又發(fā)覺1例亞臨床乙肝(患者⑤)45第45頁流行病學(xué)調(diào)查發(fā)覺：患者①-⑥于同年4月23日至6月28日同住在一種病房，有共同暴露史，經(jīng)描述性與分析性流行病學(xué)調(diào)查，確定這是一次乙肝爆發(fā)流行傳輸時間很也許在4月29日傳染起源為一名HBsAg攜帶者，當(dāng)初也住在同一病房46第46頁研究者此后又考慮到病人在此爆發(fā)中5名均為致死性爆發(fā)性肝炎，且潛伏期非常短而傳染起源，即那名HBsAg攜帶者為抗HBe陽性慢性肝病患者，故決心弄清其基因有否特殊突變

47第47頁成果意外地發(fā)覺傳染源、病人①-④、⑥這6人HBV前C區(qū)1898與1901位核苷酸均發(fā)生了點突變，另外在X、前C與C區(qū)尚有很多突變而患者⑤與4名對照患者(4名該醫(yī)學(xué)中心急性乙肝)病毒株卻無此突變

48第48頁成果提醒

本次爆發(fā)是由HBV突變株引發(fā)病人⑤不是這次爆發(fā)中病例，引發(fā)其發(fā)病病毒株不一樣于傳染源與其他5名病人49第49頁2.傳輸途徑判定

以往，傳染病流行中傳輸途徑或傳輸媒介調(diào)查一般使用排除法，同步盡也許在媒介物中分離到引發(fā)流行病原體或檢測到病原學(xué)標(biāo)志近來分子流行病學(xué)研究引入了某些新技術(shù)，如分子進(jìn)化診斷(molecularevolutionarydiagnosis)50第50頁3.傳染源追索

判定傳染起源或兩人之間傳輸關(guān)系應(yīng)符合如下4條標(biāo)準(zhǔn)A(傳染源)與B(受染者)接觸是有效接觸接觸發(fā)生在A傳染期內(nèi)B發(fā)病時間是在暴露后該病最短與最長潛伏期之間A與B受染致病血清學(xué)型別一致

如今看來，第④條應(yīng)當(dāng)用基因型別來替代

51第51頁(五)防制措施研究

1.

傳染病預(yù)防由于對傳輸與流行范圍確實定，傳輸途徑、傳輸媒介與因子以及傳染起源推斷更為精確，因此提出控制措施更有針對性，更有成效52第52頁傳染病預(yù)防中最可靠伎倆是疫苗接種但在疫苗預(yù)防注射方面尚存在某些問題，如接種效果，接種副作用近來由于分子流行病學(xué)研究進(jìn)展，對某些問題有了比較清楚理解53第53頁2.非傳染病預(yù)防由于分子流行病學(xué)不但研究疾病危險原因，并且研究其引發(fā)疾病整個過程中所有步驟因此，這就為疾病預(yù)防尤其是第二級預(yù)防采取針對性措施奠定了科學(xué)基礎(chǔ)

54第54頁(六)其他方面研究除了上述五個方面研究范圍外，分子流行病學(xué)在傳染病病原體進(jìn)化、人群健康影響原因及其遺傳背景等方面研究也將發(fā)揮主要作用55第55頁五、分子流行病學(xué)怎么做？辦法

分子流行病學(xué)在某種意義上講，是一種流行病學(xué)宏觀與試驗室微觀結(jié)合辦法學(xué)，需要現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查研究與試驗室先進(jìn)檢測技術(shù)相結(jié)合因此，分子流行病學(xué)研究辦法大體能夠分為二大類：試驗室技術(shù)與流行病學(xué)現(xiàn)場研究辦法56第56頁(一)試驗室技術(shù)

分子流行病學(xué)中使用試驗室技術(shù)相稱廣泛，由于只要檢測與致病因子及其致病機(jī)制中有關(guān)生化、生理、免疫、分子、遺傳等生物學(xué)標(biāo)志技術(shù)均可被應(yīng)用于分子流行病學(xué)研究同步需要指出是，現(xiàn)今某些分子技術(shù)有也許在將來被取代而廢棄57第57頁常用是：血清學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)等常用技術(shù)操作：ELISA，RIA、免疫組織化學(xué)、質(zhì)粒提取、限制性內(nèi)切酶圖譜分析、DNA雜交、多聚酶鏈反應(yīng)、分子克隆、核酸序列分析等58第58頁(二)現(xiàn)場流行病學(xué)研究辦法在傳統(tǒng)流行病學(xué)研究中，結(jié)合檢測某些生物學(xué)標(biāo)志，以從分子水平更深層次揭示病因聯(lián)系或致病因子致病機(jī)制，是目前比較常見分子流行病學(xué)研究模式59第59頁現(xiàn)場流行病學(xué)辦法描述性研究分析性研究：病例對照研究、隊列研究（病例-病例研究、巢式病例對照研究）試驗性研究60第60頁目前比較常用有下面2種巢式(套式、嵌入式)病例對照研究(nestedcasecontrolstudy)病例-病例研究(case-casestudy)61第61頁1.巢式病例對照研究

(nestedcasecontrolstudy)運作開始是按隊列研究方式進(jìn)行：選擇一隊列，搜集基線資料采集所需研究生物學(xué)標(biāo)志組織或體液標(biāo)本儲存?zhèn)溆萌缓箅S訪到出現(xiàn)能滿足病例對照研究樣本量病例數(shù)為止62第62頁把這些病例作為病例組，按配比條件，從同一隊列中選擇1或數(shù)個非病例作對照，抽出病例與對照基線資料并檢測搜集標(biāo)本，進(jìn)行病例對照研究63第63頁2.病例-病例研究(case-casestudy)在病例對照研究病例組中，臨床類型能夠不一樣，如腦卒中有出血型、缺血型，冠心病有心梗型、無心梗型某些生物學(xué)標(biāo)志往往也是不均一，即部分病例有某種生物學(xué)標(biāo)志，而其他則沒64第64頁那么就可把不一樣臨床類型或具有標(biāo)志這些病例與無標(biāo)志病例，按病例對照研究方式處理資料，以探討不一樣臨床類型危險原因差異或者這個生物學(xué)標(biāo)志與該疾病其他危險原因之間關(guān)系和互相作用

65第65頁傳染病研究中應(yīng)用

既往傳統(tǒng)流行病學(xué)研究已經(jīng)表白HCV可經(jīng)微量血暴露而傳輸，不過傳輸確實切證據(jù)尚難得到Suzuki等通過3對發(fā)生針刺事故當(dāng)事人HCV感染分子進(jìn)化分析研究，在分子水平上找到了易感者可經(jīng)微量血暴露而感染HCV直接證據(jù)，并且為傳輸途徑流行病學(xué)研究提供了新辦法，更主要是使人們看到了分子流行病學(xué)研究意義66第66頁研究者首先通過流行病學(xué)調(diào)查辦法研究了3例由于針刺事故而發(fā)生HCV感染患者(A2、B2和C2)詳細(xì)感染過程67第67頁第一對（A1-A2）第1個批示病例(A1)為1名24歲因輸血而受染慢性HCV感染男性患者(抗HCV和HCVRNA均陽性)，受染者(A2)是1名24歲女護(hù)士A2在給A1采血時左手食指被針頭刺破，當(dāng)即鮮血流出，她立即清洗了傷口，并報告了醫(yī)院68第68頁如何調(diào)查？在事故發(fā)生當(dāng)天檢測肝功未發(fā)覺異常，抗HCV和HCVRNA均陰性但2個月后發(fā)生了急性丙型肝炎，并轉(zhuǎn)為慢性69第69頁第2對（B1-B2）第2個批示病例(B1)為1名59歲肝硬化肝癌男性患者(抗HCV和HCVRNA均陽性)，受染者(B2)是1名35歲內(nèi)科醫(yī)生

70第70頁當(dāng)護(hù)士給B1抽肘靜脈血時，B1肝性腦病發(fā)作，護(hù)士只好拔出針，并放在病床旁椅子上，這時B2過來幫忙，不慎坐在該椅子上深度扎傷左臀部雖然在后來隨訪時無顯著臨床癥狀，但檢測特異性生物學(xué)標(biāo)志發(fā)覺B2在2個月后發(fā)展為慢性HCV感染

71第71頁第3對（C1-C2）第3個批示病例(C1)為1名68歲肝硬化肝癌男性患者(抗HCV和HCVRNA均陽性)，受染者(C2)是1名43歲無癥狀HBV攜帶護(hù)士72第72頁C2在給C1插靜脈導(dǎo)管后拔針時扎傷左手中指與無名指間手掌，當(dāng)初出現(xiàn)流血，便向院方作了報告C2在2個月后發(fā)生了急性丙型肝炎，并轉(zhuǎn)為慢型73第73頁為了說明A1與A2、B1與B2和C1與C2之間傳輸關(guān)系和方向，分子流行病學(xué)如何研究？74第74頁生物學(xué)標(biāo)志抗-HCV：ELISA法HCVRNA：巢式RT-PCR法，引物選自5′端高保守區(qū)

75第75頁選擇HCV高變異區(qū)E2區(qū)進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增、克隆、測序，然后進(jìn)行種系發(fā)生分析(phylogenetictreeanalysis)基因序列差異估計(estimationofnucleotidesequencediversity)“靴襻”分析(bootstrapanalysis)。結(jié)合計算機(jī)輔助分析76第76頁種系發(fā)生分析顯示該3對當(dāng)事人均為HCV1b基因型；進(jìn)化距離非常接近分析3對當(dāng)事人E2區(qū)序列多克隆、數(shù)次反復(fù)試驗成果，并結(jié)合統(tǒng)計分析表白：同一對當(dāng)事人不一樣克隆間序列變異存在著非常密切同源進(jìn)化關(guān)系77第77頁從本研究案例可看出傳統(tǒng)流行病學(xué)研究僅能明確暴露方式與也許傳染源通過與分子流行病學(xué)研究結(jié)合，可深入從分子水平上為微量血傳輸提供可靠證據(jù)，并精確地判斷傳染起源

78第78頁非傳染病研究中應(yīng)用

近年來，伴隨分子流行病學(xué)發(fā)展，使人們對各類致癌物及其作用于人體后所產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng)和宿主易感性，尤其是環(huán)境和遺傳對腫瘤發(fā)生互相作用有了愈加深入結(jié)識，從而有利地促進(jìn)了腫瘤防治

79第79頁80第80頁分子流行病學(xué)在臨床中應(yīng)用美國國家衛(wèi)生署（NCI）在2023年終開始了“人類癌癥基因組測序”宏偉計劃，估計用十年時間完成主要癌癥基因測序及其序列基礎(chǔ)上診斷和基因靶向藥品治療81第81頁基因測序技術(shù)在癌癥基因研究及臨床治療領(lǐng)域應(yīng)用更加快速可靠地對癌癥進(jìn)行診斷,對其發(fā)生內(nèi)在分子機(jī)理也將有更深入了解同時也將對癌癥治療藥物開發(fā)提供極大幫助82第82頁與臨床醫(yī)學(xué)及病理密切有關(guān)基因檢測項目

P53BRCA1、BRCA2APCK-rasApoEEGFRC-kitFVYMDDHNPCC片段分析尿路腫瘤微衛(wèi)星片段分析83第83頁84第84頁P53基因P53基因定位于17號染色體短臂17p13.1，具有11個外顯子和10個內(nèi)含子，編碼由393個氨基酸組成，分子量為53KD核酸蛋白，包括DNA結(jié)合、轉(zhuǎn)錄和激活構(gòu)造域。P53幾乎參與了所有惡性腫瘤和癌變腫瘤發(fā)生和演進(jìn)過程。P53基因病理變化主要有突變、重排、缺失等。突變是主要致病方式，最常見突變部位在第5－9外顯子區(qū)域。85第85頁臨床應(yīng)用

腫瘤診斷：肝癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、腸癌、前列腺癌、肺癌、食道癌、卵巢癌、腦腫瘤、軟組織肉瘤、骨肉瘤、白血病、淋巴瘤。癌前及癌有關(guān)家族：萎縮性胃炎、大腸息肉、腺瘤、宮頸異型增生、乙肝和丙肝、子宮內(nèi)膜不典型增生、痰、膀胱、糞便中異型細(xì)胞、乳腺囊性增生癥及腺病等、骨髓異常增生綜合癥、低惡肉瘤、淋巴造血疾病等。86第86頁藥品分子靶點和耐藥基因：P53蛋白丟失，腫瘤細(xì)胞侵襲性增強(qiáng)，化療凋亡作用受抑。某些肉瘤如腦腫瘤和癌分子藥品基因靶點治療和化療效果不佳。臨床預(yù)后分析：P53基因突變癌癥患者生存預(yù)期短，易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移且家族血親之間具腫瘤易感性。87第87頁BRCA1基因

BRCA1外顯子約5.2KB全長序列，可提成44項完成全基因組檢測。BRCA2基因位于13q12-13，BRCA1抑癌基因位于染色體17q21，是目前極受重視與乳腺癌明確有關(guān)易感基因，BRCA癌基因異常者在一生中患乳腺癌理論概率為100％。

88第88頁臨床應(yīng)用BRCA1基因突變：主要為乳腺癌、卵巢癌，同步也有胰腺癌、胃癌、膽囊癌、惡性黑色素瘤、白血病、前列腺癌、子宮癌等。其中60％為1-5bp缺失框移，19％為插入，14％為無義突變，也有大缺失或插入及剪接子突變。伴卵巢癌乳癌家系約有80%是由BRCA1異常BRCA2基因突變：主要與家族性乳癌和男性乳癌發(fā)病有關(guān)，另也有上述其他系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)生概率。89第89頁癌分化：BRCA1突變及雜合子缺失與乳癌中－低分化生物學(xué)行為有關(guān)，臨床上多體現(xiàn)為Ⅲ－Ⅳ期及早－晚期患者。癌前及癥前診斷：主要用于乳癌、卵巢癌及消化系統(tǒng)癌癥家族患者基因突變檢測。90第90頁APC基因APC基因位于第五號染色體長臂（5q21-22），長達(dá)120KB，共有21個外顯子APC基因突變主要位于基因中段第9-11外顯子，其中密碼子第1061，1309突變占了20%?；颊呖纱涡虬l(fā)生1000個以上息肉，年紀(jì)輕，癌變早91第91頁APC基因前、后段基因突變與數(shù)量較少小息肉有關(guān)，發(fā)病年紀(jì)較晚?？砂橛欣w維瘤病，后者與第1444位密碼子突變有關(guān)。如在第386和1465位突變，對野生型APC基因干擾弱，息肉少，發(fā)病年紀(jì)較晚。APC基因突變分為有害（輕，中，重），多態(tài)性，和意義不明性。須結(jié)合病理形態(tài)診斷來評定基因突變臨床病理意義92第92頁家族性腺瘤性息肉?。‵AP）：APC致病基因突變，幾乎100%預(yù)示該家族組員息肉存在（WHO資料）惡變也許，需密切復(fù)查腸鏡病理檢查Gardner綜合征：除了腸腺瘤外，病人尚有表皮樣囊腫，骨瘤，牙疾和纖維瘤病特克綜合征（Turkotsyndrome）：多發(fā)性腸腺瘤伴腦髓母細(xì)胞瘤減性家族性腺瘤性息肉（AtteneuatedFAP）:腺瘤少于100個，發(fā)病晚，癌變率較低93第93頁其他：APC基因突變有關(guān)疾病和腫瘤尚有遺傳性大腸癌組織APC基因突變率高達(dá)70%-90%以上，散發(fā)性大腸癌組織中也有30%以上突變率.癌組織體細(xì)胞APC基因突變，意味著癌變早期分子事件，腫瘤亞克隆選擇，去分化惡性演進(jìn)，浸潤轉(zhuǎn)移耐藥等生物學(xué)行為暫未發(fā)生，預(yù)后尚好。肺癌、胃癌、食道癌、肝癌、乳腺癌等也有不一樣百分比APC基因突變。94第94頁注意事項：檢查材料主要是腸鏡病理活檢息肉或腫瘤組織，石蠟包埋病變組織，血液等。APC基因與NHPCC微衛(wèi)星不穩(wěn)定都是早期癌基因檢測互補項目，最佳結(jié)合應(yīng)用。大腸多發(fā)性腺瘤性息肉病APC基因突變測序，也可檢測胃癌，乳腺癌，胰腺癌及癌前病變和少數(shù)肉瘤APC癌基因突變。它反應(yīng)早期癌變趨勢。95第95頁Ras基因Ras基因家族由H-ras、K-ras和N-ras組成。我們檢測K-RAS最常突變第一外顯子點突變常位于第12、13、59或61密碼子處，不一樣ras基因突變在不一樣腫瘤中呈優(yōu)勢激活。96第96頁臨床應(yīng)用：

腫瘤診斷：K-ras突變：腸癌、胃癌、胰腺癌、肺癌等為主H-ras突變：急慢性淋巴造血系腫瘤為主N-ras突變:泌尿系腫瘤為主97第97頁癌前及家系檢查：癌前疾病患者ras基因突變提醒細(xì)胞早期惡性轉(zhuǎn)化癌病家族受檢者ras基因突變提醒正常細(xì)胞惡性演進(jìn)和癌變98第98頁ApoE基因APOE（載脂蛋白E）基因位于19q，全長3.7Kb，具有4個外顯子，產(chǎn)生APOE功能蛋白是低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白和乳糜微粒受體配基。既進(jìn)行脂質(zhì)代謝，也活化水解脂肪酶類。99第99頁APOE表型異?；颊唧w現(xiàn)為脂質(zhì)代謝疾?。ǜ吣懝檀及Y）、心腦血管病、高血壓、肥胖、糖尿病、腦卒中和冠心病、神經(jīng)再生退行性變（老年性癡呆）和免疫調(diào)整紊亂（橋本甲狀腺功能低下和腫瘤易感）、它汀降脂類耐藥及高血壓耐藥等。100第100頁APOE基因在正常人群中呈多態(tài)性體現(xiàn)，即人群中有不一樣APOE類型，造成人類發(fā)病種類和危險頻率呈顯著差異性APOE在同一基因座位有三個不一樣等位基因（ε2ε3ε4）可編碼成三個純合子（ε2/2，ε3/3、ε4/4）和三個雜合子（ε2/3、ε2/4ε3/4），形成6種不一樣基因型，從而體現(xiàn)出不一樣致病狀態(tài)101第101頁預(yù)報老年性癡呆發(fā)病率也許概率，尤其是家族性受檢者檢查高脂血癥發(fā)病和分型，治療療效和耐藥監(jiān)測腦血管病復(fù)發(fā)性出血（腦梗塞）并作出警示性預(yù)報監(jiān)測冠心病發(fā)病情況102第102頁監(jiān)測糖尿病和腎病發(fā)病情況對原發(fā)性高血壓可評定家族性發(fā)病，治療耐藥及內(nèi)臟器質(zhì)損害現(xiàn)象對絕經(jīng)和更年期婦女進(jìn)行激素替代治療。ε2基因者可使總膽固醇顯著升高，故需事先檢測APOE基因評價婦女絕經(jīng)期綜合征103第103頁ε4/4基因型者比ε3/4者老年癡呆尤其是血管型癡呆發(fā)病率更高，且發(fā)病年紀(jì)顯著提前，程度加重，對治療AD他克林類藥呈耐藥性，并且是早發(fā)冠心病中年猝死獨立致病因子。缺血性心腦血管?。↖CVD）也呈高發(fā)，對調(diào)脂他汀類呈耐藥性。ε4/4基因型者Ⅳ型高脂血癥顯著增高并與高TC、LDL-C和APOB水平密切有關(guān)。104第104頁ε3/4基因型者是高膽固醇血癥和遺傳易感性高危因子，發(fā)生心肌梗塞年紀(jì)提前，且老年性癡呆發(fā)病率比非ε4者高3倍以上。高血壓呈耐藥性。ε2/4基因型有中等量腦復(fù)發(fā)出血梗塞率和糖尿病腎病綜合癥發(fā)生率。高血壓呈一定耐藥性。105第105頁

ε3/3基因型者為缺血性腦血管病低發(fā)性保護(hù)因子，尚使保護(hù)性高密度脂蛋白呈高