克氏原螯蝦病例報告及培養(yǎng)條件優(yōu)化

克氏原螯蝦病例報告及培養(yǎng)條件優(yōu)化

克氏原蝦是目前養(yǎng)殖最廣泛的淡水溶菌蝦育種方法。嗜水氣單胞菌屬弧菌科,氣單胞菌屬,是一種重要的人畜魚共患病的病原菌。該菌廣泛存在于水環(huán)境中,可單獨(dú)或與其他致病菌一起協(xié)同感染多種水生爬行兩棲鳥類及哺乳類動物,并引發(fā)該動物全身性敗血癥或局部感染甚至死亡,也可引發(fā)人類食物中毒、腹瀉敗血癥以及局部的傷口感染等病癥。20世紀(jì)90年代以來,大量報道表明,嗜水氣單胞菌作為水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的主要細(xì)菌病致病菌之一,常引起我國淡水養(yǎng)殖魚類的暴發(fā)性敗血癥,并造成大量死亡,給淡水魚養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失1材料和方法1.1保溫箱與加冰樣品患病克氏原螯蝦樣品采自南京市某克氏原螯蝦養(yǎng)殖場,取典型患病樣品20只,平均體重30g,所有樣品均用保溫箱加冰保存。在取樣過程中,測量和記錄養(yǎng)殖池水的常規(guī)水質(zhì)指標(biāo),了解克氏原螯蝦的養(yǎng)殖過程、養(yǎng)殖管理,觀察和總結(jié)發(fā)病特征及流行情況。1.2優(yōu)勢菌落的分離純化取典型患病克氏原螯蝦,70%酒精進(jìn)行體表消毒后,按照無菌操作的方法,分別取其肝、鰓、心肌、神經(jīng)等,劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板,28℃恒溫培養(yǎng)48h后,挑取形態(tài)特征一致的優(yōu)勢菌落進(jìn)行分離純化3次,斜面保存。1.3u3000配合飼料充氧清污實(shí)驗(yàn)將健康克氏原螯蝦置于有效水體為1096cm×470cm×670cm的水族箱中暫養(yǎng)7d,實(shí)驗(yàn)水溫為(28±1)℃,日換水量約50%,定期投喂配合飼料,及時充氧清污。設(shè)置三組平行組及一組對照組,每組l0只蝦。代表菌株系從采回的患病克氏原螯蝦肝臟中分離純化獲得,實(shí)驗(yàn)編號LX-H20110710,菌株在普通營養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)36h后,每只蝦100μL(活菌濃度為2.1×101.4細(xì)菌的鑒定病原菌生理生化特征的測定及有關(guān)分類鑒定參考文獻(xiàn)進(jìn)行1.5藥敏膠片的貼放用高壓滅菌的棉簽蘸取擴(kuò)大培養(yǎng)后的菌液,均勻涂布于普通肉湯固體培養(yǎng)基上,為了保證涂布均勻,重復(fù)涂布3次,待水分晾干后,貼好藥敏紙片輕輕按壓,確保貼穩(wěn),防止掉落和移動,藥敏紙片需完全與培養(yǎng)基接觸,一個平皿貼7片紙片,中間1塊,其余6塊均勻分布其周圍。藥敏試驗(yàn)操作方法按2005年版CLSI/NCCLSM100-S15所述方法進(jìn)行。2結(jié)果2.1后期不攝食,應(yīng)激發(fā)病克氏原螯蝦在初期無明顯癥狀,后期不攝食,反應(yīng)遲鈍,應(yīng)激能力較弱;螯肢及附肢無力,無法支撐身體;肝胰腺顏色淡黃,腹節(jié)肌肉蒼白。2.2普通營養(yǎng)瓊物菌落的形態(tài)從采回病蝦的多處組織中均分離到優(yōu)勢度在95%以上的病原菌(命名為LX-H20110710),菌落形態(tài)、大小、顏色在普通營養(yǎng)瓊脂平板上均一致:菌落形態(tài)為邊緣薄,顏色較白,中間略隆起,顏色較黃,光亮濕潤,灰白色反光圓形菌落。該病原菌革蘭氏染色陰性,短桿狀,鞭毛染色后,觀察到鞭毛,能運(yùn)動,氧化酶陽性,葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣(具體指標(biāo)結(jié)果見表1),依據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(第九版)》及有關(guān)資料2.3mm為0.0+低度敏感將貼好藥敏紙片的培養(yǎng)皿置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)12~16h,觀察測量抑菌圈大小。抑菌圈≥21mm為高度敏感,11~20mm為中度敏感,6~10mm為低度敏感,6mm以下為不敏感。結(jié)果表明該菌對依諾沙星、美滿霉素、四環(huán)素、氯霉素、強(qiáng)力霉素、阿奇霉素、氨芐青霉素、紅霉素、慶大霉素、滅滴靈、環(huán)氟哌酸、氟哌酸、氟苯尼考、恩諾沙星高度敏感;對青霉素類、鹽霉素、鹽酸林可霉素、磺胺間甲氧嘧啶鈉、鹽酸環(huán)丙沙星、土霉素、諾克沙胂、桿菌肽鋅、黃霉素等不敏感;對表2中其他抗生素藥物中度敏感。3嗜歷史單胞菌的感染嗜水氣單胞菌可引起多種淡水魚類感染,由其導(dǎo)致的細(xì)菌性敗血癥在世界范圍內(nèi)廣泛分布。我國淡水養(yǎng)殖魚類的發(fā)病尤為嚴(yán)重,是我國養(yǎng)魚史上危害淡水魚的種類最多、危害魚的年齡范圍最大、流行地域最廣、流行季節(jié)最長、危害養(yǎng)魚水域最多、造成損失最大的一種急性傳染病該菌為一種人畜共患病原,人類感染了嗜水氣單胞菌主要表現(xiàn)為腹瀉,嚴(yán)重時可引起食物中毒,還可引起敗血癥、腦膜炎、肺炎及傷口感染等嗜水氣單胞菌存在很多血清型,不同物種間分離的致病菌株存在顯著差異,即使相同物種也存在不同耐藥性菌株,因此臨床用藥需建立在細(xì)菌的藥敏實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上。在本實(shí)驗(yàn)中,分離菌對氟苯尼考、