微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)（經(jīng)典版）課件

微生物的類群真菌:如酵母菌原生生物：?jiǎn)渭?xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等病毒:原核生物:

細(xì)菌、藍(lán)藻微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞1原核細(xì)胞課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)提供營(yíng)養(yǎng)和條件防止污染2一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)⑴碳源無(wú)機(jī)碳源：2CO、CO-、HCO3

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-有機(jī)碳源：牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。思考：微生物“吃”什么？1.基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽異養(yǎng)微生物⑵氮源＋

-無(wú)機(jī)氮源：NH4

、NO3有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等：含CHON的有機(jī)物為異養(yǎng)型微生物提供碳源、氮源、能源3一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽特殊營(yíng)養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無(wú)凝固劑瓊脂分離鑒定4工業(yè)生產(chǎn)化學(xué)成分：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用物理 半固體培養(yǎng)性

基質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生物的分離、計(jì)數(shù)等加入瓊脂較少觀察微生物運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種、保藏菌種等液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn)目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學(xué)物質(zhì)培養(yǎng)、分離出5特定的微生物牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方瓊脂20.0g牛肉膏

5g蛋白胨

10gNacl

5gH2O

定容至1000ml分析營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成？65.配制原則⑴目的明確：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源

（CO2碳源）異養(yǎng)型：有機(jī)碳源⑵營(yíng)養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)⑶適宜的pH值：

加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸生產(chǎn) 科研71消毒滅菌定義較為溫和理化方法殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物方法煮沸消毒法巴10氏0消℃毒、法5~6min化70學(xué)~藥75劑℃、30min酒紫8精0外℃、線、氯1氣5、m石in炭酸灼燒滅菌接干種熱環(huán)滅、菌接種針等金耐屬高用溫具需保持干燥等的高壓物蒸品汽，滅16菌0～1培7養(yǎng)0℃基，～1020小K時(shí)Pa、121℃、15～30mi二.無(wú)菌技術(shù)：防止外來(lái)雜菌的污染1.消毒與滅菌：8請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1）

培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿玻棒、試管、燒瓶和吸管實(shí)驗(yàn)操作者的雙手9練習(xí):說(shuō)出無(wú)菌技術(shù)及相應(yīng)的具體方法工作臺(tái)操作者的手、衣著牛奶培養(yǎng)基培養(yǎng)皿玻棒、試管

接種環(huán)無(wú)菌水飲用水紗布涂布器10毒二.無(wú)菌技術(shù)：防止外來(lái)雜菌的污染消毒與滅菌：無(wú)菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程酒精燈旁操作超凈工作臺(tái)11單個(gè)2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：

鑒定菌種的重要依據(jù)三.菌落1.定義：或少數(shù)菌體

大量繁殖固體培養(yǎng)基上

子細(xì)胞群體121000ml㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計(jì)算：培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成分的用量稱量：牛肉1膏00黏0m稠l，牛用肉稱膏量蛋紙白稱胨取培養(yǎng)基的配方、加蓋溶解→取紙定容牛肉溶化：牛肉膏→蛋白調(diào)pH、分裝膏、蛋白瓊胨脂易20吸.0潮g，要快、稱量牛紙肉膏、少量5g水加熱胨、N蛋a白Cl胨→瓊1脂0g

→補(bǔ)水、封口N：acl

5g養(yǎng)基、H培2O養(yǎng)皿定容至四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：分散成單個(gè)細(xì)胞,形成單個(gè)菌落5.滅菌：6.倒平板：培13倒平板約50℃防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基14：菌種四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：1.接種：⑴平板劃線法：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)劃3個(gè)平板

1個(gè)不劃線（空白1對(duì)5

照為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。166支試管，分別加入9ml無(wú)菌水1011021031ml1041ml

1ml105

106⑵稀釋涂布平板法：

a.梯度稀釋菌液：1ml

1ml

1ml菌液微量移液器17⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液各梯度分別涂布3個(gè)平板

1個(gè)不涂布作空白對(duì)照b.涂布平板：滴不超過(guò)0.1ml：灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍18四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：接種：⑴平板劃線法：⑵稀釋涂布平板法：培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基 放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h后，觀察并記錄19五.菌種的保藏：臨時(shí)保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上

4℃菌種易被污染、變異長(zhǎng)期保存： 甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃20一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽特殊營(yíng)養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）pH、氧氣的需求：4