雙黃連聯(lián)合3種抗菌劑對(duì)廣泛性耐藥肺炎克雷伯菌的抑菌效果

雙黃連聯(lián)合3種抗菌劑對(duì)廣泛性耐藥肺炎克雷伯菌的抑菌效果

肺炎克雷伯菌是臨床感染的常見(jiàn)病原體之一。近幾年肺炎克雷伯菌耐藥菌株檢出呈上升趨勢(shì)1材料和方法1.1月日:7月18日標(biāo)本均來(lái)自本院臨床患者，采集日期為2016年1月17日至2018年2月18日。經(jīng)Phoenix100全自動(dòng)微生物鑒定儀鑒定菌株，參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI)M100-S27標(biāo)準(zhǔn)判讀藥敏結(jié)果，分離出廣泛耐藥肺炎克雷伯菌30株，質(zhì)控菌為大腸埃希菌ATCC25922。1.2培養(yǎng)基試驗(yàn)用血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、M-H肉湯培養(yǎng)基、M-H瓊脂培養(yǎng)基，所需培養(yǎng)基均由OXOID公司生產(chǎn)。1.3亞胺培南，蘇-氨基-阿斯塔納雙黃連粉針劑（1.2g/瓶，批號(hào)：1508110，哈藥集團(tuán)中藥二廠）、亞胺培南西司他丁鈉（亞胺培南500mg：西司他丁鈉500mg，批號(hào)：M029976，杭州默沙東制藥有限公司）、頭孢哌酮/舒巴坦（頭孢哌酮1.0g：舒巴坦0.5g，批號(hào)：1539364，美國(guó)輝瑞制藥有限公司）、鹽酸米諾環(huán)素（100mg/?！?0，批號(hào)：M33252，惠氏制藥有限公司）。1.4設(shè)備賽多利斯電子分析天平、全自動(dòng)微生物鑒定藥敏分析儀（BD公司，Phoenix100）、麥?zhǔn)媳葷醿x、微量加樣器、試管若干。1.5測(cè)試方法1.5.1試驗(yàn)菌溶液的制備將30株廣泛耐藥肺炎克雷伯菌試驗(yàn)菌株分純培養(yǎng)，取純培養(yǎng)菌落，配置成0.5麥?zhǔn)媳葷?，再進(jìn)行10倍稀釋備用。1.5.2亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素對(duì)照溶液的配制取雙黃連粉針劑1瓶（1.2g）溶于3mL生理鹽水，配制成400mg/mL的原始濃度藥液，進(jìn)行對(duì)倍稀釋成7個(gè)濃度梯度。再分別取亞胺培南西司他丁鈉1瓶（亞胺培南500mg）溶于5mL生理鹽水配制亞胺培南藥物儲(chǔ)備液100mg/mL。頭孢哌酮/舒巴坦1瓶（1.5g）溶于15mL生理鹽水配制頭孢哌酮/舒巴坦藥物儲(chǔ)備液100mg/mL。鹽酸米諾環(huán)素1粒（100mg）溶于10mL生理鹽水配制米諾環(huán)素藥物儲(chǔ)備液10mg/mL，再分別用微量加樣器吸取3種藥物儲(chǔ)備液，將亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素稀釋成試驗(yàn)濃度1024、1024、128μg/mL，然后各組藥液進(jìn)行對(duì)倍稀釋成7個(gè)濃度梯度。按此系列濃度共配制30組藥液，取配制好的藥液加入無(wú)菌試管1mL，再于各組試管中加入50μL試驗(yàn)菌液，35℃培養(yǎng)24h，測(cè)定雙黃連、亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素對(duì)30株菌的MIC值。1.5.3最高濃度與倍比的確定根據(jù)30株菌對(duì)雙黃連、亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素的MIC結(jié)果，以每種藥物MIC值的2倍為最高濃度，倍比稀釋成8個(gè)濃度。采用棋盤(pán)法設(shè)計(jì)，分別將雙黃連和3種抗菌藥物兩兩混合，每種藥液各加0.5mL，再于每管加入50μL菌液，35℃培養(yǎng)24h，記錄最佳組合效應(yīng)時(shí)的MIC值，分別計(jì)算雙黃連分別聯(lián)合3種抗菌藥物對(duì)30株廣泛耐藥肺炎克雷伯菌的FIC指數(shù)。1.5.4mic/乙藥單用的micFIC指數(shù)=甲藥聯(lián)合的MIC/甲藥單用的MIC+乙藥聯(lián)合的MIC/乙藥單用的MIC。FIC指數(shù)≤0.5表示協(xié)同作用，F(xiàn)IC指數(shù)>0.5～1.0表示相加作用，F(xiàn)IC指數(shù)>1.0～2.0表示無(wú)關(guān)作用，F(xiàn)IC指數(shù)>2.0表示拮抗作用。2結(jié)果2.1藥物組成對(duì)mic值范圍的影響雙黃連、亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素單用及聯(lián)合應(yīng)用MIC值、MIC值范圍見(jiàn)表1～4。從表2～4可以看出，雙黃連與亞胺培南聯(lián)合用藥以后，MIC值范圍比單獨(dú)用藥有所降低；雙黃連與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合用藥以后，MIC值范圍與單獨(dú)用藥沒(méi)有變化，雙黃連與米諾環(huán)素聯(lián)合用藥以后，MIC值范圍相比反而升高。2.2濃度-累積抑菌百分率曲線雙黃連、亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素單用和聯(lián)合應(yīng)用濃度-累積抑菌百分率曲線見(jiàn)圖1、2。由圖1、2可知，雙黃連和頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用與單用相比，濃度-累積抑菌百分率曲線在一定范圍內(nèi)右移，說(shuō)明雙黃連和頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用比單用其MIC值在一定范圍內(nèi)有所升高；雙黃連與亞胺培南聯(lián)合應(yīng)用與單用相比，曲線明顯左移，表明雙黃連與亞胺培南聯(lián)合用藥可降低各自的MIC值。2.3fic指數(shù)的總體情況藥物聯(lián)合應(yīng)用對(duì)廣泛耐藥肺炎克雷伯菌FIC指數(shù)分布見(jiàn)表5。雙黃連和亞胺培南聯(lián)合應(yīng)用FIC指數(shù)結(jié)果顯示：FIC指數(shù)≤0.5占6.7%,FIC指數(shù)>0.5～1.0占53.3%,FIC指數(shù)>1.0～2.0占33.3%,FIC指數(shù)>2.0占6.7%。雙黃連和頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用的FIC指數(shù)結(jié)果顯示：FIC指數(shù)≤0.5占0,FIC指數(shù)>0.5～1.0占13.3%,FIC指數(shù)>1.0～2.0占23.3%,FIC指數(shù)>2.0占63.3%。雙黃連和米諾環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用的FIC指數(shù)結(jié)果顯示：FIC指數(shù)≤0.5占0,FIC指數(shù)>0.5～1.0占3.3%,FIC指數(shù)>1.0～2.0占30.0%,FIC指數(shù)>2.0占66.7%。3耐藥革蘭陰性菌的聯(lián)合治療方案廣泛耐藥肺炎克雷伯菌給臨床治療帶來(lái)很大挑戰(zhàn)，專(zhuān)家共識(shí)指出耐藥革蘭陰性菌應(yīng)選用抗菌藥物聯(lián)合治療方案雙黃連粉針劑是臨床常用的中成藥，具有清熱解毒、輕宣透邪的功效，并且相關(guān)研究表明其具有一定抑菌抗炎作用4