志賀氏菌檢驗(yàn)

志賀氏菌檢驗(yàn)志賀氏菌檢驗(yàn)革蘭氏陰性短桿菌增菌分離初步生化試驗(yàn)血清凝集試驗(yàn)革蘭氏染色增菌固體樣品：25g（電子天平）稀釋瓶或具液體樣品：25mL（25mL吸量管）塞廣口瓶+225mLGN增菌液（量筒）,混勻。培養(yǎng)（于36C°±1C。培養(yǎng)6?8h）注意：液體樣品先用無菌NaOH或HCl調(diào)節(jié)PH至7.0。分離從陽性增菌液中用接種環(huán)取1環(huán)1環(huán)HE瓊脂平板，劃線麥康凱瓊脂平板，劃線36C±1C培養(yǎng)18?24hHE瓊脂平板麥康凱瓊脂平板開始處開始處平板劃線示意圖HE瓊脂平板上的典型菌落特征：呈透明，不發(fā)酵乳糖菌落麥康凱瓊脂平板上的典型菌落特征：呈透明，不發(fā)酵乳糖菌落初步生化試驗(yàn)取有明顯典型菌落的HE或麥康凱瓊脂平板（在放陽性物品處）或三糖鐵斜面：先劃線，后穿刺于36C±1C培養(yǎng)18?24h典型菌落（同一菌落）葡萄糖半固體：穿刺于36C°±1C。培養(yǎng)18?24h斜面劃線方法斜面穿刺方法對(duì)照試驗(yàn)三糖鐵斜面培養(yǎng)結(jié)果：上層紅色，下層黃色（產(chǎn)酸）紅色：產(chǎn)堿黃色：產(chǎn)酸黑色：產(chǎn)硫化氫葡萄糖半固體培養(yǎng)結(jié)果：沿穿刺線生長，無動(dòng)力對(duì)照試驗(yàn)葡萄糖半固體從有典型志賀氏菌的三糖鐵斜面取1環(huán)，染色。革蘭氏染色結(jié)果：G-（紅色，短桿菌，無莢膜，無芽孢）在無菌室中固定，到微生物實(shí)訓(xùn)室染色血清凝集試驗(yàn)①滴1~2滴滅菌生理鹽水②從有典型志賀氏菌的三糖鐵斜面上用接種環(huán)取1環(huán)①滴1~2滴志賀氏菌多價(jià)血清結(jié)果：志賀氏菌多價(jià)血清：凝固滅菌生理鹽水：不凝固玻片用記號(hào)筆在玻片中間畫條線革蘭氏染色步驟：涂片——火焰固定——結(jié)晶紫初染——水洗—碘液媒染—乙醇脫色——水洗——吸干——番紅或沙磺復(fù)染——水洗——干燥 鏡檢涂片：在載玻片中央滴一滴生理鹽水，用無菌操作法挑取菌種于生理鹽水中，調(diào)勻并涂成薄膜。注意：生理鹽水不宜過多；涂片必須均勻。火焰固定：載玻片通過火焰1-2次固定，不可過熱，以載玻片不燙手背為宜。結(jié)晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加結(jié)晶紫1滴，染色1min。水洗：用自來水沖洗至沖下的水無色為止。碘液媒染：加碘液媒染1min,然后用水沖洗至沖下的水呈無色為止。乙醇脫色：用吸水紙將載玻片上的水吸凈，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出現(xiàn)紫色為止，大約需要20?30s。立即用自來水沖洗乙醇約30s，用吸水紙吸干水分。番紅或沙磺復(fù)染：在涂片薄膜上滴加番紅1滴，染色1-2min。水洗：用水沖洗至沖下的水呈無色為止。干燥：于室溫下自然干