臨床微生物實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌鑒定指南

臨床微生物試驗(yàn)室細(xì)菌鑒定指南〔上〕錄入時(shí)間:2023-11-2210:40:51來源：溫州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院一．細(xì)菌的鑒定步驟一．細(xì)菌的鑒定步驟后劃歸到一個(gè)菌種的分析過程。單個(gè)菌落可以進(jìn)展生化試驗(yàn)?！参覀冞@里一般都是預(yù)先純化培育〕對(duì)待鑒定的菌種進(jìn)展革蘭染色，觀看形態(tài)〔G+c，G–b，G–c，G+b〕，做觸酶，質(zhì)控單。檢日期等。另外最重要的是要填寫好該菌種的菌落形態(tài)以及有無溶血。復(fù)習(xí)革蘭染色，觸酶試驗(yàn)，氧化酶試驗(yàn)。⑴．革蘭染色：是細(xì)菌鑒定過程中最常用最根本最重要的染色方法。〔。第一步：以結(jié)晶紫初染〔染色液Ⅰ〕其次步：以盧戈氏碘液媒染〔染色液Ⅱ〕第三步：用95%乙醇脫色〔染色液Ⅲ〕第四步：最終用稀釋復(fù)紅復(fù)染〔染色液Ⅳ〕第四步：最終用稀釋復(fù)紅復(fù)染〔染色液Ⅳ〕(HO22a.原理：具有過氧化氫酶的細(xì)菌能催化雙氧水生成水和初生態(tài)氧，繼而形成a.原理：具有過氧化氫酶的細(xì)菌能催化雙氧水生成水和初生態(tài)氧，繼而形成氧分子消滅氣泡。b.3%過氧化氫數(shù)滴，觀看結(jié)果〔馬上有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性〕。要可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；還有不能在接種針或環(huán)上進(jìn)展試驗(yàn)。c.4℃冰箱保存。d.應(yīng)用：絕大多數(shù)含細(xì)胞色素的需氧和兼性厭氧細(xì)菌觸酶試驗(yàn)陽性，鏈球菌〔+〕，微球菌屬〔+〕，鏈球菌屬〔－〕?！睰ovac〕：cc方法〔濾紙法，菌落法，試劑紙片法〕：b.馬上呈粉紅色，繼而消滅深蘭色。結(jié)果讀取在1060〔假陽性〕，也不能在含糖培育基上生長的菌落進(jìn)行試驗(yàn)〔假陰性〕。陽性比照用銅綠假單胞菌，陰性比照用大腸埃希菌。前者陽性，后者陰性。二．葡萄球菌屬的鑒定二．葡萄球菌屬的鑒定葡萄球菌屬主要的種有金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，腐生葡萄球菌。m，菌體圓形，呈單個(gè)，成雙以及不規(guī)簇狀排列。染色呈紫色，為革蘭陽性球菌。球菌，呈成雙和鏈狀排列的卵圓形的革蘭陽性球菌。球菌，微球菌葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)〔操作方法同甘露醇OF試驗(yàn)〕為氧化型；而〔50μg/片〕敏感試驗(yàn)微球菌為耐藥，而金黃色葡萄球菌為敏感。葡萄球菌屬的種間鑒定：⑴．菌落色素與溶血毒素：金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃色，檸檬色或者淡黃色。⑵．溶血毒素：金黃色葡萄球菌有α﹑β﹑γ﹑δ溶血毒素，各毒素的區(qū)分是對(duì)動(dòng)物紅細(xì)胞的溶血范圍﹑α他葡萄球菌大多數(shù)不產(chǎn)生溶血毒素，只有表葡有極少能產(chǎn)生溶血毒素?！碴栃浴?，表皮葡萄球菌〔陰性〕，腐生葡萄球菌〔陰性〕。血漿凝固酶是金葡菌所產(chǎn)生的，有結(jié)合凝固酶和游離凝固酶兩種。血漿凝固酶檢測有兩種方法，為玻片法和試管法，我們一般承受玻片法。法。a.a.〔類似凝血酶的一種物質(zhì)由游離凝固酶作用產(chǎn)生。b.只有在陰性比照也不凝集才能認(rèn)為是真正的陽性，有一局部葡萄球菌有自凝現(xiàn)象。感。⑸．甘露醇氧化發(fā)酵試驗(yàn)：兩滴石臘密封，另外一支則不加，放37℃孵箱內(nèi)18～24h后觀看結(jié)果。管都不變色則說明該細(xì)菌是不利用甘露醇〔產(chǎn)堿型〕。c〔即兩管都變黃〔即沒加石蠟管有局部會(huì)變黃色，加石蠟管不變黃色〕；腐生葡萄球菌與表皮葡萄球菌類似。三．微球菌屬的種間鑒定微球菌屬主要的種有易變微球菌，藤黃微球菌，玫瑰微球菌。鑒定生化見下微球菌屬的種間鑒定表微球菌屬的種間鑒定表易變微球菌藤黃微球菌玫瑰微球菌色素產(chǎn)生黃色黃色粉紅色需氧葡萄糖產(chǎn)酸＋＋－硝酸鹽復(fù)原＋－－脲素酶dd＋氧化酶〔弱〕－＋－/＋感S/RSRd：不定d：不定S：敏感R：耐藥四．鏈球菌屬形態(tài)和染色：鏈球菌的直徑為0.5～1.0μm，呈成雙和鏈狀排列的卵圓形革蘭炎鏈球菌呈矛頭狀，寬端相對(duì)，尖端向外。依據(jù)鏈球菌在血平板上溶血現(xiàn)象的不同分為三種：⑴甲型〔α-〕溶血，即菌落四周消滅較窄的草綠色溶血環(huán)；⑵乙型〔β-〕溶血，即菌落四周消滅較寬的透亮溶血環(huán)；⑶丙型〔γ-〕溶血，即菌落四周無溶血環(huán)。依據(jù)抗原構(gòu)造〔C多糖抗原〕的不同可分為A﹑B﹑C﹑D﹑E﹑F﹑G﹑H﹑K﹑L﹑M﹑N﹑O﹑P﹑Q﹑R﹑S﹑T1890%A他群鏈球菌致病。鏈球菌屬的種間鑒定⑴．乙型溶血鏈球菌的鑒定：性鏈球菌〕。﹑CAMPB〔主要為無乳鏈球菌〕。對(duì)桿菌肽不敏感，膽汁七葉苷試驗(yàn)陰性，馬尿酸鈉水解試驗(yàn)陰性，CAMP﹑類馬鏈球菌﹑藻糖和山梨醇試驗(yàn)。將待鑒定菌于金黃色葡萄球菌3mm處垂直種一短線，假設(shè)在有CO2

條件下培育5～6CO2

條件下培育18～24小時(shí)，在兩細(xì)菌連接處消滅一個(gè)半月型的加強(qiáng)溶血區(qū)即為CAMP試驗(yàn)陽性。⑵．甲型溶血鏈球菌的鑒定：〔Optochin〕不敏感，膽汁溶菌試驗(yàn)菌，血鏈球菌，唾液鏈球菌等。﹑圓形﹑外表光滑﹑灰白色﹑含量為5μg/片，抑菌環(huán)>18mm，<15mm，15～18mm〔D〕的鑒定：6.5%NaClDD⑷．鏈球菌屬鑒定的系統(tǒng)生化結(jié)果推斷1%美蘭牛乳膽汁七葉苷試驗(yàn)：變黑為陽性。PH9.6〔陽性〕。6.5%NaCl〔陽性〕。精氨酸雙水解酶試驗(yàn)：變紅色〔比照不變色，仍為黃色〕為陽性。臨床微生物試驗(yàn)室細(xì)菌鑒定指南〔下〕錄入時(shí)間:2023-11-2210:44:19來源：溫州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院五．奈瑟氏菌屬和布蘭漢菌屬五．奈瑟氏菌屬和布蘭漢菌屬漢氏菌。兩者系需氧革蘭陰性球菌。⑴

環(huán)境中生長。2⑵．鑒定過程：⑵．鑒定過程：DNA炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌。菌。⑶．幾種主要細(xì)菌對(duì)葡萄糖﹑麥芽糖﹑蔗糖的氧化分解產(chǎn)酸結(jié)果如⑶．幾種主要細(xì)菌對(duì)葡萄糖﹑麥芽糖﹑蔗糖的氧化分解產(chǎn)酸結(jié)果如下：氧化分解產(chǎn)酸菌種葡萄糖麥芽糖蔗糖淋病奈瑟氏菌＋－－腦膜炎奈瑟氏菌＋＋－粘液奈瑟氏菌＋＋＋卡他布蘭漢菌－－－⑷ DNA0.2%DNADNA1mmol/LHCl掩蓋平板，菌落四周消滅透亮環(huán)者為陽性。DNADNADNA〕六．腸桿菌科六．腸桿菌科腸桿菌科是一大群生物學(xué)性狀相像的革蘭陰性桿菌，其中對(duì)人致病性較強(qiáng)﹑耶爾森氏菌8枸櫞酸桿菌屬﹑克雷伯菌屬﹑腸桿菌屬﹑多源菌屬﹑沙雷菌屬﹑變形桿菌屬﹑普羅威登菌屬和摩根菌屬在確定條件下也可致病〔條件致病菌〕?！矞y〕或弧菌科細(xì)菌。腸桿菌科的系統(tǒng)生化⑴．KIA〔克氏雙糖鐵〕組成：乳糖／葡萄糖=10／1〔斜面／高層，其長度最好是都是組成：乳糖／葡萄糖=10／1〔斜面／高層，其長度最好是都是2CM〕結(jié)果推斷：斜面或高層變黃色：陽性；不變色〔紅色〕：陰性高層中消滅裂隙：產(chǎn)氣陽性高層中消滅黑色〔FeS〕：產(chǎn)HS陽性2⑵．苯丙氨酸脫羧酶試驗(yàn)細(xì)菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫羧酶使苯丙氨酸氧化脫羧后生成苯丙酮酸，再與細(xì)菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫羧酶使苯丙氨酸氧化脫羧后生成苯丙酮酸，再與10%的FeCl〔變形桿菌屬﹑普羅威登菌屬和摩根菌屬為陽性，3其他為陰性〕其他為陰性〕⑶．枸櫞酸鹽試驗(yàn)〔碳源利用試驗(yàn)〕陽性?！舶ＯＪ暇鷮伲举R氏菌屬，愛德華菌屬為陰性，其他為陽性〕留意：接種時(shí)不能被糖，蛋白胨污染，要單獨(dú)接種〕⑷．甲基紅〔MR〕試驗(yàn)使培育基的pH下降至4.5以下時(shí)，參與甲基紅指示劑由桔黃色變桔紅色為弱陽性；變紅色為陽性。培育基成分：葡萄糖蛋白胨水0.1g300ml，200mlV-P一般狀況下兩者結(jié)果正好相反，但也有例外如奇變兩者同為陽性。⑸．MIU〔動(dòng)力－靛基質(zhì)－尿素〕試驗(yàn)則為動(dòng)力〔＋〕；清楚則為動(dòng)力〔－〕?！策胚嵩囼?yàn)〕：某些細(xì)菌有色氨酸酶，能分解培育基中的色氨酸生成吲哚。吲哚再與試劑對(duì)位二氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而呈紅色。再使培育基中的指示劑〔0.4%酚紅〕變紅色即為陽性。⑹．硝酸鹽復(fù)原試驗(yàn)⑹．硝酸鹽復(fù)原試驗(yàn)NOˉ→→NOˉ〔大腸〕3 2NOˉ→→NH＋3 4NOˉ→→N〔沙雷氏菌屬〕3 2試劑甲：對(duì)氨基苯磺酸試劑乙：α-萘胺10min2或氮③培育基不適合細(xì)菌生長腸桿菌科細(xì)菌均能復(fù)原硝酸鹽為亞硝酸鹽。⑺．氨基酸脫羧試驗(yàn)細(xì)菌產(chǎn)生脫羧酶分解氨基酸使其脫羧生成胺和細(xì)菌產(chǎn)生脫羧酶分解氨基酸使其脫羧生成胺和CO，雖然各種細(xì)菌2〔精氨酸→精胺〕和CO。然后胺能使培育基變堿性，通過指示劑〔溴甲酚紫〕由2黃變紫即為陽性。比照管〔無氨基酸〕為黃色。成的胺更穩(wěn)定，還能誘導(dǎo)氨基酸脫羧酶的產(chǎn)生〕②比照管假設(shè)不顯黃色，則結(jié)果不能推斷。應(yīng)用：除傷寒沙門氏菌，雞沙門氏菌外，其他沙門氏菌鳥AA，賴AA均為陽性；除宋氏和鮑氏志賀菌外其他志賀菌也菌為陽性。均為陽性；除宋氏和鮑氏志賀菌外其他志賀菌也菌為陽性。⑻．葡萄糖酸鹽試驗(yàn)色變黃綠色到磚紅色即為陽性，不變?yōu)殛幮?。腸桿菌的鑒定流程⑴．依據(jù)苯丙氨酸脫羧酶試驗(yàn)：〔＋〕：變形桿菌屬，普羅威登斯菌屬，摩根氏菌屬〔＋〕：變形桿菌屬，普羅威登斯菌屬，摩根氏菌屬埃希氏菌屬，志賀氏菌屬，沙門氏菌屬，枸櫞酸桿菌屬，愛德華菌屬；克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬。⑵．苯丙氨酸脫羧酶試驗(yàn)陰性，加做葡萄糖酸鹽試驗(yàn)〔＋〕：克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬〔＋〕：克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬動(dòng)力〔－〕：克雷伯菌屬，屬內(nèi)種的鑒定主要依據(jù)吲哚試驗(yàn)〔肺克吲哚試驗(yàn)陰性，三個(gè)亞種鑒別試驗(yàn)IMViC：肺炎－－＋＋，臭鼻－＋－d，鼻硬結(jié)－＋－－〕動(dòng)力〔＋〕，DNA酶〔＋〕：沙雷氏菌屬枸櫞酸鹽〔＋〕：腸桿菌屬〔主要是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，前者賴氨酸陰性，而后中為陽性〕〔＋〕，DNA〔－〕，枸櫞酸鹽〔－〕：哈夫尼亞菌屬〔－〕：IMViC〔靛基質(zhì)-甲基紅-VP-枸櫞酸鹽〕試驗(yàn)IMViC〔＋＋－－〕：大腸埃希菌〔HS－〕或愛德華菌屬〔HS＋〕。2 2IMViC〔－／＋－＋〕：枸櫞酸桿菌屬＋HS2〔＋〕：變形桿菌屬〔＋〕：變形桿菌屬屬內(nèi)主要鑒定試驗(yàn)如下普變奇變產(chǎn)粘變潘尼氏尿素酶＋＋＋＋鳥氨酸－＋－－靛基質(zhì)＋－－－麥芽糖－－＋＋木 糖＋＋－＋〔－〕：普羅威登氏菌屬，摩根氏菌屬普羅威登氏菌屬：鳥氨酸：－；枸櫞酸鹽：＋〔屬內(nèi)鑒定尿素酶及一些碳〔－〕：普羅威登氏菌屬，摩根氏菌屬普羅威登氏菌屬：鳥氨酸：－；枸櫞酸鹽：＋〔屬內(nèi)鑒定尿素酶及一些碳水化合物的產(chǎn)酸試驗(yàn)，如甘露醇﹑阿拉伯糖﹑海藻糖等〕摩根氏菌屬：鳥氨酸：＋；枸櫞酸鹽：－〔只有一個(gè)種：摩氏摩根氏菌〕⑷．志賀氏菌屬和沙門氏菌屬〕形成不發(fā)酵乳糖的透亮或半透亮的無色菌落，但一些沙門氏能產(chǎn)HS就會(huì)形成中心黑色的菌落，鑒定時(shí)在選2擇性培育基上選擇可疑菌落進(jìn)展鑒定。擇性培育基上選擇可疑菌落進(jìn)展鑒定。a．志賀氏菌屬主要系統(tǒng)生化：KIA：K/A〔只有福氏6型能產(chǎn)氣〕，HS〔－〕；MIU：－2+/-－；苯丙：－；枸櫞酸鹽：－。報(bào)告結(jié)果時(shí)要依據(jù)其血清學(xué)的結(jié)果鑒定到種，即A群〔痢疾志賀氏菌〕﹑BBDb．沙門氏菌屬2鹽：－。傷寒沙門氏菌的抗原構(gòu)造：菌體抗原〔O抗原〕，鞭毛抗原〔H抗原〕，包膜抗原〔主要是Vi抗原〕依據(jù)系統(tǒng)生化鑒定到沙門氏菌屬后，在依據(jù)其抗原構(gòu)造的特點(diǎn)，用血清學(xué)凝集分到種即可報(bào)告結(jié)果。血清凝集步驟如下：A-FO〔＋〕：O，Ha〔＋〕：A〔甲型副傷寒沙門氏菌〕2O，Hb〔＋〕：B〔乙型副傷寒沙門氏菌〕4O ，Hc，Vi〔＋〕：C〔丙型副傷寒沙門氏菌〕6﹑79O3﹑1011A-FViA-FO血清定群；〔－〕連續(xù)以A-FO血清凝集分型。血清凝集留意：確定O群后，確定要用H因子再做凝集；最終結(jié)果要以凝到H相后才能報(bào)告。七．非發(fā)酵革蘭陰性桿菌非發(fā)酵革蘭陰性桿菌是指一群不利用葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖﹑﹑和嗜麥芽假單胞菌外。非發(fā)酵菌按以下試驗(yàn)進(jìn)展初步分屬菌屬菌屬氧化酶O-F動(dòng)力MaCC觸酶假單胞菌屬＋O/－＋/－生長＋無色桿菌屬＋O/－＋/－生長＋不動(dòng)桿菌屬不動(dòng)桿菌屬－O/－－生長＋產(chǎn)堿桿菌屬＋－＋生長＋摩拉菌屬不生長＋＋－－金氏菌屬〔弱〕－＋不定F－黃桿菌屬〔弱〕－＋不生長F＋﹑潮濕﹑有金屬〔綠膿素，青膿素，紅膿素，黑膿素等〕，MH銅綠假單胞菌的最低鑒定標(biāo)準(zhǔn)：①動(dòng)力＋②氧化酶＋③枸櫞酸鹽＋④氧化分解﹑鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)－⑦精氨酸雙水解酶試驗(yàn)＋S－。2．棒狀桿菌屬棒狀桿菌屬是一群革蘭陽性桿菌。菌體大小長短不一，常