藥用植物組培快繁操作技術(shù)-無菌操作技術(shù)

知識(shí)目標(biāo)：●掌握培養(yǎng)基的組成成分●掌握常用基本培養(yǎng)基的特點(diǎn)●掌握培養(yǎng)基的使用原則技能目標(biāo)：

●掌握培養(yǎng)基配制技術(shù)●掌握培養(yǎng)基滅菌條件學(xué)習(xí)任務(wù)1培養(yǎng)基

人工配制的用于植物組織、細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖和代謝產(chǎn)物生成所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的概念一、培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基組成無機(jī)營(yíng)養(yǎng)物有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑碳水化合物附加物水培養(yǎng)體的支持材料在培養(yǎng)基的各成分中，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是培養(yǎng)基的關(guān)鍵物質(zhì)，對(duì)植物組織培養(yǎng)起著決定性作用。常用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑有細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素兩大類。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑1.生長(zhǎng)素類（1）種類：IAA，NAA，IBA，2,4－D（2）作用：①誘導(dǎo)愈傷組織形成②根的形成③低濃度下和細(xì)胞分裂素配合促進(jìn)芽的形成和增殖2.赤霉素（GAn）

（1）種類：GA3（2）作用：促莖伸長(zhǎng)，一般在器官形成后加入。

(3)穩(wěn)定性和溶解性：不耐熱，采用過濾滅菌法添加到培養(yǎng)基中。3.細(xì)胞分裂素類（1）種類：6-BA，Kt，Zt（2）作用：①抑制頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)側(cè)芽的生長(zhǎng)；②誘導(dǎo)不定芽分化；③促進(jìn)芽、苗增殖。1.活性炭作用：1.促進(jìn)生根；2.吸附有害物質(zhì)，減輕褐變和玻璃化苗的現(xiàn)象。用量：0.5～5g/L2.抗生素鏈霉素用量：5～20mg/L。作用：防污染，減少材料損失注意：抗生素對(duì)組織生長(zhǎng)有抑制作用，使用要慎重。青霉素慶大霉素

抗氧化物2.用量：50～200mg/L3.作用：防止氧化褐變注意：可用抗氧化劑洗滌外植體傷口表面。1.常用抗氧化劑：半胱氨酸、PVP、VC二培養(yǎng)基的種類1.根據(jù)形態(tài)液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基1.根據(jù)形態(tài)二培養(yǎng)基的種類生根培養(yǎng)基2.根據(jù)作用誘導(dǎo)培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基三培養(yǎng)基的配方培養(yǎng)基的配方表達(dá)形式：MS+糖3%（30g/L）

+瓊脂4%（4g/L）MS+6-BA2.0mg/L+糖3%+瓊脂4%B5+6-BA2.0mg/L+糖3%+瓊脂4%N6+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+糖3%MS+NAA0.5mg/L+糖3%+瓊脂4%White+NAA0.5mg/L+糖2%+瓊脂4%2023/9/129:4015培養(yǎng)條件環(huán)境條件化學(xué)條件滲透壓pH氣體光溫度濕度培養(yǎng)條件（一）溫度

溫度是植物組織培養(yǎng)成功的重要因素，大多數(shù)植物組織培養(yǎng)都是在23～27℃之間進(jìn)行?！鶞囟鹊淖饔?、影響試管苗的生長(zhǎng)速度2、影響器官形成和增殖2023/9/129:4016環(huán)境條件★百合鱗片在30℃時(shí)小鱗莖的發(fā)葉速度比在25℃以下的高●培養(yǎng)蝴蝶蘭花梗時(shí)，30℃左右萌發(fā)出腋芽，22℃萌發(fā)出花芽，從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)為生殖生長(zhǎng)2023/9/129:4017環(huán)境條件（二）光照

主要表現(xiàn)在光強(qiáng)、光周期方面1、光照強(qiáng)度光照強(qiáng)度較強(qiáng)，幼苗生長(zhǎng)粗壯；而光照強(qiáng)度較弱，幼苗生長(zhǎng)細(xì)弱，容易徒長(zhǎng)。光照強(qiáng)度一般為1000～5000Lx。2、光周期

一般是10～12h的光照，14～12h的黑暗。思考：光的作用是什么？促進(jìn)器官的形成和生長(zhǎng)2023/9/129:4018環(huán)境條件（三）濕度

濕度的影響包括培養(yǎng)容器內(nèi)和環(huán)境的濕度條件。1、培養(yǎng)容器內(nèi)的相對(duì)濕度通常在95%以上。2、環(huán)境的相對(duì)濕度一般要求70％～80％。2023/9/129:4019化學(xué)條件（一）滲透壓培養(yǎng)基中由于有添加的鹽類、蔗糖等化合物，影響到滲透壓的變化。思考：影響培養(yǎng)基滲透壓的主要因子是什么？※糖的作用：提供能量和維持培養(yǎng)基的滲透壓。2023/9/129:4020化學(xué)條件（二）pH值植物對(duì)培養(yǎng)基最適pH值的要求不同，大多在5.8～6.0左右。pH值對(duì)培養(yǎng)基的影響：pH值＞6.4培養(yǎng)基變硬pH值＜5.6培養(yǎng)基變軟※

滅菌后的培養(yǎng)基其pH值會(huì)下降0.2個(gè)單位2023/9/129:4021化學(xué)條件（三）氣體解決