殘留溶劑測定法

殘留溶劑測定法藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機溶劑。除另有規(guī)定外，溶劑的殘留限度應(yīng)符合表中的規(guī)定；對其它溶劑，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝的特點，制定相應(yīng)的限度，使其符合產(chǎn)品規(guī)范、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GMP)或其它基本的質(zhì)量要求。本法照氣相色譜法測定。色譜柱1.毛細管柱除另有規(guī)定外，極性相近的同類色譜柱之間可以互換使用。非極性色譜柱固定液為100%的二甲基聚硅氧烷的毛細管柱。極性色譜柱固定液為聚乙二醇(PEG-20M)的毛細管柱。中極性色譜柱固定液為(35%)二苯基-(65%)甲基聚氧硅烷、(50%)二苯基-(50%)二甲基聚氧硅烷、(35%)二苯基-(65%)二甲基聚氧硅烷、(14%)氤丙基苯基-(86%)二甲基聚硅氧烷、(6%)氤丙基苯基-(86%)二甲基聚硅氧烷的毛細管柱等。弱極性色譜柱固定液為(5%)苯基-(95%)甲基聚氧硅烷、(5%)二苯基-(95%)二甲基硅氧烷共聚物的毛細管柱等。2.填充柱以直徑為0.25-0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其它適宜的填料作為固定相。系統(tǒng)適用性試驗用待測物的色譜峰計算，毛細管色譜柱的理論板數(shù)一般不低于5000；填充柱法的理論板數(shù)一般不低于1000。色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。以內(nèi)標法測定時，對照品溶液連續(xù)進樣5次，所得待測物與內(nèi)標物峰面積之比的相對標準偏差(RSD)應(yīng)不大于5%；若以外標法測定，所得待測物峰面積的RSD應(yīng)不大于10%。供試品溶液的制備頂空進樣除另有規(guī)定外，精密稱取供試品0.1~1g;通常以水為溶劑；對于非水溶性藥物，可采用N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞颯或其它適宜溶劑；根據(jù)供試品和待測溶劑的溶解度，選擇適宜的溶劑且應(yīng)不干擾待測溶劑的測定。根據(jù)品種項下殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，其濃度應(yīng)滿足系統(tǒng)定量測定的需要。溶液直接進樣精密稱取供試品適量，用水或合適的有機溶劑使溶解；根據(jù)品種項下殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，其濃度應(yīng)滿足系統(tǒng)定量測定的需要。對照品溶液的制備精密稱取各品種項下規(guī)定檢查的有機溶劑適量，采用與制備供試品溶液相同的溶劑制備對照品溶液；如用水作溶劑，應(yīng)先將待測有機溶劑溶解在50%二甲亞颯或N，N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀釋。若為限度檢查，根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定確定對照品溶液的濃度；若為定量測定，為保證定量結(jié)果的準確性，應(yīng)根據(jù)供試品中殘留溶劑的實際殘留量確定對照品溶液的濃度；通常對照品溶液的色譜峰面積與供試品溶液中對應(yīng)的殘留溶劑的色譜峰面積以不超過2倍為宜。必要時，應(yīng)重新調(diào)整供試品溶液或?qū)φ掌啡芤旱臐舛?。測定法第一法毛細管柱頂空進樣等溫法當需要檢查的有機溶劑的數(shù)量不多，并極性差異較小時，可采用此法。色譜條件柱溫一般為40~100°C；常以氮氣為載氣，流速為每分鐘1.0~2.0ml；以水為溶劑時頂空瓶平衡溫度為70~85,°C頂空瓶平衡時間為30~60分鐘；進樣口溫度為200C；如采用火焰離子化檢測器（FID），溫度為250C。測定法取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣不少于2次，測定待測峰的峰面積。第二法毛細管柱頂空進樣系統(tǒng)程序升溫法當需要檢查的有機溶劑有機溶劑數(shù)量較多，且極性差異較大時，可采用此法。色譜條件柱溫一般先在40C維持8分鐘，再以8/minC的速度升至120C，維持10分鐘；以氮氣為載氣，流速為每分鐘2.0ml；以水為溶劑時頂空瓶溫度平衡溫度為70~85,C頂空瓶平衡時間30~60分鐘；進樣口溫度為200C；如采用FID檢測器，溫度為250C。具體到某個品種的殘留溶劑檢查時，可根據(jù)該品種項下殘留溶劑的組成調(diào)整升溫程序。測定法取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣不少于2次，測定待測峰的峰面積。第三法溶液直接進樣法可采用填充柱，亦可采用適宜極性的毛細管柱測定法取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣2~3次，測定待測峰的峰面積。計算法（1） 限度檢查：除另有規(guī)定外，按品種項下規(guī)定的供試品溶液濃度測定。以內(nèi)標法測定時，供試品溶液所得被測溶劑峰面積與內(nèi)標峰面積之比不得大于對照品溶液的相應(yīng)比值。以外標法測定時，供試品溶液所得被測溶劑峰面積不得大于對照品溶液的相應(yīng)峰面積。（2） 定量測定：按內(nèi)標法或外標法計算各殘留溶劑的量?！靖阶ⅰ浚?）除另有規(guī)定外，頂空條件的選擇：應(yīng)根據(jù)供試品中殘留溶劑的沸點選擇頂空平衡溫度。對沸點較高的殘留溶劑，通常選擇較高的平衡溫度；但此時應(yīng)兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物對測定的干擾。頂空平衡時間一般為30~45分鐘，以保證供試品溶液的氣-液兩相有足夠的時間達到平衡。頂空時間通常不宜過長，如超過60分鐘，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導致定量準確性的降低。對照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。（2） 定量方法的驗證當采用頂空進樣時，供試品與對照品處于不完全相同的基質(zhì)中，故應(yīng)考慮氣液平衡過程中的基質(zhì)效應(yīng)（供試品溶液與對照品溶液組成差異對頂空氣-液平衡的影響）。由于標準加入法可以消除供試品溶液基質(zhì)與對照品溶液基質(zhì)不同所致的基質(zhì)效應(yīng)的影響，故通常采用標準加入法驗證定量方法的準確性；當標準加入法與其它定量方法的結(jié)果不一致時，應(yīng)以標準加入法的結(jié)果為準。（3） 干擾峰的排除供試品中的未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物易對殘留溶劑的測定產(chǎn)生干擾。干擾作用包括在測定的色譜系統(tǒng)中未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物與待測物的保留值相同（共出峰）；或熱降解產(chǎn)物與待測物的結(jié)構(gòu)相同（如甲氧基熱裂解產(chǎn)生甲醇）。當測定的有機溶劑殘留量超出限度，但未能確定供試品中是否有未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物對測定有干擾作用時，應(yīng)通過試驗排除干擾作用的存在。對第一類干擾作用，通常采用在另一種極性相反的色柱系統(tǒng)中對相同供試品再進行測定，比較不同色譜系統(tǒng)中測定結(jié)果的方法。如兩者結(jié)果一致，則可以排除測定中有共出峰的干擾；如兩者結(jié)果不一致，則表明測定中有共出峰的干擾。對第二類干擾作用，通常要通過測定已知不含該溶劑的對照樣品來加以判斷。（4）含氮堿性化合物的測定普通氣相色譜的不銹鋼管路、進樣器的襯管等對有機胺等含氮堿性化合物具有較強的吸附作用，致使其檢出靈敏度降低。應(yīng)采用惰性的硅鋼材料或鎳鋼材料管路；采用溶液直接進樣法測定時，供試品溶液應(yīng)不呈酸性，以免待測物與酸反應(yīng)后不易汽化。通常采用弱極性的色譜柱或其填料經(jīng)堿處理過的色譜柱分析含氮堿性化合物，如果采用胺分析專用柱進行分析效果更好。對不宜采用氣相色譜法測定的含氮堿性化合物，如N-甲基毗咯烷酮等，可采用其它方法如離子色譜法等測定。檢測器的選擇對含鹵素元素的殘留溶劑如氯仿等，采用電子捕獲檢測器(ECD)，易得到高的靈敏度。由于不同的實驗室在測定同一供試品時可能采用了不同的實驗方法，當測定結(jié)果處于合格不合格邊緣時，以采用內(nèi)標法或標準加入法為準。頂空平衡溫度一般應(yīng)低于溶解供試品所用溶劑的沸點10°C以下，能滿足檢測靈敏度即可；對于沸點過高的溶劑，如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙