解讀全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

解讀《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）》精選課件樣品的采集根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的具體要求，確定采集樣品的種類、處理、保存及運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和方法，按照臨床采血技術(shù)規(guī)范的要求操作，遵守生物安全要求。用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量靜脈血，室溫下自然放置1-2h待血液凝固，血塊收縮后經(jīng)3000r/min離心15min，吸出血清備用。精選課件抗凝血的采集用加有抗凝劑的真空采血管（或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管），反復(fù)輕搖，分離血漿和血細(xì)胞備用。應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽?，如CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定可選用K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉；HIV病毒分離、核酸定性/定量檢測(cè)可選用K3EDTA或枸櫞酸鈉。用于核酸定性檢測(cè)時(shí)，采集的抗凝全血應(yīng)在4~8h內(nèi)分離PBMC和血漿，否則應(yīng)在24~48h內(nèi)分離血漿和血細(xì)胞。精選課件樣品保存用于抗體檢測(cè)的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20℃以下，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的樣品可存放于2－8℃。用于抗原和核酸檢測(cè)的血漿和血細(xì)胞樣品應(yīng)凍存于-20℃以下，進(jìn)行病毒RNA檢測(cè)的樣品如需保存3個(gè)月以上應(yīng)置于-80℃。用于CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定的樣品不能長(zhǎng)期保存，樣品采集時(shí)間超過48h則不可檢測(cè)。艾滋病檢測(cè)篩查實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的篩查陽(yáng)性樣品應(yīng)及時(shí)送確證實(shí)驗(yàn)室，篩查陰性樣品可根據(jù)具體需要決定保存時(shí)間，建議至少保存1~2個(gè)月。特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時(shí)間。艾滋病檢測(cè)確證實(shí)驗(yàn)室收到的篩查陽(yáng)性樣品，無論確證結(jié)果任何，均應(yīng)將剩余的樣品保存至少10年，特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時(shí)間。精選課件篩查試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送

如需送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)檢，需要核對(duì)身份，必須補(bǔ)充個(gè)人信息（姓名和身份證號(hào)碼）并同時(shí)填寫HIV抗體篩報(bào)告和復(fù)檢單送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實(shí)驗(yàn)室，或直接送確證實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢。（必要時(shí)采集第二份血樣）精選課件樣品的運(yùn)送、運(yùn)送條件用于抗體檢測(cè)的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運(yùn)送。用于CD4和CD8T淋巴細(xì)胞測(cè)定的樣品應(yīng)在室溫下（18~25℃）或4℃（特殊要求時(shí)）運(yùn)送。用于病毒載量檢測(cè)的樣品應(yīng)在-20℃以下運(yùn)輸。

DBS樣品應(yīng)在室溫下（18~25℃）運(yùn)送。每一件包裝的體積以不超過50ml為宜。嚴(yán)禁使用玻璃容器。運(yùn)送血清或血漿，除特殊情況外一般不運(yùn)送全血。包裝采用WHO提出的三級(jí)包裝系統(tǒng)。精選課件HIV抗體檢測(cè)目的：監(jiān)測(cè)、診斷、及血液篩查的HIV抗體檢測(cè)要點(diǎn)：篩查試驗(yàn)陽(yáng)性不能出陽(yáng)性報(bào)告；嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序；嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作；注意防止樣品間交叉污染。HIV抗體篩查試驗(yàn)的方法

ELISA

快速檢測(cè)（RT）：明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）；斑點(diǎn)EIA或斑點(diǎn)ELISA（dot-EIA）；斑點(diǎn)免疫膠體金（膠體硒）快速試驗(yàn)；艾滋病唾液檢測(cè)卡；其他。精選課件確證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的流程方法：免疫印跡試驗(yàn)（WB）條帶免疫試驗(yàn)，放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）及免疫熒光試驗(yàn)（IFA）等。試劑選擇：使用HIV-1/2混合型試劑進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：陰性反應(yīng)，報(bào)告HIV抗體陰性（—）陽(yáng)性反應(yīng)，報(bào)告HIV—1抗體陽(yáng)性（+）不是陰性反應(yīng)，又不滿足陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告HIV抗體不確定（±）結(jié)合流行病學(xué)資料，可以在4周后隨訪檢測(cè)，如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，則報(bào)告陽(yáng)性；如隨訪期間帶型有進(jìn)展，但不滿足陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)繼續(xù)隨訪到8周。如帶型沒有進(jìn)展或稱陰性反應(yīng)則報(bào)告陰性；滿足HIV抗體陽(yáng)性診斷標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告陽(yáng)性，不滿足陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)可視情況決定是否繼續(xù)隨訪。精選課件檢測(cè)信息的上報(bào)各級(jí)艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室所在結(jié)構(gòu)每月應(yīng)填寫《HIV抗體檢測(cè)數(shù)及陽(yáng)性人數(shù)統(tǒng)計(jì)報(bào)表》并于每月10日前完成網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。未開展網(wǎng)絡(luò)直報(bào)的單位，由縣級(jí)疾病預(yù)防控制結(jié)構(gòu)收集信息后統(tǒng)一上報(bào)。精選課件質(zhì)量控制質(zhì)量控制具體內(nèi)容：指將質(zhì)控品和檢測(cè)標(biāo)本一起實(shí)驗(yàn)操作，從質(zhì)控值了解分析實(shí)驗(yàn)過程的質(zhì)量情況。為了便于觀測(cè)和概括，又使用了一些統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行歸納和分析。質(zhì)量控制貫穿實(shí)驗(yàn)的整個(gè)過程實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中的操作實(shí)驗(yàn)后數(shù)據(jù)的整理精選課件內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清指每個(gè)試劑盒內(nèi)廠方提供的一套陰性和陽(yáng)性對(duì)照血清。外部對(duì)照質(zhì)控血清各級(jí)實(shí)驗(yàn)室為了監(jiān)控每次檢測(cè)的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及檢驗(yàn)試劑盒批間差異而設(shè)置的一套陰性和陽(yáng)性對(duì)照血清。精選課件質(zhì)控血清外部對(duì)照質(zhì)控血清的組成理想的外部對(duì)照應(yīng)該包括陽(yáng)性對(duì)照、弱陽(yáng)性對(duì)照、臨界值對(duì)照和陰性對(duì)照。但是目前各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該在每次實(shí)驗(yàn)時(shí)設(shè)置一個(gè)單一濃度水平的質(zhì)控品即弱陽(yáng)性對(duì)照。這個(gè)弱陽(yáng)性對(duì)照的值以設(shè)定在各試劑盒Cut-off值的2—3倍為宜。精選課件質(zhì)控血清外部對(duì)照質(zhì)控血清的來源和制備

—通過向有關(guān)機(jī)構(gòu)購(gòu)買獲得

—通過實(shí)驗(yàn)室制備獲得混合HIV抗體陽(yáng)性或陰性人血清，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，用0.2um生物濾膜過濾除菌后再進(jìn)行56℃30分鐘加熱滅活處理.弱陽(yáng)性對(duì)照可以通過使用HIV抗體陰性的正常人血清梯度稀釋HIV抗體強(qiáng)陽(yáng)性血清并經(jīng)標(biāo)定后得到.弱陽(yáng)性對(duì)照的OD值以該試劑盒臨界值Cut-off的2~3倍為宜。精選課件外部對(duì)照質(zhì)控血清的保存

一次制備量應(yīng)該足夠本實(shí)驗(yàn)室使用一年；均一、無菌；標(biāo)定后等量分裝，每份應(yīng)足夠一周實(shí)驗(yàn)使用；分類作好標(biāo)記，使用不同顏色的標(biāo)簽；存放在—70℃，如無條件則存在非自動(dòng)除霜的—20℃冰箱；一旦融解以后應(yīng)該存放在2-8℃，一周后必須棄去，不能重新凍存。精選課件建立質(zhì)控圖質(zhì)控圖把檢驗(yàn)性能數(shù)據(jù)與計(jì)算出的“控制線”進(jìn)行比較的圖。質(zhì)控圖的構(gòu)成一中心橫線及其上、下各一或兩條平行的控制線，并有按時(shí)間順序填入的各質(zhì)控血清測(cè)定的數(shù)值。精選課件建立質(zhì)控圖參數(shù)算術(shù)平均值（X）代表一組S/CO值的平均值，為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著意義，應(yīng)該采用至少20次（天）所測(cè)得的外部對(duì)照質(zhì)控血清S/CO值結(jié)果計(jì)算出平均值。標(biāo)準(zhǔn)差（S）是描述樣本與均數(shù)之間離散程度的一個(gè)指標(biāo)，是與對(duì)照值的S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。變異系數(shù)（CV）是反映各次S/CO值相對(duì)于均值的離散程度的一個(gè)指標(biāo)，可以用于衡量被檢標(biāo)本檢測(cè)的重復(fù)性或精密度?？刂葡抻蓪?shí)驗(yàn)室根據(jù)對(duì)質(zhì)控物檢測(cè)結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。精選課件建立質(zhì)量控制圖

關(guān)鍵是對(duì)控制限的選擇?！诔Ｒ?guī)條件下，對(duì)同一批血清連續(xù)測(cè)定20次或20次以上，獲得一組數(shù)據(jù)，求均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，20個(gè)數(shù)據(jù)中超出2S或3S的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除?！獙⒕岛蜆?biāo)準(zhǔn)差分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。每個(gè)質(zhì)控對(duì)照的OD值/Cut-off比值（S/CO，S為樣品A值，CO為Cut-off值）作縱座標(biāo)（Y軸），每一次（天）實(shí)驗(yàn)作橫座標(biāo)（X軸）建立質(zhì)控圖

—從第21次起，每次檢測(cè)的質(zhì)控血清的結(jié)果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。精選課件質(zhì)控圖的判定分析

質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時(shí)應(yīng)具有較低的假失控概率?？疾煸囼?yàn)系統(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。要求：出現(xiàn)一次2S范圍的變化時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測(cè)需要進(jìn)一步觀察。出現(xiàn)下列情況時(shí)，應(yīng)暫停檢測(cè)查找原因：出現(xiàn)一次3S范圍的變化。連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2S范圍的變化。連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1S范圍的變化。連續(xù)10次結(jié)果都在1S范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。精選課件質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點(diǎn)如果改用新批號(hào)試劑盒，必須重新制定質(zhì)控框架圖，并建議對(duì)新舊兩批試劑盒進(jìn)行平行性試驗(yàn)，平行性試驗(yàn)包括外部對(duì)照質(zhì)控血清和前一批試劑盒中的內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清。這種平行性試驗(yàn)有利于質(zhì)量控制和分析。要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。對(duì)同一批質(zhì)控物連續(xù)測(cè)定得到20個(gè)數(shù)據(jù)，求均值和標(biāo)準(zhǔn)差，超出2S或3S的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)量控制會(huì)，討論本月檢測(cè)的質(zhì)量控制情況，檢驗(yàn)人員在每次檢驗(yàn)之前，了解一個(gè)質(zhì)控圖的結(jié)果，做到心中有數(shù)。精選課件質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點(diǎn)建議長(zhǎng)期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒。由于不同廠家生產(chǎn)的ELISA試劑盒所使用的HIV抗原的構(gòu)成以及使用比例不同，因此對(duì)同一標(biāo)本的反應(yīng)會(huì)有差異，表現(xiàn)在A值相差較大，對(duì)外部對(duì)照質(zhì)控血清結(jié)果的分析造成困難。使用新批號(hào)或使用不同廠家的試劑盒都必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。原則上，更換不同廠家生產(chǎn)的試劑盒后，結(jié)果偏離程度較大時(shí)，必須重新計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差并建立新的質(zhì)控圖。精選課件質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點(diǎn)發(fā)現(xiàn)全部對(duì)照值劇烈位移，立即報(bào)告室主管，分析原因是試劑盒質(zhì)量問題，立刻通知廠家。外部和內(nèi)部陰性對(duì)照質(zhì)控血清出現(xiàn)高值傾向，應(yīng)該注意試劑，技術(shù)或設(shè)備出現(xiàn)問題（如洗板機(jī)等）。實(shí)驗(yàn)室配制新批次的外部對(duì)照質(zhì)控或變動(dòng)外部對(duì)照質(zhì)控的值時(shí)，必須重新計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，建立新的質(zhì)控圖。操作者在測(cè)定質(zhì)控血清時(shí)，發(fā)現(xiàn)質(zhì)控血清數(shù)據(jù)違背了控制規(guī)則，應(yīng)填寫失控報(bào)告單，上交室負(fù)責(zé)人，由室負(fù)責(zé)人決定是否發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告。精選課件變異系數(shù)（CV）分析變異系數(shù)（CV）反映各次S/CO值相對(duì)于均值離散程度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來衡量檢測(cè)的重復(fù)性或精密度.在<20%區(qū)間可表示對(duì)照值處穩(wěn)定狀態(tài)，雖然對(duì)均值仍有一定的離散，但從標(biāo)準(zhǔn)差所規(guī)定的可信限而言，仍然可靠的。在不同的試劑盒對(duì)照之間持續(xù)出現(xiàn)高值CV（>20%），可以提示加樣量不一。校準(zhǔn)加樣器以及每次更換吸頭加樣可以減少CV值使對(duì)照值更趨一致。精選課件快速檢測(cè)質(zhì)控試劑內(nèi)對(duì)照在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過程質(zhì)控，說明實(shí)驗(yàn)操作全部完成并且實(shí)驗(yàn)所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測(cè)區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控。如實(shí)驗(yàn)完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說明試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該試驗(yàn)結(jié)果無效，樣品須重檢。外部質(zhì)控品對(duì)照可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽(yáng)性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽(yáng)性樣品。不能使用酶聯(lián)試驗(yàn)的外部質(zhì)控品。需做質(zhì)量控制的情況：更換試劑批號(hào)；更換檢測(cè)人員；更換包裝；每個(gè)檢測(cè)日；更換試劑廠家。精選課件提示存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視的情況：運(yùn)輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理?yè)p傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯(cuò)誤、缺失或字跡模糊（產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號(hào)和貨號(hào)，失效期或/和生產(chǎn)日期）；缺失目錄；泄露或污染；不適宜的存放條件；保護(hù)包裝紙破損或污染；未達(dá)到質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（陽(yáng)性/陰性控制結(jié)果以及質(zhì)控條帶出現(xiàn)與否等標(biāo)志）。建議每個(gè)檢測(cè)日檢測(cè)一次陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測(cè)量大于50份樣品，至少應(yīng)做2次質(zhì)控。精選課件生物危害人類免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類病原微生物，第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。應(yīng)在符合Ⅱ級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL—2）要求的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行：

HIV抗體檢測(cè)（篩查和確證實(shí)驗(yàn)）、抗原檢測(cè)和相關(guān)的免疫學(xué)檢測(cè)；

HIV核酸提取和檢測(cè)；

HIV陽(yáng)性樣品的保存，包括全血、血清、血漿和其他組織（液）、核酸提取物。應(yīng)在符合Ⅲ級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL—3）要求的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行：

HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)及研究工作及其他需要應(yīng)用活病毒的研究工作；

HIV病毒株的保存。精選課件職業(yè)暴露原則及時(shí)處理原