五種殺蟲劑對殼高1502cm方斑東風(fēng)螺萎螺的生物急性毒性試驗(yàn)

五種殺蟲劑對殼高1502cm方斑東風(fēng)螺萎螺的生物急性毒性試驗(yàn)

方斑鳳凰蝸牛屬于腹部科、前體綱、腹部科和頭孢菌科，生活在5.10m深的砂質(zhì)粘土海中，主要分布在中國東南沿海、南亞和日本沿海地區(qū)。方斑東風(fēng)螺味道鮮美,具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值和良好養(yǎng)殖開發(fā)前景。近年來,我囯南方沿海省份方斑東風(fēng)螺人工養(yǎng)殖發(fā)展迅速,但在養(yǎng)殖過程中,暴發(fā)性疾病時(shí)有發(fā)生,病害已成為制約其人工養(yǎng)殖的最主要因素。寄生蟲性疾病是方斑東風(fēng)螺養(yǎng)殖過程中常見的疾病,為了有效防治該疾病的發(fā)生與蔓延,在方斑東風(fēng)螺養(yǎng)殖過程中經(jīng)常要使用一些殺蟲類藥物,然而,由于對方斑東風(fēng)螺對各種殺蟲類藥物的耐受性缺乏研究與了解,常因用藥不當(dāng)而造成損失。水生生物毒性試驗(yàn)現(xiàn)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于測定化學(xué)物質(zhì)毒性和評價(jià)水質(zhì)衛(wèi)生狀況等領(lǐng)域。水生生物毒性試驗(yàn)按試驗(yàn)生物與毒物接觸時(shí)間的長短,可分為急性毒性試驗(yàn)和慢性毒性試驗(yàn)。黃英等研究了幾種藥物對波部東風(fēng)螺(B.formosaehabei)早期發(fā)育的影響,李雷彬等研究了5種藥物對方斑東風(fēng)螺面盤幼蟲的急性毒性,郭增華等研究了亞硝酸鹽氮對方斑東風(fēng)螺毒性,師尚麗等研究了不同pH和鹽度下氨氮對方斑東風(fēng)螺的毒性。目前,尚無有關(guān)殺蟲劑對方斑東風(fēng)螺毒性研究的報(bào)道,因此,筆者利用水生生物急性毒性試驗(yàn)測定了5種常用殺蟲劑對方斑東風(fēng)螺稚螺的半數(shù)致死濃度(Semi-lethalconcentration,LC50)和安全質(zhì)量濃度,旨在為方斑東風(fēng)螺寄生蟲病防治藥物的使用提供指導(dǎo)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1實(shí)驗(yàn)材料方斑東風(fēng)螺由海南庚申公司東風(fēng)螺養(yǎng)殖基地提供,個(gè)體殼高(1.5±0.2)cm。1.1.2硫酸銅硫酸亞鐵試劑福爾馬林(分析純,汕頭市光華化學(xué)廠),無水硫酸銅(分析純,廣東光華化學(xué)廠),硫酸銅硫酸亞鐵合劑(m硫酸銅∶m硫酸亞鐵=5∶2)(分析純,廣州化學(xué)試劑廠),敵百蟲(有效成分80%,成都乾坤動(dòng)物藥業(yè)有限公司)和高錳酸鉀(分析純,天津市大茂化學(xué)試劑廠)。1.1.3試驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)容量為3.5L的水缸里進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)沙濾后充分曝氣的海水,溶解氧維持在5mg·L-1以上,水溫22～25℃。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1方斑：東風(fēng)螺旋栽培從養(yǎng)殖場將方斑東風(fēng)螺充氣干運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室,先放在底部鋪有2～3cm厚細(xì)沙的水族箱暫養(yǎng),1周后用于實(shí)驗(yàn)。1.2.2福爾馬林、硫酸銅、硫酸亞鐵的配制敵百蟲按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的質(zhì)量濃度直接將其加入養(yǎng)殖水體中;福爾馬林、硫酸銅、硫酸銅硫酸亞鐵合劑(m硫酸銅∶m硫酸亞鐵=5∶2)、敵百蟲和高錳酸鉀則先配成高濃度母液,然后按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將母液加入養(yǎng)殖水體中。1.2.3藥劑濃度確定參照已有的文獻(xiàn),對各殺蟲劑分別設(shè)計(jì)5個(gè)質(zhì)量濃度梯度以測定其對方斑東風(fēng)螺的毒性。每個(gè)實(shí)驗(yàn)水缸中加入2L過濾海水,然后分別加入殺蟲劑至所需質(zhì)量濃度,每個(gè)水缸投放方斑東風(fēng)螺5個(gè),水體溫度22～25℃,pH值7.5～8.5。分別記錄各組24h和48h的死亡率,在各種藥物的5個(gè)質(zhì)量濃度中,確定0%死亡的最高藥物質(zhì)量濃度(LC0%)和方斑東風(fēng)螺全部死亡的最低藥物質(zhì)量濃度(LC100%),為后續(xù)實(shí)驗(yàn)確定擬設(shè)置的藥物質(zhì)量濃度范圍。1.2.4方斑種類和責(zé)任的確定根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)對5種殺蟲劑分別確定的LC0%和LC100%,在LC0%和LC100%范圍內(nèi)等比設(shè)置5個(gè)質(zhì)量濃度梯度的實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)空白對照組,每組放入方斑東風(fēng)螺10個(gè),每組設(shè)1個(gè)重復(fù)組,用預(yù)實(shí)驗(yàn)相同的方法養(yǎng)殖。記錄各組24h和48h方斑東風(fēng)螺的死亡率。方斑東風(fēng)螺死亡的判斷標(biāo)準(zhǔn):用鑷子接觸螺的腹足,若腹足有反應(yīng),則證明螺還活著;若腹足沒有反應(yīng),且肌肉僵硬,則認(rèn)為螺已經(jīng)死亡。1.2.5安全質(zhì)量濃度死亡率=死亡螺數(shù)/螺的總數(shù);用直線內(nèi)插法求出LC50,再根據(jù)下列公式求出安全質(zhì)量濃度:安全質(zhì)量濃度=LC50,48h×0.3/(LC50,24h/LC50,48h)2,其中LC50,48h為用藥后48h內(nèi)的LC50,LC50,24h為用藥后24h內(nèi)的LC50;死亡率概率通過查找《標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布概率分布表》確定。2結(jié)果與分析2.1凈化液中各質(zhì)量濃度的敵百蟲對支持的低碳安全檢測根據(jù)敵百蟲對方斑東風(fēng)螺毒性的檢測的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,48h的LC0%為224mg·L-1,LC100%為700mg·L-1。根據(jù)以上2個(gè)質(zhì)量濃度,對等分成5組的倍比系數(shù)為1.33,確定敵百蟲的5個(gè)實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度依次為700,526,396,298和224mg·L-1。這5個(gè)質(zhì)量濃度的敵百蟲分別對方斑東風(fēng)螺毒性的檢測結(jié)果見表1。以敵百蟲溶液的濃度對數(shù)為橫坐標(biāo)、方斑東風(fēng)螺死亡率的概率單位為縱坐標(biāo)繪制曲線,并作回歸分析,用藥為24h的回歸曲線方程為y=6.12x-32.75,用藥為48h的回歸曲線方程為y=4.84x-24.10。通過回歸曲線計(jì)算敵百蟲對東風(fēng)螺的LC50,用藥24h的LC50,24h=478.19mg·L-1,用藥48h的LC50,48h=407.48mg·L-1;安全質(zhì)量濃度為89.23mg·L-1。17006.552013655.38201008.0925266.27208404.7413655.3833965.98203153.969454.8742985.70202103.723153.9652245.4120001.91001.9160—2000—00—2.2硫酸銅的安全檢驗(yàn)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,48h內(nèi)硫酸銅對方斑東風(fēng)螺的LC0%為2.2mg·L-1,LC100%為16.0mg·L-1。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置的5個(gè)硫酸銅實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度分別為12.0,9.0,6.8,5.1和3.8mg·L-1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。以硫酸銅溶液的質(zhì)量濃度對數(shù)為橫坐標(biāo)、方斑東風(fēng)螺死亡率的概率單位為縱坐標(biāo)繪制曲線,并作回歸分析,用藥24h的回歸曲線方程為y=2.73x+0.19,用藥48h的回歸曲線方程為y=2.73x+0.19。通過回歸曲線計(jì)算硫酸銅對東風(fēng)螺的LC50,用藥24h的LC50,24h=34.81mg·L-1,用藥48h的LC50,48h=5.81mg·L-1;安全質(zhì)量濃度為0.05mg·L-1。112.02.4820153.3619956.6429.02.2020001.9114705.5236.81.9120001.9111555.1345.11.6320001.9110505.0053.81.3420001.918404.7560.0—2000—00—2.3硫酸銅硫酸亞鐵的合成配方m根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,硫酸銅硫酸亞鐵合劑(m硫酸銅∶m硫酸亞鐵=5∶2)對方斑東風(fēng)螺48h的LC0%為6.2mg·L-1,LC100%為26.0mg·L-1。據(jù)此設(shè)置的5個(gè)硫酸銅硫酸亞鐵合劑的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度分別為26.0,20.0,15.0,11.0和8.0mg·L-1。對表3結(jié)果作回歸分析,用藥24h的回歸曲線方程為y=1.68x+0.12,用藥48h的回歸曲線方程為y=3.15x-2.99。通過回歸曲線計(jì)算硫酸銅硫酸亞鐵合劑(m硫酸銅∶m硫酸亞鐵=5∶2)對東風(fēng)螺的LC50,用藥24h的LC50,24h=18.17mg·L-1,用藥48h的LC50,48h=12.68mg·L-1;安全質(zhì)量濃度為1.86mg·L-1。126.03.262017855.38201008.09220.03.002017855.3817855.38315.02.71207354.6113655.30411.02.40206304.4811555.1358.02.0820153.366304.4860.0—2000—00—2.4福爾馬林對方斑表的毒性根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,福爾馬林對方斑東風(fēng)螺48h的LC0%為43.0mg·L-1,LC100%為90.0mg·L-1。據(jù)此設(shè)置的5個(gè)福爾馬林實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度為90.0,75.0,62.5,52.0和43.0mg·L-1。各質(zhì)量濃度的福爾馬林對方斑東風(fēng)螺的毒性結(jié)果見表4。經(jīng)回歸分析,用藥24h的回歸曲線方程為y=5.24x-18.06,用藥48h的回歸曲線方程為y=7.59x-26.62。通過回歸曲線計(jì)算得到的LC50,24h為81.45mg·L-1,LC50,48h為64.72mg·L-1,安全質(zhì)量濃度為12.21mg·L-1。190.04.502012605.25201008.09275.04.32209454.8713655.30362.54.14203153.967354.61452.03.9520001.912103.72543.03.7620001.91001.9160.0—2000—00—2.5酸鈉對方斑種類,安全濃度經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)得出高錳酸鉀對方斑東風(fēng)螺(48h)的LC0%為20.0mg·L-1,LC100%為80.0mg·L-1。根此設(shè)置的高錳酸鉀實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度為80.0,60.0,45.0,34.0和26.0mg·L-1,毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。經(jīng)回歸分析,高錳酸鉀對方斑東風(fēng)螺24h的回歸曲線方程為y=2.73x-7.25,48h的回歸曲線方程為y=3.71x-8.98。通過回歸曲線計(jì)算得到的LC50,24h為89.12mg·L-1,LC50,48h為43.38mg·L-1,安全濃度為3.10mg·L-1。180.04.38209454.87201008.09260.04.09202103.7213655.30345.03.8120153.368404.74434.03.5320001.915254.32526.03.2620001.91153.3660.0—2000—00—3種藥物對方斑地理螺的安全濃度敵百蟲是一種高效低毒低殘留的有機(jī)磷殺蟲劑,在酸性條件下穩(wěn)定,但遇堿則分解為毒性更強(qiáng)的敵敵畏。敵百蟲水解后產(chǎn)生一種膽堿酯酶的抑制劑,從而抑制膽堿酯酶的活性,使昆蟲、甲殼類、蠕蟲等因神經(jīng)失常而中毒死亡。敵百蟲在水產(chǎn)病害防治中的用量一般都在1mg·L-1以下,而敵百蟲對方斑東風(fēng)螺的LC50,48h為407.48mg·L-1,這表明它對方斑東風(fēng)螺的毒性較低,并且,在常規(guī)濃度下使用,對方斑東風(fēng)螺也十分安全。福爾馬林溶液能使蛋白質(zhì)沉淀,低濃度福爾馬林溶液與細(xì)胞質(zhì)的氨基部分結(jié)合,使其烷基化而具有極強(qiáng)的殺菌作用。本研究結(jié)果表明,福爾馬林對方斑東風(fēng)螺的LC50,48h為64.72mg·L-1,安全質(zhì)量濃度為12.21mg·L-1,而其對斑點(diǎn)叉尾鮰的LC50,48h為6.0mg·L-1,對長吻鮠的安全質(zhì)量濃度為6.6mg·L-1。硫酸銅可與蛋白質(zhì)結(jié)合形成絡(luò)合物(螯合物),使蛋白質(zhì)變性、沉淀,致使寄生蟲的酶失去活性,從而起到殺死寄生蟲作用,尤其是對原生動(dòng)物寄生蟲有較強(qiáng)殺傷力。硫酸銅對方斑東風(fēng)螺的LC50,48h為5.81mg·L-1,分別高于羌高原鰍的0.5mg·L-1、長吻鮠的0.064mg·L-1、黃顙魚的0.28mg·L-1和泥鰍的0.26mg·L-1,說明其對方斑東風(fēng)螺的毒性較大,不過,由于硫酸銅單獨(dú)使用易殘留,仍建議在生產(chǎn)上慎用。硫酸亞鐵與硫酸銅有協(xié)同作用,同時(shí)使用能提高其效果,本研究結(jié)果表明,硫酸銅硫酸亞鐵合劑(m硫酸銅∶m硫酸亞鐵=5∶2)對方斑東風(fēng)螺的LC50,48h為12.68mg·L-1,比硫酸銅高,進(jìn)一步說明前者對方斑東風(fēng)螺的毒性比后者低,因此,在生產(chǎn)上若一定要選擇銅制劑防治東風(fēng)螺寄生蟲病的話,建議選擇硫酸銅硫酸亞鐵合劑。高錳酸鉀是一種強(qiáng)氧化劑,溶于水后產(chǎn)生新生態(tài)氧,可迅速氧化有機(jī)物,破壞微生物的組織,從而起到殺菌、殺蟲和解毒作用。高錳酸鉀對方斑東風(fēng)螺的LC50,48h為43.38mg·L-1,安全質(zhì)量濃度為3.10mg·L-1,分別高于羌高原鰍的0.94mg·L-1、南方大口鯰0.59mg·L-1和泥鰍0.75mg·L-1,表明高錳酸鉀溶液對方斑東風(fēng)稚螺的毒性較低。不過,使用高錳酸鉀后螺體染成棕黃色,螺殼表面產(chǎn)生許多絲狀物質(zhì),雖然其LC50,48h較高,但實(shí)驗(yàn)螺反應(yīng)遲鈍,活力差,在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將其轉(zhuǎn)移到清潔水中養(yǎng)殖,在1周內(nèi)仍有