臨床標(biāo)本細(xì)菌檢驗(yàn)課件

六原則避免雜菌污染不同期不同標(biāo)本用抗生素以前采集病變明顯部位運(yùn)送注意保存標(biāo)本必須新鮮一、臨床標(biāo)本的采集和送檢第一節(jié)概述六原則避免雜菌污染不同期不同標(biāo)本用抗生素以前采集病變明顯部位認(rèn)真核對(duì)：了解診斷：聯(lián)系臨床：（一）臨床標(biāo)本的采集：腸道、痰、口咽含涑液、血液、腦脊液、骨髓、糞便、尿液、胸腹水等、認(rèn)真核對(duì)：（一）臨床標(biāo)本的采集：腸道、痰、口咽含涑液、血液、√1.細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)單√1.細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)單√√2.標(biāo)本容器：無(wú)菌容器3.采集時(shí)間、部位：4.無(wú)菌操作：對(duì)無(wú)菌或有菌標(biāo)本不同處理（二）臨床標(biāo)本的送檢1.送檢時(shí)間、方法：及時(shí)送檢、低溫或保溫保存2.常規(guī)性細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本：應(yīng)保存4攝氏度3.厭氧菌培養(yǎng)的標(biāo)本：厭氧保存4.低溫敏感的細(xì)菌（奈瑟菌，流感嗜血桿菌）應(yīng)立即處理5.任何臨床標(biāo)本。應(yīng)專人運(yùn)送、注意防護(hù)6.了解標(biāo)本的來(lái)源和臨床信息2.標(biāo)本容器：無(wú)菌容器（三）臨床標(biāo)本的處理原則：立即接種、適宜培養(yǎng)1.組織：切碎2.體液：離心3.棉拭子：取多個(gè)標(biāo)本4.糞便：先觀察，再取材5.痰：先觀察，再取材6.厭氧培養(yǎng)標(biāo)本：早接種，厭氧培養(yǎng)7.血液：立即接種（三）臨床標(biāo)本的處理原則：立即接種、適宜培養(yǎng)二、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的基本程序（一）培養(yǎng)基的選擇原則（二）細(xì)菌檢驗(yàn)的基本流程（三）診斷試驗(yàn)的選擇二、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的基本程序（一）培養(yǎng)基的選擇原則選擇合適的培基養(yǎng)和培養(yǎng)方法選擇合適的培基養(yǎng)和培養(yǎng)方法臨床標(biāo)本的檢驗(yàn)程序標(biāo)本直接檢查分離培養(yǎng)：選擇培養(yǎng)基BA，SS，MAC可疑菌落藥物敏感試驗(yàn)鑒定生化，血清學(xué)鑒定，補(bǔ)充試驗(yàn)臨床標(biāo)本的檢驗(yàn)程序標(biāo)本直接檢查分離培養(yǎng)：選擇培養(yǎng)基BA，S診斷試驗(yàn)選擇原則1.選擇最有鑒定價(jià)值的試驗(yàn)2.選擇簡(jiǎn)易、快速、方便的試驗(yàn)3.綜合考慮試驗(yàn)的敏感性和特異性診斷試驗(yàn)選擇原則1.選擇最有鑒定價(jià)值的試驗(yàn)三、細(xì)菌學(xué)鑒定的方法1.細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)2.生物化學(xué)試驗(yàn)3.血清學(xué)試驗(yàn)4.抑菌試驗(yàn)5.分子生物學(xué)檢測(cè)6.噬菌體分型試驗(yàn)7.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)三、細(xì)菌學(xué)鑒定的方法1.細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)四、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)報(bào)告原則1.初步報(bào)告2.細(xì)菌鑒定3.藥敏試驗(yàn)四、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)報(bào)告原則1.初步報(bào)告（一）血液中常見(jiàn)病原體確診菌血癥和敗血癥金黃色葡萄球菌見(jiàn)癤、癰、膿腫引起的敗血癥革蘭陰性菌見(jiàn)尿路、膽道、胃腸道引起的敗血癥草綠色鏈球菌引起亞急性心內(nèi)膜炎銅綠、金葡引起燒傷后敗血癥（一）血液中常見(jiàn)病原體確診菌血癥和敗血癥第二節(jié)臨床常見(jiàn)標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（一）血液中常見(jiàn)病原體（見(jiàn)表18-2）確診菌血癥和敗血癥金黃色葡萄球菌見(jiàn)癤、癰、膿腫引起的敗血癥革蘭陰性菌見(jiàn)尿路、膽道、胃腸道引起的敗血癥草綠色鏈球菌引起亞急性心內(nèi)膜炎銅綠、金葡引起燒傷后敗血癥一、血液及骨髓標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)第二節(jié)臨床常見(jiàn)標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（一）血液中常見(jiàn)病原體（見(jiàn)（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)1.檢驗(yàn)程序：（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)1.檢驗(yàn)程序：2.檢驗(yàn)方法普通培養(yǎng)：分別做厭氧和需氧培養(yǎng)陽(yáng)性表現(xiàn)：均勻渾濁，革蘭陰性菌渾濁有綠色，肺炎鏈球菌表面有菌膜有綠色熒光，銅綠假單胞菌下面沉淀，鏈球菌溶血，溶血性鏈球菌渾濁有膠胨，葡萄球菌灰白色菌膜，枯草芽孢桿菌涂片革蘭染色鏡檢，直接藥敏、分離培養(yǎng)報(bào)告臨床陰性結(jié)果7天報(bào)告

2.檢驗(yàn)方法普通培養(yǎng)：分別做厭氧和需氧培養(yǎng)特殊培養(yǎng)腦膜炎奈瑟菌培養(yǎng)：37℃加5-10%CO2

傷寒或其它沙門(mén)菌：接種葡萄糖膽汁肉湯或膽鹽肉湯草綠色鏈球菌：胰酶酪蛋白大豆肉湯，同時(shí)做需要、CO2和厭氧培養(yǎng)L型細(xì)菌：高滲液體培養(yǎng)基，“油煎蛋”菌落厭氧培養(yǎng)：真菌培養(yǎng)：特殊培養(yǎng)二、腦脊液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（二）標(biāo)本采集醫(yī)師以最嚴(yán)格的無(wú)菌技術(shù)做腰椎穿刺。氣溫較低時(shí)，應(yīng)保溫送檢或床邊接種后，立即孵育（一）腦脊液中常見(jiàn)病原體（表18-3）二、腦脊液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（二）標(biāo)本采集（一）腦脊液中常見(jiàn)病（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)2.檢驗(yàn)方法

-腦脊液外觀：結(jié)核性膜炎常為毛玻璃樣。其它細(xì)菌引起化膿性腦膜炎，腦脊液都明顯渾濁。

-涂片鏡檢：混濁或膿樣腦脊液可直接涂片,革蘭染色，鏡檢。無(wú)色透明的腦脊液,應(yīng)以3000r/min離心10-15分鐘,取沉淀物涂片,革蘭染色鏡檢，根據(jù)染色反應(yīng)及形態(tài)特征，可初步提出感染細(xì)菌的種類。1.檢驗(yàn)程序：見(jiàn)表18-3注意增菌培養(yǎng)（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)2.檢驗(yàn)方法1.檢驗(yàn)程序：見(jiàn)表18-3注意增（3）分離培養(yǎng)用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或離心沉淀物，分別接種于BA或CA平皿上，置35℃5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)18-24小時(shí)，檢視有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。根據(jù)菌落特點(diǎn)及染色后鏡檢的特征，初步判斷細(xì)菌種類，并進(jìn)一步做生化鑒定及血清學(xué)檢查加以鑒定，并作出報(bào)告。（3）分離培養(yǎng)用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或離心沉淀物，分別接種于3.結(jié)果報(bào)告細(xì)菌性腦膜炎的病原學(xué)診斷鑒別診斷病毒性腦膜炎3.結(jié)果報(bào)告細(xì)菌性腦膜炎的病原學(xué)診斷（一）尿液標(biāo)本中常見(jiàn)的細(xì)菌革蘭陽(yáng)性細(xì)菌金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、釀膿鏈球菌、腸球菌、厭氧鏈球菌、結(jié)核分支桿菌革蘭陰性細(xì)菌

淋病奈瑟菌大腸埃希菌、變形桿菌、傷寒及副傷寒沙門(mén)菌、肺炎克雷白菌、產(chǎn)氣腸桿菌、銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌、沙雷菌、厭氧菌其它支原體、衣原體、念珠菌三、尿液的標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（一）尿液標(biāo)本中常見(jiàn)的細(xì)菌革蘭陽(yáng)性細(xì)菌三、尿液的標(biāo)本的細(xì)菌（二）標(biāo)本采集標(biāo)本采集：一般培養(yǎng)采用清潔中段尿。采樣前，用肥皂水或清水清洗外陰，排出尿液前段需丟棄，中段和后段尿液10-20ml盛裝于無(wú)菌的容器。腎盂尿采集法膀胱穿刺尿采集法結(jié)核菌涂片或培養(yǎng)用24小時(shí)尿取沉淀。

（二）標(biāo)本采集標(biāo)本采集：(三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)1.檢驗(yàn)程序：見(jiàn)圖18-4(三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)1.檢驗(yàn)程序：見(jiàn)圖18-42.檢驗(yàn)方法：直接鏡檢

-離心沉淀涂片革蘭染色

-淋球菌鏡檢假絲酵母鏡檢結(jié)核分枝桿菌鏡檢2.檢驗(yàn)方法：直接鏡檢檢測(cè)方法和報(bào)告分離培養(yǎng)

-普通培養(yǎng)：

-淋球菌培養(yǎng)：

-厭氧菌培養(yǎng)：

-真菌培養(yǎng)：檢測(cè)方法和報(bào)告分離培養(yǎng)檢測(cè)方法和報(bào)告菌落計(jì)數(shù)傾注平皿法：尿液稀釋成1：10、1：100、1：1000，取此液1ml放入直徑9cm滅菌平皿內(nèi)，同時(shí)加入已熔化并冷至50℃的培養(yǎng)基與尿混合，待凝固后置35℃培養(yǎng)。定量接種環(huán)涂抹法：使用1ul的定量接種環(huán)沾滿尿液，在分離培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。生長(zhǎng)的菌落數(shù)乘以1000，等于每毫升尿中的菌數(shù)。報(bào)告：革蘭陰性菌>105cfu/ml，

革蘭陽(yáng)性菌>104cfu/ml有臨床意義陰性報(bào)告為“48h培養(yǎng)無(wú)菌生長(zhǎng)”檢測(cè)方法和報(bào)告菌落計(jì)數(shù)四糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（一）糞便中常見(jiàn)病原體正常人的腸道內(nèi)存在大量正常菌群糞便中常見(jiàn)病原體見(jiàn)表18-5四糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（一）糞便中常見(jiàn)病原體（二）標(biāo)本的采集自然排便法：挑取膿血、黏液的糞便2-3g于無(wú)菌的紙盒中，或放置于增菌液中送檢直腸肛拭子法：直接送檢或放入運(yùn)送培養(yǎng)基中送檢（二）標(biāo)本的采集自然排便法：挑取膿血、黏液的糞便2-3g于無(wú)（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)1.檢驗(yàn)程序（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)1.檢驗(yàn)程序2.檢驗(yàn)方法針對(duì)特殊細(xì)菌，如霍亂弧菌、結(jié)核、真菌等

-霍亂弧菌：魚(yú)群樣排列的革蘭陰性菌，動(dòng)力陽(yáng)性

-葡萄球菌：金葡菌引起的假膜性腸炎

-結(jié)核分枝桿菌：

-艱難梭菌：革蘭陽(yáng)性粗大桿菌，無(wú)莢膜、有芽孢

-空腸彎曲桿菌：細(xì)小、弧形、S形或螺旋形革蘭陰性（1）直接鏡檢2.檢驗(yàn)方法針對(duì)特殊細(xì)菌，如霍亂弧菌、結(jié)核、真菌等（1）直接

（2）分離培養(yǎng)

-沙門(mén)菌及志賀菌：增菌培養(yǎng)或直接接種于SS和MAC、CB，37℃18-24h培養(yǎng)，挑取可疑菌落接種KIA/MIU，進(jìn)一步做生化和血清凝集試驗(yàn)

-霍亂弧菌：堿性蛋白胨水37℃增菌6h，挑取菌膜接種TCBS平板，37℃培養(yǎng)16-20h，挑選可疑菌落氧化酶陽(yáng)性，多價(jià)“O”診斷血清凝集試驗(yàn)

-大腸桿菌培養(yǎng)：挑取膿血、黏液的糞便接種于MAC或EMB，37℃培養(yǎng)18-24h，挑取可疑菌落接種KIA/MIU，進(jìn)一步做生化和血清凝集試驗(yàn)

-金黃色葡萄球菌培養(yǎng)：接種于高鹽甘露醇瓊脂，37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)

-副溶血弧菌培養(yǎng)：增菌后接種與弧菌選擇性培養(yǎng)基與SS培養(yǎng)基。

（2）分離培養(yǎng)-沙門(mén)菌及志賀菌：增菌培養(yǎng)或直接接種于S3.結(jié)果報(bào)告（1）涂片鏡檢（2）分離培養(yǎng)檢測(cè)引起腹瀉、食物中毒的腸道菌致病菌檢測(cè)腸道正常菌群，預(yù)防菌群失調(diào)（3）陰性結(jié)果：未檢出**菌3.結(jié)果報(bào)告（1）涂片鏡檢五、（痰）呼吸道標(biāo)本（一）痰液中常見(jiàn)病原體（見(jiàn)表18-6）呼吸道標(biāo)本有正常菌群用于檢測(cè)呼吸系統(tǒng)，鼻咽部的感染。與臨床聯(lián)系，找到病原菌五、（痰）呼吸道標(biāo)本（一）痰液中常見(jiàn)病原體（見(jiàn)表18-6）（二）標(biāo)本采集：咽拭子采集法：自然咯痰法：小兒取痰法：氣管鏡采集法：胃內(nèi)采痰法：氣管穿刺法：（二）標(biāo)本采集：（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)1.檢驗(yàn)程序（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)1.檢驗(yàn)程序2.檢驗(yàn)方法

顯微鏡檢查直接鏡檢：觀察痰液質(zhì)量染色鏡檢：觀察細(xì)菌或分枝桿菌2.檢驗(yàn)方法顯微鏡檢查分離培養(yǎng)培養(yǎng)前處理：均質(zhì)化：凈化：普通培養(yǎng)：接種于BA，10%CO237℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，挑取可疑菌落涂片、染色，進(jìn)一步做生化鑒定。結(jié)核桿菌培養(yǎng)：分離培養(yǎng)培養(yǎng)前處理：分離培養(yǎng)厭氧菌培養(yǎng)：接種兩個(gè)BA，同時(shí)做厭氧與需氧培養(yǎng)真菌培養(yǎng)：接種SA，37℃或22℃培養(yǎng)48小時(shí)白喉棒狀桿菌：接種亞碲酸鹽培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)48小時(shí)，典型菌落做生化、毒力試驗(yàn)百日咳鮑特菌：接種BG培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)2-5天，挑取可疑菌落涂片、血清學(xué)試驗(yàn)分離培養(yǎng)厭氧菌培養(yǎng)：接種兩個(gè)BA，同時(shí)做厭氧與需氧培養(yǎng)六、膿液及創(chuàng)傷分泌物（二）標(biāo)本采集封閉性膿腫：注射器抽取開(kāi)放性膿腫：燒傷創(chuàng)面：（一）膿液中常見(jiàn)病原體見(jiàn)表18-7六、膿液及創(chuàng)傷分泌物（二）標(biāo)本采集（一）膿液中常見(jiàn)病原體見(jiàn)表（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)2.檢驗(yàn)方法（1）涂片鏡檢：革蘭染色鏡檢放線菌挑取硫磺顆粒鏡檢1.檢驗(yàn)程序（見(jiàn)表18-7）（三）細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)2.檢驗(yàn)方法1.檢驗(yàn)程序（見(jiàn)表18-7）（2）分離培養(yǎng)-普通細(xì)菌培養(yǎng)：分別接種于BA或EMB平皿上，置37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，檢視有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。根據(jù)菌落特