普魯卡因半數(shù)致死量(LD50)的測定和計算實驗w1

藥理學(xué)實驗報告學(xué)院班級姓名學(xué)號時間2012?04?11江蘇大學(xué)實驗報告學(xué)院班級姓名學(xué)號實驗五普魯卡因半數(shù)致死量（ld50）的測定和計算實驗一、實驗?zāi)康耐ㄟ^實驗了解測定藥物ld50的方法、步驟和計算過程。二、實驗原理由于實驗動物的抽樣誤差，藥物能使動物致死的劑量大都在50%質(zhì)反應(yīng)的上下，成常態(tài)分布。在急性毒物實驗中50%質(zhì)反應(yīng)即所謂半數(shù)致死量（LD50）。在這樣的質(zhì)反應(yīng)中藥物劑量和質(zhì)反應(yīng)間呈S型曲線，S型曲線的兩端較平，而在50%質(zhì)反應(yīng)處的曲線斜率最大。因此，這里的藥物劑量稍有變動，則動物的死或活的反應(yīng)出現(xiàn)明顯差異，所以測定半數(shù)致死量能比較準確的反映毒性的大小，ld50數(shù)字越小，毒性越大。三、實驗材料實驗動物：小鼠（體重17~25g）；實驗器材：鼠籠，天平，ImL注射器；實驗藥品：2%鹽酸普魯卡因溶液，苦味酸溶液。四、實驗方法和步驟1．探索劑量范圍：取小鼠8~10只，以2只為一組，分成4~5組，選擇劑量間距較大的一系列劑量，分別給各組腹腔注射鹽酸普魯卡因溶液，觀察出現(xiàn)的癥狀并記錄死亡數(shù)，找出引起0%及100%死亡率劑量的所在范圍（致死量約在105~150mg/kg范圍內(nèi)）。本步驟可由實驗室預(yù)先進行。2．正式試驗：在預(yù)試驗所獲得的0%和100%致死量的范圍內(nèi)，選用幾個劑量（一般用5個劑量，按等比級數(shù)增減，相鄰劑量之間比例為1:0.7或1:0.8），各劑量組動物數(shù)為10只，分別用苦味酸標記。動物的體重和性別要分層隨機分配，完成動物分組劑量計算后按組腹腔注射給藥。最好先從中劑量組開始，以便能從最初幾組動物接受藥物后的反應(yīng)來判斷兩端的劑量是否合適，否則可隨時進行調(diào)整，盡可能使動物的死亡率在50%上下，死亡率為0%或100%時，不能用于計算。實驗以全班為一個單位，可以一個組觀察一個劑量組(10只小鼠)，或每組各作每一劑量組的2只小鼠。務(wù)求用藥量準確，注射方法規(guī)范，以減少操作誤差，避免非藥要物所致的死亡，得到較理想的結(jié)果。3．觀察試驗結(jié)果：給藥后即觀察小鼠活動改變情況和死亡數(shù)，存活者一般都在15~20五、分鐘內(nèi)恢復(fù)常態(tài)，故觀察30分鐘內(nèi)的死亡率。五、鼠重g13191416141614161416給藥體積mL1.31.91.41.61.41.61.41.61.41.6注射時間18:5919:0019:0319:0419:0819:0918:5919:0119:0319:09死亡時間19:2221:0319:2819:4119:1919:1919:0319:0419:1219:1330min1/22/22/22/22/2120min1/22/22/22/22/2(2)全班：1)t=30min時：劑量！lgDi死亡概率單位1權(quán)重權(quán)重D|XX2nl率%Y|系數(shù)WWXWX296111.983.9314|7.143.53010.2700613.780847.4860614.858712012.084.3214|64.285.3680.611118.5555417778436.95993150|2.184.7414|92.866.4700.271373.799188.2822118.00811187.5|L_L2.275.17卜-|14LI85.71_L6.0680.4279245.99088—13.599330.97285-1234i2.375.61r14十i10012)t=120min時劑量lgD死亡概率單位權(quán)重權(quán)重D11XX2n率%Y系數(shù)WWXWX296I1.983.931464.285.3680.611118.5555417778436.95993120!12.084.321492.866.4700.271373.799188.2822118.0081115012.184.7414100187.5[2.275375.6114100+^120mg/Kg150mg/Kg187.5mg/Kg234mg/Kg實驗數(shù)據(jù)記錄和整理1.實驗數(shù)據(jù)：(1)本組：96mg/Kg2.方法一：

(1)圖表:t=30min7二14.700X-25.453R"2(1)圖表:t=30min7二14.700X-25.453R"2=0.9795lgD――概率單位Y圖t=120min：lgD――概率單位Y圖⑵ld50的計算：t=30min時：y=14.700x-25.453y=5代入得x1=lgLD50=2.0716???LD50=117.9mg/Kgt=120min時：y=11.020x-16.452y=5代入得x2=lgLD50=1.9466???LD50=88.43mg/Kg(3)LD5095%可信限的計算：1)t=30min時：工W(X-X)2=EWX2-(工WX咲W=100.79959-47?14579%212644=0-343XQ咋工W二47?145%12644二2.13075卜-X〉/(、11/(2.0716—2.13075羅_1/EW(X-X〉十％W_Z25.4532_/0.343+122.12644_=8.55054x10-5S=t'S2=v'8.55054x10-5=0.00925mmx土1.96S=2.0716土0.01813=2.05347?2.089731m分別取反對數(shù)，取LD50的95%可信限：113.1?123.0mg/Kg2)t=120min時：工W(X—X)2=工WX2—(工WX)2/W=54.96804-26.0606%35472=0-02443X=EWX士W=26.°6061i2.35472=2?109362EW(X—X)+%W=116.4522TOC\o"1-5"\h\z(1.9466-2.10936)^/,1=116.4522/0.02443十712.35472=0.0009326S=「S2=J0.0009326=0.03054mmx土1.96S=1.9466土0.03054=1.91606~1.977142m分別取反對數(shù)，取LD50的95%可信限：82.42~94.87mg/Kg3.方法二：t=30min1.2才2工42IgLDBOt=30min1.2才2工42IgLDBOy二14GG.Ex3-10531X2丨2￡9九2017LR飛=1.0000由圖可知：當死亡率為50%時，lgLD50=2.06???LD50=114.8mg/Kg

t=120min二-2333.lx41201310at=120min二-2333.lx41201310a7-鴿2H.4El5x3^213

R"2=1.0000由圖可知：當死亡率為50%時，lgLD50=1.94LD50=87.1mg/Kg六、實驗討論方法一和方法二中t=30min時的LD50均小于t=120min時的LD50，基本符合理論。方法二中t=30min和t=120min時的LD50均落在方法一中LD50的95%可信限區(qū)間內(nèi)。3?兩種方法計算出的LD5不完全相同，可能是由于數(shù)據(jù)的刪減不同所致。4?由于小鼠的數(shù)量太少、小鼠的個體差異性、不同操作人的操作差異、對小鼠死亡的判斷不完全準確等原因，會使結(jié)果出現(xiàn)誤差。七、思考題：ED50或LD50測定原理是什么？答：LD50是通過量效關(guān)系的實驗測得的。Clark證實，劑量對數(shù)值與質(zhì)反應(yīng)之間的量效關(guān)系為對稱的S形曲線，為便于數(shù)學(xué)回歸分析，需要將S形曲線轉(zhuǎn)化為直線°Bliss提出了劑量對數(shù)值與死亡概率單位之間的量效關(guān)系為一直線，即可以劑量的對數(shù)值為橫坐標，死亡概率單位為縱坐標作圖，找出死亡50%的相應(yīng)劑量；也可通過劑量對數(shù)值與死亡概率單位直線回歸求出LD50測定ED50和LD50的意義是什么？答：LD50是評價化學(xué)物質(zhì)急性毒性大小最重要的參數(shù)，也是對不同化學(xué)物質(zhì)進行急性毒性分級的基礎(chǔ)標準?；瘜W(xué)物質(zhì)的急性毒性越大，其LD50的數(shù)值越小。LD50越大越好，就是說濃度要很高很高才會導(dǎo)致半數(shù)死亡；ED50（半最大效應(yīng)濃度）越小越好，意思是很少的劑量就能發(fā)揮作用。LD50常與ED50配合