種子室內(nèi)檢驗(yàn)技術(shù)-品種純度的苯酚染色法測(cè)定

種子生產(chǎn)與經(jīng)營(yíng)專(zhuān)業(yè)品種純度的苯酚染色法測(cè)定2016.5.3一、苯酚染色法的機(jī)理苯酶染色法已作為ISTA和我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。苯酚染色法的機(jī)理有兩種觀點(diǎn)，一種認(rèn)為是酶促反應(yīng)，另一種認(rèn)為是化學(xué)反應(yīng)。該反應(yīng)可受Fe++、Cu++等雙價(jià)離子催化，加速反應(yīng)進(jìn)行。Na+離子（NaOH、Na2CO3）對(duì)該反應(yīng)有抑制作用。其反應(yīng)可用下式表示：OH[O]Cu++Fe++OO二、麥類(lèi)苯酚染色1、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)法①隨機(jī)選取適量?jī)舴N子，放于容器中（燒杯、試管、培養(yǎng)皿），加水在室溫下浸泡18～24小時(shí)。注意：水最好用蒸餾水或優(yōu)質(zhì)自來(lái)水；高溫條件下注意換水或在冰箱里浸泡，以防種子發(fā)霉變質(zhì)。二、麥類(lèi)苯酚染色②數(shù)取浸泡好的種子400粒，每重復(fù)100粒。（這里要將損傷粒、蟲(chóng)蛀粒、不完整粒剔除掉）。③用濾紙吸干表面水分，均勻擺放在墊有1%苯酚溶液濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)（腹溝朝下）。室溫下小麥保持4小時(shí)，燕麥2小時(shí)，大麥24小時(shí)后即可鑒定染色深淺。二、麥類(lèi)苯酚染色④小麥觀察穎果顏色，大麥、燕麥觀察內(nèi)外稃的顏色，一般染后的顏色可分為不染色、淡褐色、褐色、深褐色、黑色五種，將與基本顏色不同的種子取出作為異品種。二、麥類(lèi)苯酚染色2、快速法將小麥種子用1.0%的苯酚浸15分鐘，取出放在鋪有1%苯酚濕潤(rùn)過(guò)的濾紙的培養(yǎng)皿中（腹溝朝下），并蓋上貼有同樣濾紙的培養(yǎng)皿蓋。置30～40℃溫箱內(nèi)，染色0.5～1小時(shí)，觀察染色結(jié)果，區(qū)分本品種與異品種。三、水稻苯酚染色法將種子浸水6小時(shí)，取出放入1%苯酚溶液中，室溫下12小時(shí)，然后取出用清水洗滌，放在濕潤(rùn)的濾紙上24小時(shí)，觀察谷?；蛎琢Ｈ旧潭?。谷粒染色分為不染色、淡茶褐色、茶褐色、黑褐色和黑色五級(jí)，米粒染色分為不染色、淡茶褐色、褐色三級(jí)。四、苯酚染色注意事項(xiàng)1、受損傷籽粒不宜作為染色鑒定的樣品，因?yàn)閾p傷處不染色，影響鑒定結(jié)果。2、有些品種需要延長(zhǎng)染色時(shí)間，因?yàn)橛械钠贩N染色結(jié)束后，顏色的分組任然很難進(jìn)行，有中間漸變類(lèi)型，這時(shí)關(guān)鍵要看有無(wú)顏色斷層。無(wú)斷層的可延長(zhǎng)染色時(shí)間，增加觀察次數(shù)，延時(shí)染色結(jié)果結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)時(shí)間染色結(jié)果。四、苯酚染色注意事項(xiàng)3、有些品種利用標(biāo)準(zhǔn)法染色后，顏色相同無(wú)法區(qū)別?？刹捎眉铀倩蜓泳弰┨幚砗笤偃旧b定。對(duì)染色很深的種子，用0.3%碳酸鈉溶液浸種18小時(shí)（室溫）；對(duì)染色很淺的種子利用0.01%硫酸銅溶液浸種18小時(shí)，然后置培養(yǎng)皿內(nèi)染色。4、配好的苯酚溶液裝入棕色溶液瓶，在冰箱中保存，放置時(shí)間不超過(guò)3個(gè)月。經(jīng)包衣或殺蟲(chóng)劑、殺菌劑處理的種子，視情況延長(zhǎng)染色時(shí)間。四、苯酚染色注意事項(xiàng)5、苯酚染色是利用蒸氣進(jìn)行的染色反應(yīng)，并非溶液反應(yīng)，所以染色時(shí)要求相同大小的培養(yǎng)皿，藥液加入量要一致，以保證各個(gè)重復(fù)間苯酚蒸氣濃度相同。6、苯蒸氣有毒，實(shí)驗(yàn)室要保持通風(fēng)良好，實(shí)驗(yàn)人員最好有一定的防護(hù)措施。種子生產(chǎn)與經(jīng)營(yíng)專(zhuān)業(yè)水稻種子純度苯酚染色法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解苯酚測(cè)定種子純度的原理和步驟；2、掌握苯酚測(cè)定水稻種子純度的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理

水稻皮殼內(nèi)含有的多酚氧化酶和金屬元素，多酚氧化酶在金屬元素催化作用下，將苯酚氧化成黑褐色的對(duì)苯醌。不同品種多酚氧化酶和金屬元素含量有差異，在同一苯酚染色條件表現(xiàn)不同顏色，由此鑒定品種純度。三、主要儀器設(shè)備冰箱電子天平四、用品用具容量瓶、棕色瓶、燒杯、玻璃棒、滴瓶、滴管、培養(yǎng)皿、鑷子、濾紙、白瓷盤(pán)、放大鏡

五、試劑配制1%苯酚溶液六、實(shí)驗(yàn)步驟1、數(shù)取試樣數(shù)取凈種子400粒，每重復(fù)100粒；2、種子預(yù)濕將種子浸入清水中經(jīng)6h，倒去清水；3、苯酚染色注入1%(m/V)苯酚溶液，蓋上培養(yǎng)皿蓋，室溫下浸12h取出用清水洗滌，放在濾紙上24h。六、實(shí)驗(yàn)步驟4、觀察鑒定觀察谷粒或米粒染色程度。

谷粒染色分為不染色、淡茶褐色、茶褐色、黑褐色和黑色五級(jí)；米粒染色分不染色、淡茶褐色、淡茶褐色、褐色或紫色三級(jí)。

將與基本顏色不同的種子取出作為異品種。七、結(jié)果鑒定染色反應(yīng)種子生產(chǎn)與經(jīng)營(yíng)專(zhuān)業(yè)小麥種子純度苯酚染色法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解苯酚測(cè)定種子純度的原理和步驟；2、掌握苯酚測(cè)定小麥種子純度的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理小麥種皮內(nèi)含有的多酚氧化酶和金屬元素，多酚氧化酶在金屬元素催化作用下，將苯酚氧化成黑褐色的對(duì)苯醌。不同品種多酚氧化酶和金屬元素含量有差異，在同一苯酚染色條件表現(xiàn)不同顏色，由此鑒定品種純度。OH[O]Cu++Fe++OO三、主要儀器設(shè)備冰箱電子天平四、用品用具容量瓶、棕色瓶、燒杯、玻璃棒、滴瓶、滴管、培養(yǎng)皿、鑷子、濾紙、白瓷盤(pán)、放大鏡

五、試劑配制1%苯酚溶液六、實(shí)驗(yàn)步驟

1、數(shù)取試樣數(shù)取凈種子400粒，每重復(fù)100粒；2、種子預(yù)濕將種子浸入清水中經(jīng)18～24h，用濾紙吸干表面水分；3、苯酚染色放入墊有已經(jīng)過(guò)1%苯酚溶液溫潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)（腹溝朝下），蓋上培養(yǎng)皿蓋。

在室溫下，小麥保持4h后即可鑒定染色深淺