生藥鑒定的一般程序和方法

生藥鑒定的一般程序和方法生藥鑒定就是依據(jù)國(guó)家藥典，部頒和地方藥品標(biāo)準(zhǔn)以及有關(guān)資料規(guī)定或記載的生藥標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)商品生藥或檢品進(jìn)行真實(shí)性、純度、品質(zhì)優(yōu)良度的檢定。生藥真實(shí)性鑒定，包括原植（動(dòng)）物鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定及生物檢定等項(xiàng)。生藥純度檢定是檢查樣品中有無(wú)雜質(zhì)及其數(shù)量是否超過規(guī)定的限度。雜質(zhì)包括生藥原植（動(dòng)）物的非藥用部分、有機(jī)雜質(zhì)和無(wú)機(jī)雜質(zhì)。無(wú)機(jī)雜質(zhì)的檢查一般采用過篩及灰分、酸不溶性灰分定量等方法來測(cè)定。生藥品質(zhì)優(yōu)良度檢定是包括水分、浸出物、有效成分含量的測(cè)定，以確定檢品的質(zhì)量是否合乎規(guī)定的要求。中國(guó)藥典附錄部分收載的藥材取樣法，藥材檢定通則，藥材及成方制劑顯微鑒別法，藥材炮制通則，雜質(zhì)檢查法，水分測(cè)定法，灰分測(cè)定法，浸出物測(cè)定法，揮發(fā)油測(cè)定法，色譜法（層析法）等，都是生藥鑒定方法的依據(jù)，現(xiàn)將部分常規(guī)操作方法介紹如下：一、生藥的取樣生藥的取樣是指選取供檢定用生藥樣品的方法。取樣的代表性直接影響到檢定結(jié)果的正確性。因此，必須重視取樣的各個(gè)環(huán)節(jié)。1.取樣前，應(yīng)注意品名、產(chǎn)地、規(guī)格等級(jí)及包件式樣是否一致，檢查包裝的完整性、清潔程度以及有無(wú)水跡、霉變或其他物質(zhì)污染等，詳細(xì)記錄。凡有異常情況的包件，應(yīng)單獨(dú)檢驗(yàn)。從同批生藥包件中抽取檢定用樣品原則如下：生藥總包件數(shù)在100件以下的，取樣5件；100?1000件按5%取樣：超過1000件的，超過部分按1%取樣；不足5件的逐件取樣；對(duì)于貴重生藥，不論包件多少均逐件取樣。對(duì)破碎的、粉末狀的或大小在1cm以下的生藥，可用采樣器（探子）抽取樣品，每一包件至少在不同部位抽取2?3份樣品，包件少的抽取總量應(yīng)不少于實(shí)驗(yàn)用量的3倍；包件多的，每一包件取樣量一般規(guī)定：一般生藥100?500g；粉末狀生藥25g；貴重生藥5?10g；個(gè)體大的生藥，根據(jù)實(shí)際情況抽取代表性的樣品。如個(gè)體較大時(shí)，可在包件不同部位（包件大的應(yīng)從10cm以下的深處）分別抽取。將所取樣品混和拌勻，即為總樣品。對(duì)個(gè)體較小的生藥，應(yīng)攤成正方形，依對(duì)角線劃"X”字，使分為四等分，取用對(duì)角兩份；再如上操作，反復(fù)數(shù)次至最后剩余的量足夠完成必要的試驗(yàn)以及留樣數(shù)為止，此為平均樣品。個(gè)體大的生藥，可用其他適當(dāng)方法取平均樣品。平均樣品的量一般不得少于作真實(shí)性、純度和品質(zhì)優(yōu)良等實(shí)驗(yàn)所需用量的3倍數(shù)，即1/3供實(shí)驗(yàn)室分析用，另1/3供復(fù)核用，其余1/3則為留樣保存，保存期至少一年。二、雜質(zhì)檢查生藥中混雜的雜質(zhì)，系指來源與規(guī)定相同，但其性狀或部位與規(guī)定不符；來源與規(guī)定不同的物質(zhì)；無(wú)機(jī)雜質(zhì)如砂石、泥塊、塵土等。檢查方法可取規(guī)定量的樣品，攤開，用肉眼或擴(kuò)大鏡（5?10倍）觀察，將雜質(zhì)揀出，如其中有可以篩分的雜質(zhì)，則通過適當(dāng)?shù)暮Y，將雜質(zhì)分出。然后將各類雜質(zhì)分別稱重，計(jì)算其在樣品中的百分?jǐn)?shù)。如生藥中混存的雜質(zhì)與正品相似，難以從外觀鑒別時(shí)，可進(jìn)行顯微、理化鑒別試驗(yàn)，證明其為雜志后，計(jì)入雜質(zhì)重量中。對(duì)個(gè)體大的生藥，必要時(shí)可破開，檢查有無(wú)蟲蛀、霉?fàn)€或變質(zhì)情況，雜質(zhì)檢查所用的樣品量，一般按生藥取樣法稱取。三、水分測(cè)定水分的測(cè)定，是為了保證生物不因所含水分超過限度而發(fā)霉變質(zhì)。水分測(cè)定的方法常用的有烘干法和甲苯法。供測(cè)定用的生藥樣品，一般先破碎成直徑不超過3mm的顆粒或碎片，直徑和長(zhǎng)度在3mm以下的花類、種子類、果實(shí)類藥材，可不破碎。烘干法適用于不含或少含揮發(fā)性成分的生藥。取樣品2?5g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，疏松樣品不超過10mm，精密稱定，打開瓶蓋在100?105°C干燥5小時(shí)，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定重量，再在上述溫度干燥1小時(shí)，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。甲苯法適用于含揮發(fā)性成分的生藥，用化學(xué)純甲苯直接測(cè)定，必要時(shí)甲苯可先加少量蒸餾水，充分振搖后放置，將水層分離棄去，經(jīng)蒸餾后使用。儀器裝置如圖4-1。A為500ml的短頸圓底燒瓶；B為水分測(cè)定管；C為直形冷凝管，外管長(zhǎng)40cm。使用前，全部?jī)x器應(yīng)清潔，并置烘箱中烘干。測(cè)定時(shí)取樣品適量（約相當(dāng)于含水量1?4ml），精密稱定，置A瓶中，加甲苯約200ml，必要時(shí)加入玻璃珠數(shù)粒。將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿B管的狹細(xì)部分，將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱，待甲苯開始沸騰時(shí)，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測(cè)定管刻度部分的水量不再增加時(shí)，將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗，再用飽蘸甲苯的長(zhǎng)刷或其他適宜方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水粘附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離（可加亞甲藍(lán)粉末少許，使水染成藍(lán)色，以便分離觀察）。檢讀水量，改算成供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。減壓干燥法適用于含有揮發(fā)性成分的貴重藥品。減壓干燥器的裝置：取直徑12cm左右的培養(yǎng)皿，加入新鮮五氧化二磷干燥劑適量，使鋪成0.5?1cm的厚度，放入直徑30cm的減壓干燥器中。測(cè)定時(shí)取供試品2?4g，混合均勻。分取約0.5?1g，置已在供試品同樣條件下干燥并稱重的稱瓶中，精密稱定，打開瓶蓋，放入上述減壓干燥器中，減壓至2.67kPa（20mmHg）以下持續(xù)半小時(shí)，室溫放置24小時(shí)。在減壓干燥器出口連接新鮮無(wú)水氯化鈣干燥管，打開活塞，待內(nèi)外壓一致，關(guān)閉活塞，打開干燥器，蓋上瓶蓋，取出稱瓶迅速精密稱定重量，計(jì)算供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。也可應(yīng)用紅外線干燥法和導(dǎo)電法測(cè)定水分含量，迅速而簡(jiǎn)便。四、灰分測(cè)定生藥中灰分的來源，包括生藥本身經(jīng)過灰化后遺留的不揮發(fā)性無(wú)機(jī)鹽，以及生藥表面附著的不揮發(fā)性無(wú)機(jī)鹽類，即總灰分。同一種生藥，在無(wú)外來?yè)诫s物時(shí)，一般都有一定的總灰分含量范圍。規(guī)定生藥的總灰分限度，對(duì)于保證生藥的品質(zhì)和純凈程度，有一定的意義。如果總灰分超過一定限度，表明摻有泥土、砂石等無(wú)機(jī)物質(zhì)。有些生藥本身含有的無(wú)機(jī)物差異較大，尤其是含多量草酸鈣結(jié)晶的生藥，測(cè)定總灰分有時(shí)不足以說明外來無(wú)機(jī)物的存在，還需要測(cè)定酸不溶性灰分，即不溶于10%鹽酸中的灰分。因生藥所含的無(wú)機(jī)鹽類（包括鈣鹽）大多可溶于稀鹽酸中而除去，而來自泥沙等的硅酸鹽類則不溶解而殘留，故測(cè)定酸不溶性灰分能較準(zhǔn)確地表明生藥中是否有泥沙等摻雜及其含量?？偦曳譁y(cè)定法供測(cè)定樣品須粉碎，使能通過二號(hào)篩，混合均勻后，稱取樣品2?3g（如需測(cè)定酸不溶性灰分，可取3?5g），置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量（準(zhǔn)確至0.01g），緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全碳化時(shí)，逐漸升高溫度至500?600°C，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算供試品中含總灰分的百分?jǐn)?shù)。如樣品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱蒸餾水或10%硝酸銨溶液2ml，使殘?jiān)鼭駶?rùn)，然后置水浴上蒸干，殘?jiān)涨胺ㄗ茻耄鳞釄鍍?nèi)容物完全灰化。酸不溶性灰分測(cè)定法取上項(xiàng)所得的灰分，在坩堝中加入稀鹽酸10ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10分鐘，表面皿用熱蒸餾水5ml沖洗，洗液并入坩堝中，用無(wú)灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘?jiān)谜麴s水洗于濾紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止，濾渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中含酸不溶性灰分的百分?jǐn)?shù)。五、浸出物的測(cè)定對(duì)于有效成分尚不明確或尚無(wú)精確定量方法的生藥，一般可根據(jù)已知成分的溶解性質(zhì)，選用水或其它適當(dāng)溶劑為溶媒，測(cè)定一藥中可溶性物質(zhì)的含量，以示生藥的品質(zhì)。通常選用水，一定濃度的乙醇（或甲醇）、乙醚作浸出物測(cè)定。供測(cè)定的生藥樣品須粉碎，使能通過二號(hào)篩，并混合均勻。1.水溶性浸出物測(cè)定（1）冷浸法：取樣品約4g，稱定重量（準(zhǔn)確至0.01g），置250?300ml的錐形瓶中，精密加入水100ml，塞緊，冷浸，前6小時(shí)內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18小時(shí)，用干燥濾器迅速濾過，精密量取濾液20ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105^干燥3小時(shí)，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，以干燥品計(jì)算供試品中含水溶性浸出物的百分?jǐn)?shù)。（2）熱浸法：取樣品約2?4g，稱定重量（準(zhǔn)確至0.01g），置250?300ml的錐形瓶中，精密加入水50?100ml，塞緊，稱定重量，靜止1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，塞緊，稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過。精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105r干燥3小時(shí)，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，以干燥品計(jì)算供試品中含水溶性浸出物的百分?jǐn)?shù)。2,醇溶性浸出物測(cè)定取適當(dāng)濃度的乙醇或甲醇代替水為溶媒。照水溶性浸出物測(cè)定法進(jìn)行（熱浸法須在水浴上加熱）。醚溶性浸出物測(cè)定取樣品2?4g，稱定重量（準(zhǔn)確至0.01g），置于已恒重?zé)康闹居统槌銎髦?，用乙醚作溶劑，水浴加??6小時(shí)，放冷，以少量乙醚沖洗回流器，洗液接入蒸餾瓶中，低溫蒸去乙醚，于105°C干燥3小時(shí)，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速稱定重量，以干燥品計(jì)算供試品中含醚溶性浸出物的百分?jǐn)?shù)。六、揮發(fā)油測(cè)定適用于含較多量揮發(fā)油的生藥。測(cè)定用的樣品，一般須粉碎使能通過二號(hào)至三號(hào)篩，并混合均勻，儀器裝置如圖4-2。（注：裝置中揮發(fā)油測(cè)定的支管分岔處應(yīng)與基準(zhǔn)線平行）測(cè)定法甲法：適用于測(cè)定相對(duì)密度在1.0以下的揮發(fā)油。取樣品適量（約相當(dāng)于含揮發(fā)油0.5?1.0ml），穩(wěn)定重量（準(zhǔn)確至0.01g），置1000ml的燒瓶中，加水300?500ml（或適量）與玻璃珠數(shù)粒，振搖混合后，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器（有0.1ml的刻度）的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸，并保持微沸約5小時(shí)，至測(cè)定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟測(cè)定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm處為止。放置1小時(shí)以上，再開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量并計(jì)算供試品中含揮發(fā)油的百分?jǐn)?shù)。乙法：適用于測(cè)定