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文檔簡介

熒光分光光度法測定熒光素的含量一、 實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)熒光分光光度法測定熒光素的分析原理。掌握熒光分光光度計的操作技術(shù)和測定熒光素的方法。二、 實驗原理熒光分析法，是以溶液中物質(zhì)分子對光的選擇性吸收為基礎(chǔ)而建立起來的一類分析方法。常溫下，處于基態(tài)的分子吸收一定的紫外可見光的輻射能成為激發(fā)態(tài)分子，激發(fā)態(tài)分子通過無輻射躍遷至第一激發(fā)態(tài)的最低振動能級，再以輻射躍遷的形式回到基態(tài)，發(fā)出比吸收光波長長的光而產(chǎn)生熒光。在稀溶液中，熒光強度if與物質(zhì)的濃度c有以下的關(guān)系：If=2.30并/。功c當實驗條件一定時，熒光強度與熒光物質(zhì)的濃度成線性關(guān)系：If=Kc這是熒光光譜法定量分析的理論依據(jù)。三、 儀器及試劑.儀器RF-5301PC熒光分光光度計；.試劑熒光素（分析純）；四、 操作步驟標準溶液配制準確稱取0.0125g熒光素標樣，配制成500ml溶液，則此溶液濃度為0.025g/L.移取此溶液10.0ml,于50ml容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度。分別移取此溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,于50ml容量瓶中，并用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻后，待測定各標準溶液的熒光強度。光譜的繪制(1)熒光光度計操作打開主機電源開關(guān)，預(yù)熱大約30分鐘。開啟氙燈。(2)熒光素激發(fā)光譜的繪制，參數(shù)設(shè)置如下：設(shè)定縱坐標設(shè)定靈敏度；設(shè)定掃描速度；發(fā)射波長EMISSIONWavelength；激發(fā)波長范圍；將某一濃度的熒光素標液置于試樣池中；掃描得到激發(fā)光譜。(3)標準溶液及樣品的測定，參數(shù)設(shè)置如下：設(shè)定縱坐標設(shè)定靈敏度；設(shè)定掃描速度；設(shè)定激發(fā)波長EXCITIONWavelength(從激發(fā)光譜曲線中)得到；發(fā)射波長范圍EMISSIONWavelength；將1號標準溶液放入試樣池中；掃描得到熒光光譜。儀器開始掃描，得到1號標準溶液的熒光強度。其余4各標準溶液和樣品液只要重復(fù)上述⑥⑦操作，就可以分別得到它們的熒光光譜。按各標液的熒光強度做出i-c工作曲線。五、數(shù)據(jù)記錄及計算1.列表樣品編樣品濃度(g/L)熒光強度(IF)123456樣品2.工作曲線的繪制二氯熒光素標準曲線度強光熒二氯熒光素標準曲線度強光熒ParameterValueError—A24.732.

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