藥品無菌檢查

藥品無菌檢查及相關(guān)知識(shí)吉林省藥品檢驗(yàn)所微生物室主要內(nèi)容1、藥品無菌檢查法根底2、2021年版藥典無菌檢查法的變動(dòng)3、潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物的監(jiān)測(cè)和控制4、菌種的管理5、二級(jí)生物平安實(shí)驗(yàn)室藥品無菌檢查法定義及特點(diǎn)培養(yǎng)基、沖洗液方法學(xué)驗(yàn)證供試品的無菌檢查無菌檢查的要點(diǎn)藥品無菌檢查法無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其他品種是否無菌的一種方法。假設(shè)供試品符合無菌檢查法的規(guī)定,僅說明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。也并不表示所有的產(chǎn)品都是無菌的。反之，當(dāng)供試品中檢出微生物污染，那么可以認(rèn)為批產(chǎn)品的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)相當(dāng)高。藥品無菌檢查法無菌制劑比非無菌制劑存在更高的風(fēng)險(xiǎn)一系列的藥品不良事件2006年的“欣弗事件〞---安徽華源生產(chǎn)的“克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液〞引起了11人死亡，93人感染，企業(yè)倒閉，總經(jīng)理自殺。未按批準(zhǔn)的工藝參數(shù)滅菌，降低滅菌溫度、縮短滅菌時(shí)間，增加滅菌柜裝載量，影響了滅菌效果，經(jīng)中檢所檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)無菌不合格。2021年10月，美國新英格蘭合成制藥中心生產(chǎn)的注射用類固醇霉菌污染，造成數(shù)百人感染真菌腦炎，至年底統(tǒng)計(jì)死亡39人。這些事故促使無菌制劑GMP監(jiān)管的進(jìn)步，同時(shí)也對(duì)無菌檢驗(yàn)提出更高更嚴(yán)的要求。藥品無菌檢查法特點(diǎn)無菌檢驗(yàn)結(jié)論為一次性，藥典規(guī)定為不得復(fù)試，為什么不得復(fù)試，菌落的分布具有不均勻性，檢驗(yàn)過程是破壞性的，不具有重復(fù)性。---------------對(duì)操作過程的要求非常高。過程的控制----------1、環(huán)境控制；2、操作影響，人員、物流是否引入外源性污染？無菌性檢查靈敏度檢查SOP操作有效的結(jié)果有效的方法環(huán)境保證培養(yǎng)基保證方法學(xué)驗(yàn)證過程控制結(jié)果判斷可靠的結(jié)論藥品無菌檢查法培養(yǎng)基配制后采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。什么是驗(yàn)證合格的？保存條件：2-25℃、避光，非密閉容器在3周內(nèi)使用，密閉容器一般在1年內(nèi)使用。流乙醇酸鹽流體：供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層不超過深度的1/5，否那么100℃水浴加熱至粉紅色消失〔不超過20分鐘〕，只能加熱一次，培養(yǎng)結(jié)束后氧化層不超過1/2藥品無菌檢查法藥品無菌檢查法培養(yǎng)基適用性檢查無菌性—每批次培養(yǎng)基取不少于5瓶〔支〕，培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。靈敏度6種菌〔<100cfu〕金、銅綠、生孢---------流乙醇酸鹽流體7支，12ml/支，每種菌接種2支，陰性一支，枯草、白念、黑曲----------胰酪大豆胨液體7支，每種菌接種2支，9ml/支，一支陰性流乙醇酸鹽流體培養(yǎng)3天，胰酪大豆胨液體5天，空白對(duì)照管應(yīng)無菌生長，假設(shè)加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判斷該培養(yǎng)基的靈敏度符合規(guī)定藥品無菌檢查法沖洗液0.1%蛋白胨水溶液pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液可選用其他經(jīng)驗(yàn)證過的適宜的溶液藥品無菌檢查法方法適用性試驗(yàn)證明所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。假設(shè)檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。菌種：金葡、大腸、枯草、生孢、白念、黑曲方法：1、薄膜過濾2、直接接種藥品無菌檢查法薄膜過濾法試驗(yàn)組：取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量按薄膜過濾法過濾，沖洗，在最后一次沖洗液中參加小于100cfu的試驗(yàn)菌，過濾。將培養(yǎng)基加至濾筒內(nèi)。對(duì)照組：另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，參加等量試驗(yàn)菌，培養(yǎng)時(shí)間不得超過5天。藥品無菌檢查法直接接種法取流乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基〔不少于15ml〕6管，分別參加金葡、大腸、生孢各2管，其中一管接入供試品，另一管作為對(duì)照，TSB〔不少于10ml〕6管，分別參加枯草、白念、黑曲各2管，其中一管參加供試品，另一管作為對(duì)照，培養(yǎng)時(shí)間不得超過5天。結(jié)果判斷：與對(duì)照管比較，試驗(yàn)組的試驗(yàn)菌生長良好，那么說明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無抑菌作用或抑菌作用可以忽略不計(jì)；如含供試品的任一容器中的試驗(yàn)菌生長微弱、緩慢或不生長----供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用-----增加沖洗量、培養(yǎng)基用量、中和劑或滅活劑、更換濾膜品種，重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。藥品無菌檢查法供試品的無菌檢查檢驗(yàn)數(shù)量：一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量

出廠產(chǎn)品按表1，上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗(yàn)按表2

最少檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽性對(duì)照用的。

檢驗(yàn)量：按表3，采用薄膜過濾法時(shí)，只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。

藥品無菌檢查法1、薄膜過濾法封閉式薄膜過濾器只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過濾抗生素樣品選用低吸附的濾膜水溶性供試品過濾前先將少量沖洗液過濾以潤濕濾膜油類供試品的濾膜和濾器在使用前應(yīng)充分枯燥沖洗量一次一般為100ml，總沖洗量不得超過1000ml，以免膜上的微生物受損?？倹_洗量特別大時(shí)應(yīng)盡量減小流速。藥品無菌檢查法水溶性的液體-----直接過濾或混合至含不少于100ml適宜稀釋液的無菌容器中，混勻，立即過濾，如供試品有抑菌作用，須沖洗一般不少于三次。水溶性的固體----溶取規(guī)定量，加適宜的稀釋液溶解或按標(biāo)簽復(fù)溶。非水溶性供試品-----直接過濾，或乳化后〔加吐溫80等〕立即過濾，用含0.1-1%吐溫80的沖洗液沖洗，培養(yǎng)基中可參加吐溫80可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油性供試品-----溶解于適量無菌十四烷酸異丙酯中，過濾，加熱仍然沒法過濾的，萃取，靜置，取水層過濾無菌氣霧劑----在-20℃冷凍1小時(shí)，取出在容器上鉆一小孔釋放拋射劑后再無菌開啟容器，轉(zhuǎn)移至無菌容器中。裝有藥物的注射器供試品——注意應(yīng)采用適宜的方法進(jìn)行包裝中所配帶的無菌針頭的無菌檢查帶有導(dǎo)管的醫(yī)療器具〔輸血、輸液袋等〕---每個(gè)最小包裝用50-100ml沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，過濾沖洗液。同時(shí)注意應(yīng)采用直接接種法對(duì)配帶的無菌針頭做無菌檢查藥品無菌檢查法2、直接接種法培養(yǎng)基的用量符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%，同時(shí)，流乙醇酸鹽每管裝量不少于15ml，TSB不少于10ml適用于無法用薄膜過濾法進(jìn)行無菌檢查的。藥品無菌檢查法混懸液等非澄清水溶液供試品取規(guī)定量，等量接種至各管培養(yǎng)基中固體供試品取規(guī)定量，直接等量接種至各管培養(yǎng)基中，或參加適宜的溶劑溶解，或按標(biāo)簽說明復(fù)溶后，取規(guī)定量等量接種至各管培養(yǎng)基中。非水溶性供試品參加適量的乳化劑及稀釋劑使其乳化再接種，或直接接種至含乳化劑的培養(yǎng)基中敷料供試品以無菌操作拆開每個(gè)包裝，于不同部位剪取約100mg或1cm*3cm的供試品，等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。腸線、縫合線等供試品取最小包裝，無菌拆開包裝，等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。滅菌醫(yī)用器具供試品必要時(shí)將其拆散或切成小碎段，等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。放射性藥品取供試品1支，等量接種于裝量為7.5ml的流乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和TSB中。每管接種量為0.2ml。藥品無菌檢查法陽性對(duì)照

無抑菌作用及抗革蘭氏陽性菌為主的----金葡抗革蘭氏陰性菌為主的------大腸抗厭氧菌的------生孢梭抗真菌的-----白念陽性對(duì)照72小時(shí)內(nèi)生長良好陰性對(duì)照

相應(yīng)的溶劑、稀釋液、沖洗液同法操作，不得有菌生長藥品無菌檢查法培養(yǎng)及觀察液體培養(yǎng)基渾濁物理變化？化學(xué)變化？生物學(xué)變化？培養(yǎng)14天，逐日觀察并記錄，注意和陽性、陰性比照，培養(yǎng)14天后依然無法從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天，觀察是否再次出現(xiàn)渾濁。藥品無菌檢查法假設(shè)明顯渾濁------怎么辦？1〕立即轉(zhuǎn)接2ml該培養(yǎng)物至相同的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)；2〕取5支凍存管，每管分裝1ml渾濁培養(yǎng)物，-80℃保存；3〕取渾濁培養(yǎng)物在TSA平板/血瓊脂上劃線，別離污染微生物；4〕如果發(fā)現(xiàn)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)管變渾濁，還應(yīng)增加血平板劃線，并在厭氧條件下培養(yǎng)別離厭氧菌。由平板別離到的菌落應(yīng)進(jìn)一步鑒定，并逐一保藏。藥品無菌檢查法結(jié)果判斷陽性對(duì)照生長良好，陰性不得有菌，否那么試驗(yàn)無效假設(shè)供試品澄清，或雖然渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定假設(shè)任何一管渾濁并確證有菌生長，判不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效，符合下面至少一個(gè)條件：1、無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求2、回憶試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素3、供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和〔或〕無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。假設(shè)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。藥品無菌檢查法要點(diǎn)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的SOP，物料進(jìn)場，外圍消毒劑消毒外表，撤除外包裝，潔凈傳遞，風(fēng)淋、紫外照射，過氧化氫滅菌等，由低級(jí)別向高級(jí)別遞進(jìn)，最后到達(dá)A級(jí)核心區(qū)人員進(jìn)場，合理的更衣程序，A/B級(jí)：應(yīng)用頭罩將所有頭發(fā)以及胡須等相關(guān)部位全部遮蓋，，必要時(shí)戴防護(hù)目鏡。應(yīng)戴經(jīng)滅菌且無顆粒物〔如滑石粉〕散發(fā)的橡膠或塑料手套，穿經(jīng)滅菌或消毒的腳套，褲腿應(yīng)塞進(jìn)腳套內(nèi)，袖口應(yīng)塞進(jìn)手套內(nèi)。工作服應(yīng)為滅菌的連體工作服，不脫落纖維或微粒，并能滯留身體散發(fā)的微粒。無菌操作技術(shù)，動(dòng)作熟練，關(guān)鍵點(diǎn)的控制實(shí)驗(yàn)過程的監(jiān)控：環(huán)境菌，外表微生物，手部微生物，對(duì)環(huán)境菌進(jìn)行鑒定，建立檔案，以便OOS調(diào)查，進(jìn)行溯源。2021年版藥典的變化主要修訂點(diǎn)改進(jìn)馬丁培養(yǎng)基修訂為胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基〔TSB〕無菌檢查實(shí)驗(yàn)條件由“萬級(jí)下的局部百級(jí)〞修訂為“B+A〞三部藥典的統(tǒng)一2021年版藥典的變化藥典2010年版2015年版名稱改良馬丁培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基

配方蛋白胨-----5.0g胰酪胨------17.0g酵母浸出液-----2.0g大豆木瓜蛋白酶水解物-----3.0g葡萄糖------20.0g氯化鈉------5.0g磷酸氫二鉀-----1.0g磷酸氫二鉀--------2.5g硫酸鎂-----0.5g葡萄糖-------2.5g目的培養(yǎng)真菌需氧菌、真菌、專性和兼性厭氧菌培養(yǎng)條件23-28℃20-25℃培養(yǎng)基的變化2021年版藥典的變化意義1、與國際接軌USP\BP2、培養(yǎng)-觀察的體系改變，取消嚴(yán)格意義上的以真菌、細(xì)菌劃分的培養(yǎng)，而以需氧、厭氧的培養(yǎng)體系來劃分，是一個(gè)更加廣泛，更加互補(bǔ)的體系。2021年版藥典的變化培養(yǎng)基的改變導(dǎo)致陽性菌的培養(yǎng)條件改變培養(yǎng)基靈敏度實(shí)驗(yàn)：2021年版藥典的變化方法適用性實(shí)驗(yàn)：2021年版藥典的變化菌種的培養(yǎng)條件改變2021年版藥典的變化無菌檢查實(shí)驗(yàn)條件由“萬級(jí)下的局部百級(jí)〞修訂為“B+A〞和以前的100級(jí)、10000級(jí)的區(qū)別？需要怎么控制環(huán)境？潔凈實(shí)驗(yàn)室潔凈室的定義及分級(jí)兩版藥典對(duì)潔凈室的要求比照潔凈室微生物的監(jiān)測(cè)與控制微生物鑒定隔離器簡介消毒劑的選擇與使用幾種空間滅菌方法潔凈實(shí)驗(yàn)室潔凈室的定義與分級(jí)藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室是指用于藥品無菌或微生物檢驗(yàn)用的潔凈實(shí)驗(yàn)室、隔離系統(tǒng)及其它受控環(huán)境。潔凈室不是絕對(duì)無菌的。概念不等于無菌室〔命名需準(zhǔn)確〕潔凈實(shí)驗(yàn)室潔凈室的分級(jí)ISO14644---按懸浮粒子大小劃分了潔凈室的級(jí)別〔等級(jí)1-9級(jí)〕ISO14698---潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境潔凈實(shí)驗(yàn)室各國不同法規(guī)對(duì)于潔凈室污染控制的要求比照美國聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)FED-STD-209E：率先建立了由懸浮粒子含量規(guī)定空氣潔凈度的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，以每立方英尺空氣所含最大允許微粒的數(shù)量確定，分為1、10、100、1000、10000、100000六個(gè)級(jí)別。國際標(biāo)準(zhǔn)ISO14644-1：空氣潔凈度分為9個(gè)級(jí)別，比美國聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)多出3個(gè)。美國FDA?無菌工藝藥品CGMP工業(yè)指南?：以動(dòng)態(tài)期間在物料漏置臨近處所測(cè)數(shù)據(jù)為依據(jù)，強(qiáng)調(diào)了動(dòng)態(tài)概念，對(duì)微生物進(jìn)行了控制，100、1000、10000、100000對(duì)應(yīng)ISO5、6、7、8美國藥典?1116?：根據(jù)美國聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)改編，M1-M7歐盟GMP：A、B、C、D，靜態(tài)、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)、強(qiáng)調(diào)了粒子的在線監(jiān)測(cè)2021年版GMP:等同于歐盟潔凈實(shí)驗(yàn)室按空氣懸浮粒子大小和數(shù)量的不同參考現(xiàn)行“藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)〞分為A、B、C、D4個(gè)級(jí)別。潔凈實(shí)驗(yàn)室初次使用的潔凈實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行參數(shù)確認(rèn)，確認(rèn)參數(shù)包括物理參數(shù)、空氣懸浮粒子和微生物。物理參數(shù)空氣懸浮粒子微生物浮游菌沉降菌外表微生物空氣過濾器完整性，氣流組織、空氣流速，換氣次數(shù)、壓差、溫度和相對(duì)濕度參數(shù)確認(rèn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)?潔凈室施工及驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)?附錄D3高效空氣過濾器現(xiàn)場掃描檢漏方法粒子計(jì)數(shù)器法、附錄E12氣流的檢測(cè)、附錄E1風(fēng)量和風(fēng)速的檢測(cè)、附錄E2靜壓差的檢測(cè)、附錄E5溫濕度的檢測(cè)潔凈實(shí)驗(yàn)室2021年版與2021年版的物理指標(biāo)相比100級(jí)與A級(jí)比較，單向流斷面風(fēng)速相差較大，100級(jí)潔凈區(qū)需要增加循環(huán)風(fēng)量才能到達(dá)A級(jí)，10000級(jí)潔凈區(qū)空調(diào)系統(tǒng)需要增加1倍的送風(fēng)量，才能到達(dá)B級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室潔凈室微生物監(jiān)測(cè)和控制定期清潔、消毒、消毒效果驗(yàn)證包括：非生物活性的空氣懸浮粒子數(shù)和有生物活性的微生物監(jiān)測(cè)，其中微生物監(jiān)測(cè)包括環(huán)境浮游菌和沉降菌監(jiān)測(cè)，及關(guān)鍵的檢測(cè)臺(tái)面、人員操作服外表及5指手套等的微生物檢測(cè)。潔凈實(shí)驗(yàn)室懸浮粒子用于空氣潔凈度分級(jí)的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1μm-1000μm的固體和液體粒子。潔凈實(shí)驗(yàn)室方法：GB/T16292-2021?醫(yī)藥工業(yè)潔凈室〔區(qū)〕懸浮粒子的測(cè)試方法?采樣點(diǎn)數(shù)目：最少采樣數(shù)，兩種方法，一、NL—最少采樣點(diǎn)A—潔凈室或被控潔凈區(qū)的面積，單位為平方米〔單向流，垂直于氣流方向上的橫截面積〕潔凈實(shí)驗(yàn)室二|查表潔凈實(shí)驗(yàn)室采樣點(diǎn)位置與分布：離地面0.8m高度的水平面上均勻分布采樣點(diǎn)多于5點(diǎn)時(shí)，也可在離地面0.8-1.5m高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，每層不少于5點(diǎn)靜態(tài)測(cè)試時(shí)，采樣點(diǎn)布置力求均勻〔附錄A〕，動(dòng)態(tài)測(cè)試，應(yīng)根據(jù)關(guān)鍵操作區(qū)布置。潔凈實(shí)驗(yàn)室采樣次數(shù)：對(duì)任何小潔凈室〔區(qū)〕或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點(diǎn)數(shù)目不少于2個(gè)，總采樣次數(shù)不少于5次，每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以多于1次，不同采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以不同每次采樣量：潔凈實(shí)驗(yàn)室計(jì)算：〔計(jì)算詳細(xì)見GB標(biāo)準(zhǔn)〕結(jié)果：每個(gè)采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度必須不大于規(guī)定的級(jí)別界限全部采樣點(diǎn)的懸浮粒子濃度平均值均值的95%置信上限必須不大于規(guī)定的級(jí)別界限，UCL≤級(jí)別界限潔凈實(shí)驗(yàn)室浮游菌、沉降菌：潔凈度級(jí)別2010年版浮游菌/m3沉降菌/皿，0.5h100≤5＜11000——10000≤100≤3100000≤500≤10潔凈實(shí)驗(yàn)室方法：GB/T16293-2021?醫(yī)藥工業(yè)潔凈室〔區(qū)〕浮游菌的測(cè)試方法?GB/T16293-2021?醫(yī)藥工業(yè)潔凈室〔區(qū)〕沉降菌的測(cè)試方法?浮游菌最少采樣點(diǎn)——參照懸浮粒子GB/T16292-2021采樣點(diǎn)的位置——參照懸浮粒子GB/T16292-2021工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.8-1.5m左右〔略高于工作面〕送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右。可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。采樣次數(shù)——每個(gè)采樣點(diǎn)采樣一次潔凈實(shí)驗(yàn)室最小采樣量：潔凈度級(jí)別采樣量L/次100100010000500100000100300000100本卷須知單向流區(qū)域，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；非單向區(qū)域，采樣口朝上。采樣點(diǎn)避開回風(fēng)口。測(cè)試人員站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，盡量少走動(dòng)。為防止培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過程的影響，應(yīng)對(duì)培養(yǎng)皿做陰性對(duì)照〔不暴露采樣〕，應(yīng)無菌生長。記錄———測(cè)試者名稱，日期，測(cè)試依據(jù)，潔凈室的平面位置，測(cè)試儀器，方法描述，包括測(cè)試環(huán)境條件，采樣點(diǎn)位置，布置圖，測(cè)試次數(shù)，采樣量，測(cè)試儀器檢定證書，動(dòng)態(tài)測(cè)試應(yīng)記錄現(xiàn)場人員數(shù)量位置，設(shè)備的數(shù)量和位置，測(cè)試結(jié)果。潔凈實(shí)驗(yàn)室結(jié)果每點(diǎn)浮游菌平均濃度〔個(gè)/m3〕=菌落數(shù)/采樣量結(jié)果評(píng)定每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于標(biāo)準(zhǔn)的界限靜態(tài)測(cè)試，某點(diǎn)浮游菌平均濃度超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，那么應(yīng)重新采樣兩次，兩次結(jié)果均合格才能判定為合格。潔凈實(shí)驗(yàn)室沉降菌最少采樣點(diǎn)參照懸浮粒子GB/T16292-2021采樣點(diǎn)的位置參照懸浮粒子GB/T16292-2021最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度級(jí)別最少培養(yǎng)皿數(shù)（90mm）1001410000210000023000002潔凈實(shí)驗(yàn)室結(jié)果計(jì)算平均菌落數(shù)=(M1+M2+……MN)/NM1——1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)N——培養(yǎng)皿總數(shù)結(jié)果評(píng)定—同浮游菌潔凈實(shí)驗(yàn)室外表微生物外表微生物測(cè)定是對(duì)環(huán)境、設(shè)備和人員的外表微生物進(jìn)行監(jiān)測(cè)，方法包括接觸碟法和擦拭法。接觸碟法——將充滿規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟對(duì)規(guī)那么外表或平面進(jìn)行取樣，然后置適宜的溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間并計(jì)數(shù)，每碟取樣面積約為25cm2，微生物計(jì)數(shù)結(jié)果以cfu/碟報(bào)告；擦拭法——接觸碟法的補(bǔ)充，用于不規(guī)那么外表的微生物監(jiān)測(cè)，特別是設(shè)備的不規(guī)那么外表。擦拭法是采用適宜尺寸的無菌模板確定擦拭的面積，取樣后，將拭子置適宜的緩沖液或培養(yǎng)基中，充分振蕩，然后采用適宜的方法計(jì)數(shù)，每個(gè)拭子取樣面積為約25cm2，微生物計(jì)數(shù)結(jié)果以cfu/拭子報(bào)告。接觸碟法和擦拭法采用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時(shí)間同浮游菌或沉降菌〔一般采用TSA，當(dāng)監(jiān)測(cè)結(jié)果有疑似真菌或考慮季節(jié)因素影響時(shí)，可增加SDA〕外表菌測(cè)定應(yīng)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行。潔凈實(shí)驗(yàn)室推薦的藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)頻次及監(jiān)測(cè)工程潔凈度級(jí)別懸浮粒子浮游菌沉降菌表面微生物A級(jí)每月每月每次每次B級(jí)每季度每季度每周每周C級(jí)每半年每半年每季度每季度D級(jí)每半年每半年每半年每半年潔凈實(shí)驗(yàn)室如果出現(xiàn)連續(xù)超過糾偏限和警戒限、關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染微生物存在、空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大的維修、消毒規(guī)程改變、設(shè)備有重大維修或增加、潔凈室〔區(qū)〕結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動(dòng)、引起微生物污染的事故、日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)時(shí)應(yīng)考慮修改監(jiān)測(cè)頻次。潔凈實(shí)驗(yàn)室潔凈實(shí)驗(yàn)室偏差處理當(dāng)微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果超出警戒限度和糾偏限度時(shí)，應(yīng)當(dāng)按照偏差處理規(guī)程進(jìn)行報(bào)告、記錄、調(diào)查、處理以及采取糾正措施，并對(duì)糾正措施的有效性進(jìn)行評(píng)估。微生物鑒定建議對(duì)受控環(huán)境收集到的微生物進(jìn)行適當(dāng)水平的鑒定1、有助于預(yù)期常見菌群。2、有助于評(píng)估清潔/消毒方法、消毒劑的有效性。3、有助于污染源的調(diào)查，輔助OOS調(diào)查。

潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物鑒定通那么9205“藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原那么〞建議對(duì)潔凈室和其他受控環(huán)境別離到的微生物進(jìn)行鑒定，以掌握環(huán)境微生物污染情況，有助于污染調(diào)查。無菌試驗(yàn)結(jié)果陽性和無菌生產(chǎn)模擬工藝〔如培養(yǎng)基灌裝〕失敗時(shí)，對(duì)檢出的微生物鑒定至少到達(dá)種屬水平，必要時(shí)到達(dá)菌株水平。潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物鑒定借助現(xiàn)有的分類系統(tǒng)，通過對(duì)未知微生物的特征測(cè)定，對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌、酵母菌和霉菌大類的區(qū)分，或?qū)?、種及菌株水平確定的過程。潔凈實(shí)驗(yàn)室鑒定程序—?jiǎng)e離純化—初篩試驗(yàn)—表型微生物鑒定—基因型微生物鑒定〔16SrDNA、18SrDNA、聚合酶鏈?zhǔn)椒错憽NA-DNA雜交、焦磷酸測(cè)序、多位點(diǎn)序列分型等〕潔凈實(shí)驗(yàn)室別離純化純培養(yǎng)物是指來源于同一單細(xì)胞的細(xì)胞群體平板劃線法是最常用的技術(shù)潔凈實(shí)驗(yàn)室初篩試驗(yàn)〔革蘭氏染色、芽孢染色、鏡檢觀察細(xì)胞形態(tài)、重要的生化反響〕重要的生化篩選試驗(yàn)—氧化酶試驗(yàn)：氧化酶陽性：不發(fā)酵的革蘭氏陰性桿菌、氧化酶陰性：腸道菌—過氧化氫酶試驗(yàn)陽性：葡萄球菌陰性：鏈球菌—凝固酶試驗(yàn)陽性：致病性陰性：非致病性潔凈實(shí)驗(yàn)室表型微生物鑒定—培養(yǎng)物〔菌落形態(tài)、菌落顏色、形狀、大小和產(chǎn)色素〕—形態(tài)學(xué)〔細(xì)胞形態(tài)、大小、形狀、鞭毛、內(nèi)容物、革蘭氏染色、芽孢和抗酸染色、孢子形成模式〕—生理學(xué)〔氧氣耐受性、pH值范圍、最適溫度和范圍、耐鹽性〕—生化反響〔碳源利用、碳水化合物的氧化或發(fā)酵、酶的模式〕—抑制性〔膽鹽耐受性、抗生素敏感性、染料耐受性〕—血清學(xué)〔凝集反響、熒光抗體〕—化學(xué)分類〔脂肪酸構(gòu)成、微生物霉素、全細(xì)胞組分〕—生態(tài)學(xué)〔微生物來源〕潔凈實(shí)驗(yàn)室基因型微生物鑒定—微生物由于特殊環(huán)境的影響，表型特征常發(fā)生變異，傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定手段難以得到種水平結(jié)果，以其核酸序列為鑒定根底，從遺傳進(jìn)化角度說明微生物種群之間的分類學(xué)關(guān)系—〔16SrDNA、18SrDNA、聚合酶鏈?zhǔn)椒错?、DNA-DNA雜交、焦磷酸測(cè)序、多位點(diǎn)序列分型等〕潔凈實(shí)驗(yàn)室潔凈實(shí)驗(yàn)室潔凈實(shí)驗(yàn)室—?伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)?對(duì)細(xì)菌的分類是通過遺傳物質(zhì)的分析比較來實(shí)現(xiàn)?！蜩b定法不但技術(shù)需要保證，還需要昂貴的分析設(shè)備和材料，通常在關(guān)鍵微生物調(diào)查中使用，如產(chǎn)品不合風(fēng)格查，假設(shè)使用，方法必須經(jīng)過確認(rèn)鑒定方法確實(shí)認(rèn)包括：準(zhǔn)確度、專屬性、重現(xiàn)性、靈敏度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值潔凈實(shí)驗(yàn)室隔離器分類：硬倉、軟倉結(jié)構(gòu)：1、空氣處理系統(tǒng)〔高效空氣過濾器〕2、傳遞接口及傳遞門3、滅菌設(shè)備〔一般為過氧化氫、過氧乙酸等滅菌〕4、配套設(shè)備與輔助設(shè)備潔凈實(shí)驗(yàn)室潔凈實(shí)驗(yàn)室潔凈實(shí)驗(yàn)室隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證1、操作驗(yàn)證2、隔離器完整性驗(yàn)證3、滅菌驗(yàn)證4、滅菌循環(huán)驗(yàn)證5、隔離器內(nèi)部潔凈度驗(yàn)證6、儀器儀表驗(yàn)證潔凈實(shí)驗(yàn)室藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室怎樣實(shí)現(xiàn)微生物的良好控制？處于受控狀態(tài)？1、硬件設(shè)施的滿足潔凈室的驗(yàn)收應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)，換氣次數(shù)，送風(fēng)量、環(huán)境溫濕度等等2、良好的環(huán)境管理，清潔、消毒程序，并嚴(yán)格執(zhí)行，選擇適當(dāng)?shù)南痉绞?，合理的消毒劑，清潔消毒頻率。監(jiān)測(cè)到位。3、減少人員干預(yù)，人是最大的污染源，標(biāo)準(zhǔn)人員進(jìn)出潔凈區(qū)的程序，嚴(yán)格按照A/B潔凈區(qū)的要求做好人員防護(hù)。做好人員培訓(xùn)。4、控制物流的干擾，做好物流的消毒、外外表滅菌工作，減少物流的污染5、應(yīng)當(dāng)對(duì)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、回憶，通過收集的數(shù)據(jù)和趨勢(shì)分析，總結(jié)和評(píng)估潔凈實(shí)驗(yàn)室是否受控。

潔凈實(shí)驗(yàn)室消毒劑的選擇與使用微生物的抗力從小到大排列一般為：—細(xì)菌繁殖體—真菌繁殖體—真菌孢子—病毒—分枝桿菌—細(xì)菌芽孢潔凈實(shí)驗(yàn)室消毒劑選擇、使用將消毒劑種類分為四個(gè)作用水平〔1〕滅菌：可殺滅一切微生物〔包括芽孢〕到達(dá)滅菌保證水平的方法。甲醛、戊二醛、環(huán)氧乙烷、過氧乙酸、過氧化氫等。〔2〕高水平消毒法：可以殺滅各種微生物，對(duì)芽孢殺滅到達(dá)消毒效果的方法。這類消毒方法應(yīng)能殺滅一切細(xì)菌繁殖體〔包括結(jié)核分枝桿菌〕、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌芽孢。用含氯、二氧化氯、過氧乙酸、過氧化氫、含溴消毒劑、臭氧、二溴海因等甲基乙內(nèi)酰脲類化合物和一些復(fù)配的消毒劑等消毒因子進(jìn)行消毒的方法?！?〕中水平消毒法：殺滅和去除細(xì)菌芽孢以外的各種病原微生物的消毒方法，碘類消毒劑(碘伏、碘酊等)、醇類、醇類和氯已定的復(fù)方，醇類和季銨鹽類化合物的復(fù)方、酚類等消毒劑進(jìn)行消毒的方法。〔4〕低水平消毒法：只能殺滅細(xì)菌繁殖體〔分枝桿菌除外〕和親脂病毒的化學(xué)消毒劑。如單鏈季銨鹽類消毒劑(苯扎溴銨等)、雙胍類消毒劑如氯己定、植物類消毒劑和汞、銀、銅等金屬離子消毒劑。消毒劑種類推薦使用濃度用途注意事項(xiàng)苯酚（石炭酸）3%～5%工作臺(tái)面、器皿消毒中等毒來蘇兒1%～3%（皮膚、器械）；3%～5%（器皿、污染物、工作臺(tái)面）皮膚、器械、器皿、污染物、工作臺(tái)面中等毒新潔而滅0.25%皮膚、小型器皿對(duì)病毒、芽孢無效乙醇70%～75%皮膚、金屬器具、生物安全柜內(nèi)表面易揮發(fā)自燃碘伏0.3%～0.5%皮膚低溫不發(fā)揮效能氯消毒劑（二氧化氯、次氯酸鈉、次氯酸鈣等）0.1%～0.5%工作臺(tái)面、環(huán)境、器皿、污染物等廣泛使用腐蝕金屬、高濃度對(duì)人有刺激性，污染環(huán)境漂白粉0.5%～1%（5min殺菌）；5%（1h殺芽孢）空氣、表面、地面消毒、污染物處理腐蝕金屬、高濃度對(duì)人有刺激性，污染環(huán)境過氧化氫3%細(xì)菌污染器皿，口腔黏膜不穩(wěn)定、易氧化金屬，現(xiàn)用現(xiàn)配，刺激性大，需戴手套、防護(hù)鏡過氧乙酸0.2%～0.4%（3min）；0.50%皮膚；一般物品不穩(wěn)定、嚴(yán)禁與金屬接觸，現(xiàn)用現(xiàn)配，刺激性大，需戴手套、防護(hù)鏡過氧乙酸2%（8ml/m3）1h空氣空氣濕度越大越好，滅菌后通風(fēng)甲醛加熱熏蒸至少8小時(shí)空氣空氣相對(duì)濕度70%以上臭氧2.5mg/L～5mg/L(2h)空氣空氣濕度越大越好，滅菌后通風(fēng)戊二醇0.2mg/L～1mg/L(10-15min)怕高溫、怕腐蝕的醫(yī)療器械盛裝容器必須加蓋潔凈實(shí)驗(yàn)室消毒劑的配制：1、按供給商的使用說明配制和儲(chǔ)存。2、A/B級(jí)區(qū)域應(yīng)使用經(jīng)除菌過濾的消毒劑。3、盡量高級(jí)別的水配制，純化水、滅菌水、注射用水,配好后放置一會(huì)。影響消毒劑效力的因素：濃度、接觸時(shí)間、pH值、溫度、微生物的數(shù)量和種類潔凈實(shí)驗(yàn)室消毒劑的選擇原理1、根據(jù)市售消毒劑的抗菌譜、根據(jù)區(qū)域等級(jí)，A/B級(jí)選用殺孢子劑，其他區(qū)域可配合使用其他水平的消毒劑，定期使用殺孢子劑。2、根據(jù)使用說明，標(biāo)準(zhǔn)使用濃度和作用時(shí)間3、根據(jù)待消毒外表的材質(zhì)。如對(duì)設(shè)備外表的腐蝕程度對(duì)操作者的平安性。〔殘留、腐蝕、粘膜刺激〕4、和清潔劑，其他消毒劑的相容性5、選用多種類的消毒劑，交替使用，防止微生物對(duì)其產(chǎn)生耐受性。潔凈實(shí)驗(yàn)室?guī)追N空間滅菌方法：熏蒸滅菌概念1980年收錄于USP，在一定溫度和壓力的密閉條件下，化學(xué)消毒劑轉(zhuǎn)為氣態(tài)滲透到生物體內(nèi)，使生物致死。有助于降低潔凈區(qū)死角的微生物污染。

甲醛：對(duì)所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑通常推薦12小時(shí)滅菌時(shí)間，排氣、通風(fēng)至少24小時(shí)，過程漫長，有致癌作用，現(xiàn)在已很少使用

臭氧：對(duì)所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑無殘留，無污染，臭氧對(duì)人體有害，為強(qiáng)氧化劑，對(duì)多種物品有損壞，橡膠老化、銅片生銹，織物褪色等。過氧化氫：對(duì)所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑2H2O2→2H2O+O2過氧化氫滅菌平安，環(huán)境友好，不產(chǎn)生有毒有害殘留物最終分解產(chǎn)物為H2O和O2，無毒無殘留。潔凈實(shí)驗(yàn)室紫外消毒的應(yīng)用紫外線：空氣消毒、物體外表消毒用UV進(jìn)行外表消毒時(shí)，要求燈管距離污染外表不超過1m，30WUV燈照射時(shí)，照射時(shí)間不應(yīng)短于30分鐘，燈管周圍1.5-2.0m為消毒有效區(qū)。應(yīng)對(duì)燈的紫外線照射強(qiáng)度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，當(dāng)強(qiáng)度低于規(guī)定值時(shí)，及時(shí)更換。方法：生物指示劑/物理學(xué)檢測(cè)生物指示：大腸桿菌，照射劑量應(yīng)到達(dá)20000μw·s/cm2,枯草桿菌黑色變種芽孢應(yīng)到達(dá)100000μw·s/cm2。物理學(xué)檢測(cè)方法：燈管的紫外線強(qiáng)度〔μw/cm2〕用中心波長為253.7nm的紫外線強(qiáng)度測(cè)定儀〔標(biāo)定有效期內(nèi)〕，在燈管垂直位置1m處測(cè)定。潔凈實(shí)驗(yàn)室判定指標(biāo)〔1〕電壓220V，室溫20～25℃，253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度〔垂直1m處〕普通30W直管型紫外線燈≥70μw/cm2；高強(qiáng)度紫外線燈≥200μw/cm2。〔2〕外表消毒接受的照射劑量，應(yīng)達(dá)殺滅目標(biāo)微生物所需。應(yīng)到達(dá)100000μw.s/cm2。劑量〔μw.s/cm2〕=輻射強(qiáng)度〔μw/cm2〕×?xí)r間〔s〕。

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?9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原那么?藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株。CMCC-----中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心CMCC〔F〕\CMCC〔B〕,F--------真菌；B--------細(xì)菌ATCC-美國標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏中心

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定義標(biāo)準(zhǔn)菌株至少定義到屬或種水平的菌株。按其特征進(jìn)行分類和描述，有明確的來源。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏菌株從國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏菌株。應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。可用于制備每月或每周1次轉(zhuǎn)種的工作菌株。工作菌株由標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏菌株轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5代。菌種的管理

申購驗(yàn)收確認(rèn)保藏傳代使用銷毀

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申購：菌種管理人員提出購置申請(qǐng)驗(yàn)收：接受菌種時(shí)應(yīng)檢查菌種的名稱，代號(hào)，數(shù)量，完整性，記錄信息。菌種復(fù)活：冷凍菌種的復(fù)活，無菌操作翻開玻璃管，用相應(yīng)的液體培養(yǎng)基0.5-1ml溶解冷凍菌種，轉(zhuǎn)移至適宜的培養(yǎng)基中復(fù)活。確認(rèn)：用無菌接種環(huán)取復(fù)活的培養(yǎng)物，在相應(yīng)的培養(yǎng)基平板上劃線別離培養(yǎng)，觀察典型的菌落形態(tài)，菌落形態(tài)的一致性，挑取單個(gè)菌落形態(tài)進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，觀察染色特性及微生物形態(tài)學(xué)特征，生化反響或用菌種鑒定系統(tǒng)進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。

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保藏-----確保在相應(yīng)的保藏條件下的菌種不會(huì)變異且性能穩(wěn)定，經(jīng)濟(jì)簡便。甘油冷凍保藏：液體培養(yǎng)物參加等體積的20%甘油，混勻，分裝于1ml的小管，-80℃---30℃保存；或菌苔刮取后分散于無菌水中，參加等體積20%甘油的TSB中。再分裝。瓷珠保藏法將培養(yǎng)好的微生物細(xì)胞或孢子制成懸浮液，轉(zhuǎn)入裝有無菌多孔玻璃珠〔或瓷珠〕的無菌瓶中，使其吸附于玻璃珠外表，去除多余懸浮液，低溫冷凍保存的一種菌種保藏方法。SN/T2660-2021食品微生物實(shí)驗(yàn)室菌種保藏方法：-70℃可保存10年斜面低溫保藏：把待保藏菌接種在適宜的斜面培養(yǎng)基外表，充分生長后，在4℃左右冰箱保存。銅綠不能用此法保存。菌種的管理

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傳代：工作菌株的傳代次數(shù)不得超過5代〔標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代〕。1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何形式的轉(zhuǎn)種均被認(rèn)為是傳代1次。傳代時(shí)，應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)。

使用：使用工作菌種制備菌液，做好記錄。菌液制備后假設(shè)在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；假設(shè)保存在2-8度，可在24小時(shí)內(nèi)使用。銷毀：傳代、使用過程產(chǎn)生的所有活的微生物均應(yīng)進(jìn)行高壓滅菌處理。

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菌種的標(biāo)識(shí)每一支菌種都應(yīng)以適當(dāng)?shù)臉?biāo)簽、標(biāo)識(shí)來表示其名稱、菌號(hào)、接種日期、代數(shù)等信息。

例如1：大CMCC(B)44102標(biāo)140606/0/3，其中“大〞表示大腸埃希菌，“標(biāo)〞代表標(biāo)準(zhǔn)菌株，“140606〞指標(biāo)準(zhǔn)菌株的購置日期即2021年6月6日，“0〞代表是零代，“3〞代表是一共購置3支。例如2：大CMCC(B)44102儲(chǔ)〔瓷〕140606/2/10，其中“大〞表示大腸埃希菌，“儲(chǔ)〞代表標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏菌株，“瓷〞表示用瓷珠保藏法來保藏此菌種，“140606〞指標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏菌株的傳代日期即2021年6月6日，“10〞代表是一共制備了10支。生物平安實(shí)驗(yàn)室生物平安實(shí)驗(yàn)室簡介二級(jí)生物平安實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)要求生物平安柜的分類與特點(diǎn)二級(jí)生物平安柜的使用生物平安實(shí)驗(yàn)室?人間傳染的病原微生物名錄?根據(jù)微生物的危害程度將其分為4類，藥品微生物檢測(cè)所涉及到的菌都為第三類，應(yīng)該在二級(jí)生物平安實(shí)驗(yàn)室操作。具有一定的生物平安防護(hù)水平的實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)稱為生物平安實(shí)驗(yàn)室。通過標(biāo)準(zhǔn)化的建筑、生物平安設(shè)備配置、個(gè)人防護(hù)、翔實(shí)的SOP和嚴(yán)格的管理來實(shí)現(xiàn)。生物平安實(shí)驗(yàn)室氣溶膠aerosol懸浮于氣體介質(zhì)中粒徑一般為0.001-100μm的固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的穩(wěn)定的分散體系。吸入〔病原微生物污染的空氣〕〔氣溶膠－0.001-100μm的固態(tài)、液態(tài)微小粒子懸浮在氣體介質(zhì)中形成的相對(duì)穩(wěn)定的分散體系〕感染性病原微生物氣溶膠的吸入是造成實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染的主要因素。生物平安實(shí)驗(yàn)室二級(jí)生物平安實(shí)驗(yàn)室建設(shè)要求〔1〕必須為實(shí)驗(yàn)室平安運(yùn)行、清潔和維護(hù)提供足夠的空間。在實(shí)驗(yàn)室的工作區(qū)外還應(yīng)當(dāng)提供另外的可長期使用的儲(chǔ)存間。應(yīng)當(dāng)為平安操作及儲(chǔ)存溶劑、放射性物質(zhì)、壓縮氣體和液化氣提供足夠的空間和設(shè)施.在實(shí)驗(yàn)室的工作區(qū)外應(yīng)當(dāng)有存放外衣和私人物品的設(shè)施。在實(shí)驗(yàn)室的工作區(qū)外應(yīng)當(dāng)有進(jìn)食、飲水和休息的場所〔2〕實(shí)驗(yàn)室墻壁、天花板和地板應(yīng)當(dāng)光滑、易清潔、不滲漏、耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地板應(yīng)當(dāng)防滑。實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)是防水的，并可耐消毒劑、酸、堿、有機(jī)溶劑和中等熱度的作用。實(shí)驗(yàn)室器具應(yīng)當(dāng)鞏固耐用，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)、生物平安柜和其他設(shè)備之間及其下面要保證有足夠的空間以便進(jìn)行清潔。實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)有可視窗，并到達(dá)適當(dāng)?shù)姆阑鸬燃?jí)，最好能自動(dòng)關(guān)閉(3)

應(yīng)保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有活動(dòng)的照明，防止不必要的反光和閃光。要有可靠和充足的電力供給和應(yīng)急照明，以保證人員平安離開實(shí)驗(yàn)室。生物平安實(shí)驗(yàn)室(4)

必須為實(shí)驗(yàn)室提供可靠和高質(zhì)量的水。要保證實(shí)驗(yàn)室水源和飲用水源的供給管道之間沒有交叉連接。應(yīng)當(dāng)安裝防止逆流裝置來保護(hù)公共飲水系統(tǒng)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)有洗手池，并最好安裝在出口處，盡可能用自來水.(5)

平安系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)包括消防、應(yīng)急供電、應(yīng)急淋浴以及洗眼設(shè)施。應(yīng)當(dāng)配備具有適當(dāng)裝備并易于進(jìn)入的急救區(qū)或急救室。(6)

BSL-2實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)在靠近實(shí)驗(yàn)室的位置配備高壓滅菌器或其他去除污染的工具。(7)在設(shè)計(jì)新的設(shè)施時(shí)，應(yīng)當(dāng)考慮設(shè)置機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，以使空氣向內(nèi)單向流動(dòng)。如果沒有機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)室窗戶應(yīng)當(dāng)能夠翻開，同時(shí)應(yīng)安裝防蟲紗窗。(8)

必須考慮平安保衛(wèi)措施。必須使用鞏固的門、平安窗戶以及門禁系統(tǒng)。適當(dāng)時(shí)還應(yīng)使用其他措施來加強(qiáng)平安保障。

生物平安實(shí)驗(yàn)室生物平安實(shí)驗(yàn)室防護(hù)要求在實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)，必須穿著適宜的工作服或防護(hù)服。在進(jìn)行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動(dòng)物的操作時(shí)，應(yīng)戴上適宜的手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。在處理完感染性實(shí)驗(yàn)材料和動(dòng)物后，以及在離開實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域前，都必須洗手。為了防止眼睛或面部受到噴濺物的污染、碰撞或人工紫外線輻射的傷害，必須戴適宜的平安眼鏡、面罩〔面具〕或其他防護(hù)設(shè)備。嚴(yán)禁穿著實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服離開實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾的鞋。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化裝和處理隱形眼鏡。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域儲(chǔ)存食品和飲料。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用過的防護(hù)服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。生物平安實(shí)驗(yàn)室生物平安柜〔BiosafetyCabinetBSC)負(fù)壓過濾排風(fēng)柜－在生物因子操作過程中用來保護(hù)操作人員、環(huán)境和〔或〕實(shí)驗(yàn)材料，防止感染性材料在實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的氣溶膠向操作者和環(huán)境擴(kuò)散。生物平安實(shí)驗(yàn)室的重要設(shè)備，是病原微生物操作的一級(jí)防護(hù)屏障，關(guān)系生命平安和環(huán)境平安，有嚴(yán)格質(zhì)量要求。平安柜分級(jí)：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個(gè)級(jí)別。生物平安實(shí)驗(yàn)室生物平安柜種類BSC有三個(gè)級(jí)別，一共有六種。生物安全柜正面氣流速度（m/s）氣流重新循環(huán)部分（%）氣流排出部分（%）排風(fēng)系統(tǒng)Ⅰ級(jí)0.360100硬管Ⅱ級(jí)A10.38-0.517030排到房間或套管連接處Ⅱ級(jí)A20.517030排到房間或套管連接處Ⅱ級(jí)B10.513070硬管Ⅱ級(jí)B20.510100硬管Ⅲ級(jí)不適用0100硬管生物平安實(shí)驗(yàn)室Ⅰ級(jí)生物平安柜操作者可通過前窗操作口在平安柜內(nèi)進(jìn)行操作。前窗操作口向內(nèi)吸入的負(fù)壓氣流保護(hù)人員的平安。污染氣流經(jīng)高效過濾器過濾后排出，保護(hù)環(huán)境不受污染。不保護(hù)操作對(duì)象。A-前窗操作口B-觀察窗

C-排氣過濾器D-負(fù)壓排氣通路

Ⅰ級(jí)平安柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖生物平安實(shí)驗(yàn)室Ⅱ級(jí)生物平安柜根據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和氣流模式的不同分為A1、A2、B1、B2四種類型操作者通過前窗操作口在平安柜內(nèi)進(jìn)行操作。操作口流入氣流：保護(hù)人員經(jīng)高效過濾器過濾的下降氣流：保護(hù)產(chǎn)品被污染氣流經(jīng)高效過濾器過濾后排出：保護(hù)環(huán)境生物平安實(shí)驗(yàn)室ⅡA1型生物平安柜前窗操作口流入氣流的最低速率為0.38m/s；下降氣流為局部流入氣流和局部循環(huán)氣流的混合氣流，經(jīng)高效過濾器過濾后送至工作區(qū)；污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室中或經(jīng)平安柜的外接排風(fēng)管道排到大氣中；平安柜內(nèi)的污染部位可以處于正壓狀態(tài)；A1型平安柜不能用于揮發(fā)性有毒化學(xué)品和揮發(fā)性放射性核素的實(shí)驗(yàn)。生物平安實(shí)驗(yàn)室IIA1型生物平安柜70%氣體循環(huán)利用30%氣體外排.環(huán)境空氣污染的空氣HEPA過濾的空氣負(fù)壓的污染空氣生物平安實(shí)驗(yàn)室操作口流入氣流的最低速率為0.50m/s；下降氣流為局部流入氣流和局部循環(huán)氣流的混合氣流，經(jīng)高效過濾器過濾后送至工作區(qū)；污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室或經(jīng)平安柜的外接排風(fēng)管道排到大氣中；平安柜內(nèi)所有污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)環(huán)繞；平安柜用于進(jìn)行以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須連接功能適宜的排氣罩。生物平安實(shí)驗(yàn)室IIA2型生物平安柜70%氣體循環(huán)使用.30%氣體排出，既可以接管道外排，也可以不接管道直接排放在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境空氣污染的空氣HEPA過濾的空氣污染空氣

生物平安實(shí)驗(yàn)室Ⅱ級(jí)B1型生物平安柜操作口流入氣流的最低速率為0.50m/s；下降氣流大局部由未污染的流入氣流循環(huán)提供，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)；大局部被污染的下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用的排氣管道排入大氣中；平安柜內(nèi)所有被污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍；如果揮發(fā)性有毒化學(xué)品或放射性核素隨空氣循環(huán)不影響實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)在平安柜的直接排氣區(qū)域進(jìn)行，B1型平安柜可以用于以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)生物平安實(shí)驗(yàn)室Ⅱ級(jí)B2型生物平安柜前窗操作口流入氣流的最低速率為0.50m/s；下降氣流來自經(jīng)過高效過濾器過濾的實(shí)驗(yàn)室或室外空氣(即流經(jīng)樣本后的氣體不再循環(huán)使用)；流入氣流和下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用排氣管道排到大氣中，不允許回到平安柜和實(shí)驗(yàn)室中；所有污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)，污染氣體過濾后被全部外排〔不在工作區(qū)循環(huán)〕；B2型平安柜可以用于以揮