熒光分光光度計驗收細則

島津RF-5301PC熒光分光光度計的驗收方案一、 熒光分光光度計的方法原理某些物質(zhì)由于受到光照射而被激發(fā)之后，會發(fā)射出比照射波長稍長的光（熒光），熒光強度與該物質(zhì)的濃度有如下關(guān)系：F二k④I（1一e-￡Lc）0式中：F—熒光強度；k'—儀器常數(shù)；0—熒光量子效率I0—激發(fā)光強度e—熒光物質(zhì)的摩爾吸收系數(shù)L—熒光物質(zhì)液層的厚度c—熒光物質(zhì)的濃度對于某個給定物質(zhì)，激發(fā)光波長和強度固定，液層厚度固定，溶液濃度較低時，熒光強度和熒光物質(zhì)的濃度有如下關(guān)系：F二kc二、 試劑1、試劑及標準物質(zhì)：表試劑尺標準輸質(zhì)試捌名稱施醱奎寧硫酸化學(xué)式HjSQ,相對分子質(zhì)■782.93$8.03純度國家二級標瞧物履分析純

褰A.3碓建畫寧標準廨港配制方法做配標準溶港所取標準母襪質(zhì)越誡度”g/mL）配制體積MiL圖■濃度Ke/mL}所取悴積/mb1x10s250251X10-7100lxid-1104X10'7100IX10sL48x10_tWO …1x10s..J8lxiO'*1001X1O_T2、標準溶液的配制：1）0.05mol/L硫酸標準溶液將lOOOmL的容量瓶中加入適量的二次蒸餾水，用滴定管取濃硫酸2.7mL，注入容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，并混合均勻后放置備用。2）500mL1X10-5g/mL的硫酸奎寧標準溶液將硫酸奎寧固體在干燥器中放置24h以上。在分析天平上稱準至5.00mg的硫酸奎寧標準物質(zhì)至于500mL容量瓶中，用適量的0.05mol/L硫酸標準溶液溶解，然后再用0.05mol/L硫酸標準溶液稀釋至刻度，搖勻即可。注：用深色玻璃瓶儲存高濃度的標準液。溶液應(yīng)低溫、避光、密封儲存。稀標準溶液應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用。濃溶液有效期為半年。3、設(shè)備及器材$A.X設(shè)■及規(guī)格名稱規(guī)格名稱規(guī)格烘箱(0-220)V容量瓶100,250,1OOOmL滴定骨10ml.量筒500mL5mL20mL分析夭平分度值0.01mg單標線吸管1*10*25mL三、驗收標準及驗收方法（僅對于色散型單色器（光柵）一）、波長示值誤差及重復(fù)性1、 標準：波長示值最大誤差±2.0nm；波長重復(fù)性V.Onm。2、 驗證方法：氙燈亮線法

1）激發(fā)側(cè)單色器波長示值誤差和重復(fù)性將發(fā)色側(cè)單色器置零級位置，將漫反射板（或無熒光的白色濾紙條）放入樣品室，儀器的響應(yīng)時間設(shè)置為：“快”掃描速度設(shè)置為“中”，狹縫寬度為1.5nm，對激發(fā)側(cè)單色器在（350?550nm）的波長范圍內(nèi)進行掃描，在譜圖上找到450.1nm處的光譜峰，并確定其峰值位置。連續(xù)測量三次，按照式（1）和式（2）分別計算波長示值誤差和重復(fù)性。波長示值誤差：=1工九—九 （1）九3 in式中：九一波長測量值（nm）九一參考波長測量值（氙燈亮線參考波長測量值為：450.1nm）波長重復(fù)性：匸max?波長重復(fù)性：匸max?nm)2）發(fā)射側(cè)單色器波長示值誤差和重復(fù)性將激發(fā)側(cè)單色器置零級位置，將漫反射板（或無熒光的白色濾紙條）放入樣品室，儀器的響應(yīng)時間設(shè)置為：“快”掃描速度設(shè)置為“中”，狹縫寬度為1.5nm，對激發(fā)側(cè)單色器在（350~550nm）的波長范圍內(nèi)進行掃描，在譜圖上找到450.1nm處的光譜峰，并確定其峰值位置。連續(xù)測量三次，按照式（1）和式（2）分別計算波長示值誤差和重復(fù)性。二）、檢出極限1、 標準：用硫酸奎寧標準溶液的檢出極限為5X10-】0g/mL。2、 驗收方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白樣，選取質(zhì)量濃度為1X10-9g/mL硫酸奎寧標準溶液，靈敏度至最高檔，狹縫寬度為1.5nm,激發(fā)波長350nm,發(fā)射波長為450nm,對空白液和標準液進行連續(xù)交替測量11次。如果測量中，有1次數(shù)據(jù)是由于外界干擾或是操作失誤造成的誤差，應(yīng)該將此數(shù)據(jù)刪除。每次測量的熒光強度：F=F-F式中：F—標準溶液的熒光強度F—空白溶液的熒光強度ni

i=1熒光強度測量的平均值：F=-藝F（n—ni

i=1cDL二=x2sF式中：F—11次測量的平均熒光強度c—標準溶液的質(zhì)量濃度s一單次測量的標準偏差;三）、測量線性1、標準：儀器測量結(jié)果的線性Y值為.995。2、驗收方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白樣，將靈敏度至于高檔，狹縫寬度為1.5nm,激發(fā)波長350nm,發(fā)射波長450nm,依此測量下表4中各濃度硫酸奎寧標準溶液。表4硫酸奎寧標準溶液（g/L）標準溶液號1234標準溶液濃度（Cj）1X10-74X10-78X10-71X10-6分別對4中質(zhì)量濃度工作標準溶液與空白溶液連續(xù)交替3次測量，計算每次測量的熒光強度的平均值。用最小二乘法對4中標準溶液的質(zhì)量濃度和熒光強度測量平均值進行處理得到線性相關(guān)系數(shù)Y，幾位測量線性的檢定結(jié)果。最小二乘法的計算公式：Y=a+bXS—xxxya=Y-bXxx

yy(Zyy(ZxVY>XY——S二XY-xy注：片作為X,F作為Y即可進行計算。四）熒光光譜峰值強度的重復(fù)性1、 標準：儀器測量熒光光譜峰值強度的重復(fù)性口.5%。2、 驗證方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白樣，將靈敏度至于高檔，狹縫寬度為1.5nm,激發(fā)波長350nm,發(fā)射波長450nm,用1X10-7g/mL的硫酸奎寧標準溶液，見光3min后，對發(fā)射波長從365?500nm重復(fù)掃描三次。光譜強度的重復(fù)性由下式計算：maxmax式中：F—為光譜峰值強度的讀數(shù)。五）穩(wěn)定度1、 標準：在10min中內(nèi)基線漂移＜0.5%；熒光強度示值上限在10min內(nèi)的漂移三1.5%。2、 驗證方法調(diào)節(jié)靈敏度為中等強度，關(guān)閉光閘門，記錄10min內(nèi)的漂移；至激發(fā)波長和發(fā)射波長為450nm，至激發(fā)狹縫和發(fā)射狹縫的寬度為10nm，漫