第二章 蛋白質(zhì)2

第六節(jié)蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)

蛋白質(zhì)分子的多肽鏈按一定方式折疊、盤繞或組裝成特有的空間結(jié)構(gòu)，亦稱高級結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)即蛋白質(zhì)的構(gòu)象。

構(gòu)象是指相同構(gòu)型的化合物中，與碳原子相連的各原子或取代基團在單鍵旋轉(zhuǎn)時形成的相對空間排布。構(gòu)象的改變不需要共價鍵的斷裂和重新形成，只需單鍵的旋轉(zhuǎn)即可形成新的構(gòu)象。酰胺平面與α-碳原子的二面角（φ和ψ）

二面角

兩相鄰酰胺平面之間，能以共同的Cα為定點而旋轉(zhuǎn)，繞Cα-N鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱φ角，繞C-Cα鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱ψ角。φ和ψ稱作二面角，亦稱構(gòu)象角。肽鏈的主鏈可看成是由被Ca隔開的許多平面組成的。N端C端RHHOCCaNCaCRONOCNCaCRONCaHHHHCaH事實上，一個天然蛋白質(zhì)多態(tài)鏈在一定條件下只有一種或很少幾種構(gòu)象，而且相當穩(wěn)定。維持蛋白質(zhì)分子構(gòu)象的作用力

離子鍵氫鍵范德華力疏水相互作用力一、蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)

（一）二級結(jié)構(gòu)的概念蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象

。主要的化學鍵：

氫鍵

1.

a-螺旋(a-helix)

2.

b-折疊(b-pleatedsheet)

3.

b-轉(zhuǎn)角(b-turn)

4.無規(guī)卷曲(nonregularcoil)（二）二級結(jié)構(gòu)單元的種類1）絕大多數(shù)天然蛋白質(zhì)都是右手螺旋。2）每隔3.6個氨基酸殘基螺旋上升一圈；每圈間距0.54nm，即每個氨基酸殘基沿螺旋中心軸上升0.15nm，旋轉(zhuǎn)100°。α-螺旋結(jié)構(gòu)的主要特點：1.α-螺旋(α-helix)3）每個氨基酸殘基的N-H都與前面（C端）第四個殘基C=O形成氫鍵。

4)螺旋體中所有氨基酸殘基側(cè)鏈都伸向外側(cè)；鏈中的全部C=O和N-H幾乎都平行于螺旋軸,氫鍵幾乎平行于中心軸;

*R為Gly時，由于Ca上有2個氫，使Ca-C、Ca-N的轉(zhuǎn)動的自由度很大，即剛性很小，所以使螺旋的穩(wěn)定性大大降低。R基大(如Ile)也不易形成α-螺旋。*α-螺旋遇到Pro就會被中斷而拐彎，因為脯氨酸是亞氨基酸且有剛性的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。*帶相同電荷的氨基酸殘基連續(xù)出現(xiàn)在肽鏈上時，螺旋的穩(wěn)定性降低。側(cè)鏈在a-螺旋結(jié)構(gòu)的影響：*R基較小,且不帶電荷的氨基酸利于α-螺旋的形成,如多聚丙氨酸在pH7的水溶液中自發(fā)卷曲成α-螺旋。2.β-折疊(β-pleatedsheet)

β-折疊是由兩條或多條伸展的多肽鏈靠氫鍵聯(lián)結(jié)而成的鋸齒狀片狀結(jié)構(gòu)。①在

-折疊中，-碳原子總是處于折疊的角上，氨基酸的R基團處于折疊的棱角上并與棱角垂直，兩個氨基酸之間的軸心距為0.35nm。0.7nm

②-折疊結(jié)構(gòu)的氫鍵主要是由兩條肽鏈之間形成的；也可以在同一肽鏈的不同部分之間形成。幾乎所有肽鍵都參與鏈內(nèi)氫鍵的交聯(lián)，氫鍵與鏈的長軸接近垂直。（a）平行式（b）反平行式③

-折疊有兩種類型。一種為平行式，即所有肽鏈的N-端都在同一邊。另一種為反平行式，即相鄰兩條肽鏈的方向相反。后者更為穩(wěn)定。3.β-轉(zhuǎn)角（β-turn）

也稱β-回折，存在于球狀蛋白中。其特點是肽鏈回折180°，使得氨基酸殘基的C=O與第四個殘基的N-H形成氫鍵。第二個氨基酸通常是pro。

β-轉(zhuǎn)角都在蛋白質(zhì)分子的表面，多數(shù)為親水氨基酸組成。4.無規(guī)則卷曲（non-regularcoil）

又稱自由卷曲，是指沒有一定規(guī)律的松散肽鏈結(jié)構(gòu)，但是其結(jié)構(gòu)是明確而穩(wěn)定的，常常構(gòu)成酶的功能部位。

無規(guī)卷曲常出現(xiàn)在a-螺旋與a-螺旋、a-螺旋與β-折疊、β-折疊與β-折疊之間。它是形成蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)所必需的。二、蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)

（一）超二級結(jié)構(gòu)的概念指蛋白質(zhì)中相鄰的二級結(jié)構(gòu)單位(即單個-螺旋或-轉(zhuǎn)角)組合在一起，形成有規(guī)則的在空間上能辯認的二級結(jié)構(gòu)組合體?！锍壗Y(jié)構(gòu)在結(jié)構(gòu)層次上高于二級結(jié)構(gòu)，但沒有聚集成具有功能的結(jié)構(gòu)域。：由兩股或三股右手螺旋繚繞而成的左手螺旋：由兩股折疊片，中間加入螺旋而形成的片層結(jié)構(gòu)：由三條或更多的反平行式-鏈通過-轉(zhuǎn)角或其它的肽段連接而成的結(jié)構(gòu)（二）超二級結(jié)構(gòu)的基本形式超二級結(jié)構(gòu)類型βββααβαβ12345

指多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)或超二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上形成三級結(jié)構(gòu)的局部折疊區(qū)，它是相對獨立的緊密球狀實體，稱為結(jié)構(gòu)域（domain）。

酵母己糖激酶的三級結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域之間有一段柔性的肽鏈相連—鉸鏈區(qū)，使結(jié)構(gòu)域之間可以發(fā)生相對移動；結(jié)構(gòu)域承擔一定的生物學功能，幾個結(jié)構(gòu)域協(xié)同作用可體現(xiàn)出蛋白質(zhì)的總體功能；結(jié)構(gòu)域間的裂縫常為酶的活性部位，也是反應(yīng)物的出入口。三、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域α+β結(jié)構(gòu)域乳酸脫氫酶結(jié)構(gòu)域1α/β結(jié)構(gòu)域

丙酮酸激酶結(jié)構(gòu)域43-P-甘油醛脫氫酶結(jié)構(gòu)域2木瓜蛋白酶結(jié)構(gòu)域1木瓜蛋白酶結(jié)構(gòu)域2無規(guī)則卷曲+α-螺旋結(jié)構(gòu)域無規(guī)則卷曲+β-回折結(jié)構(gòu)域

三級結(jié)構(gòu)（tertiarystructure）：指的是多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)、超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域的基礎(chǔ)上，主鏈構(gòu)象和側(cè)鏈構(gòu)象相互作用，進一步盤曲折疊形成球狀分子結(jié)構(gòu)。四、蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)

（一）三級結(jié)構(gòu)的概念（二）球狀蛋白的三級的結(jié)構(gòu)特征含有多種二級結(jié)構(gòu)單元。分子表面往往有一個內(nèi)陷的空隙，它常常是蛋白質(zhì)的活性中心。

大多數(shù)非極性側(cè)鏈埋在分子內(nèi)部，形成疏水核；而極性側(cè)鏈在分子表面，形成親水面。

蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)具有明顯的折疊層次。

分子呈現(xiàn)球狀或橢圓狀。（三）維持三級結(jié)構(gòu)的作用力二硫鍵

——共價鍵

疏水作用非共價鍵（次級鍵）氫鍵離子鍵范德華力四級結(jié)構(gòu)（quaternarystructure）：由兩條或兩條以上具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈聚合而成、有特定三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)構(gòu)象。每條多肽鏈又稱為亞基(subunit)

。五、蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)

例如，血紅蛋白的四級結(jié)構(gòu)（一）四級結(jié)構(gòu)的概念（二）蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的特點1）有多個亞基2）穩(wěn)定性主要靠亞基間的疏水作用維持3）亞基單獨存在時無生物活性或活性很小，只有通過亞基相互聚合成四級結(jié)構(gòu)后，蛋白質(zhì)才具有完整的生物活性。4）亞基見具有協(xié)同性和別構(gòu)效應(yīng)。蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)

二級結(jié)構(gòu)超二級結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域三級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)六、蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系（一）肌紅蛋白與血紅蛋白的結(jié)構(gòu)Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)合，Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分數(shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。（二）血紅蛋白的構(gòu)象變化與結(jié)合氧肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線1.協(xié)同效應(yīng)(cooperativity)一個寡聚體蛋白質(zhì)的一個亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應(yīng)。如果是促進作用則稱為正協(xié)同效應(yīng)(positivecooperativity)如果是抑制作用則稱為負協(xié)同效應(yīng)

(negativecooperativity)O2血紅素與氧結(jié)合后，鐵原子半徑變小，就能進入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動。變構(gòu)效應(yīng)(allostericeffect)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化，稱為變構(gòu)效應(yīng)。2.波爾效應(yīng)（Bohr）1904年，ChristianBohr發(fā)現(xiàn)：增加CO2濃度、降低pH能顯著降低血紅蛋白與O2的結(jié)合。？生理意義：波爾效應(yīng)使血紅蛋白運輸O2的效率提高。2，3—二磷酸甘油酸（BPG）通過與血紅蛋白的兩個β亞基形成鹽鍵穩(wěn)定了血紅蛋白的脫氧態(tài)構(gòu)象，因而降低了血紅蛋白的氧親合力。3.BPG的別構(gòu)效應(yīng)（三）蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病蛋白質(zhì)構(gòu)象疾?。喝舻鞍踪|(zhì)的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導致疾病發(fā)生。蛋白質(zhì)構(gòu)象改變導致疾病的機理：有些蛋白質(zhì)錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變瘋牛病是由朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。正常的PrP富含α-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為β-折疊的PrPsc，從而致病。PrPcα-螺旋PrPscβ-折疊正常瘋牛病第七節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分離純化一、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)（一）蛋白質(zhì)的兩性電離蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。*蛋白質(zhì)的等電點(isoelectricpoint,pI)當?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時，蛋白質(zhì)解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點。在等電點時蛋白質(zhì)的溶解度最小，在電場中不移動。蛋白質(zhì)的等離子點（特征常數(shù)）：指在純水中（即沒有其它鹽類存在）蛋白質(zhì)的正離子數(shù)等于負離子數(shù)的pH值。因蛋白質(zhì)的等電點不是一成不變的，它隨溶劑性質(zhì)、離子強變等因素而改變。二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)由于蛋白質(zhì)分子量很大，在水溶液中形成1-100nm的顆粒，因而具有膠體溶液的特征（布郎運動、丁道爾現(xiàn)象、不能透過半透膜）。1.蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素①可溶性蛋白質(zhì)分子表面分布著大量極性氨基酸殘基，對水有很高的親和性，通過水合作用在蛋白質(zhì)顆粒表面形成水化層，其可防止分子互碰而聚集；②蛋白質(zhì)在非等電點狀態(tài)時帶同種電荷，在顆粒表面形成電荷層，同性電荷互斥，使分子不能聚集。+++++++帶正電荷的蛋白質(zhì)－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質(zhì)在等電點的蛋白質(zhì)水化層++++++++帶正電荷的蛋白質(zhì)－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸堿酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水作用

蛋白質(zhì)的聚沉蛋白質(zhì)膠體溶液沉淀作用示意圖

2.蛋白質(zhì)的沉淀作用

如果加入適當?shù)脑噭┦沟鞍踪|(zhì)分子處于等電點狀態(tài)或失去水化層（消除相同電荷，除去水膜），蛋白質(zhì)膠體溶液就不再穩(wěn)定并將產(chǎn)生沉淀。沉淀方法類別:①高濃度中性鹽（鹽析）②等電點沉淀③有機溶劑沉淀④重金屬鹽類沉淀⑤生物堿試劑和某些酸類沉淀⑥加熱變性沉淀

鹽析(saltprecipitation)是將高濃度硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面水化膜被破壞，導致蛋白質(zhì)沉淀。*分段鹽析：調(diào)節(jié)鹽濃度，可使混合蛋白質(zhì)溶液中的幾種蛋白質(zhì)分段析出。例如：血清球蛋白（50%(NH4)2SO4飽和度），清蛋白（飽和(NH4)2SO4)。3.沉淀類型A.可逆沉淀

在發(fā)生沉淀反應(yīng)時，蛋白質(zhì)雖已沉淀析出，但它的分子內(nèi)部、空間結(jié)構(gòu)并未發(fā)生顯著變化，基本上保持原有的性質(zhì)，沉淀因素除去后，能再溶于水溶液中。這種作用稱為可逆沉淀反應(yīng)。如大多數(shù)蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇（或丙酮）短時間作用于蛋白質(zhì)以及利用等電點的沉淀，提純蛋白質(zhì)時，常利用此類反應(yīng)。B.不可逆沉淀/變性沉淀在發(fā)生沉淀反應(yīng)時，蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)、空間構(gòu)象遭到破壞，失去原來的天然性質(zhì)，這時蛋白質(zhì)已發(fā)生變性。這種變性蛋白質(zhì)的沉淀不能再溶解于原來溶劑或水溶液中的作用稱為不可逆沉淀反應(yīng)或變性沉淀。重金屬鹽、生物堿試劑，強酸、強堿、加熱、震蕩、超聲波、有機溶劑等都能使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆沉淀反應(yīng)。

蛋白質(zhì)變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在而并不析出，例如：在強酸堿中變性的蛋白質(zhì)在強酸堿溶液中仍存在電荷效應(yīng)，所以不表現(xiàn)為沉淀現(xiàn)象。相對地，沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。*蛋白質(zhì)的凝固作用(proteincoagulation)蛋白質(zhì)變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。

（三）蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性蛋白質(zhì)在某些物理和化學因素作用下，其特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的空間結(jié)構(gòu)，從而導致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。1.蛋白質(zhì)變性的概念2.變性的本質(zhì)——破壞非共價鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。3.變性的因素

加熱、有機溶劑、強酸、強堿、表面活性劑（如十二烷基硫酸鈉即SDS）、還原性試劑（尿素、鹽酸胍）、紫外線、機械力等。

4.變性蛋白質(zhì)性質(zhì)的改變

①生物學功能的喪失（主要標志）；

②分子形狀改變，肽鏈松散，反應(yīng)基團增加，易被酶消化；

③疏水基團外露，水化層被破壞，溶解度降低，易形成沉淀析出，粘性增加，紫外吸收改變等；

④喪失結(jié)晶能力。應(yīng)用舉例臨床醫(yī)學上，變性因素常被應(yīng)用來消毒及滅菌。此外,防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。

5.蛋白質(zhì)的復(fù)性若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，可緩慢地重新自發(fā)折疊成原來的構(gòu)象，恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性(renaturation)，這種變性也稱為可逆變性。可逆變性作用蛋白質(zhì)復(fù)性（尿素、β-巰基乙醇）（去除尿素、β-巰基乙醇）非折疊狀態(tài)，無活性天然狀態(tài)，有催化活性（四）蛋白質(zhì)的分子大小蛋白質(zhì)是分子量很大的生物分子，相對分子質(zhì)量大于6000，最高可達40000000（煙草花葉病毒）。目前常用的方法包括：擴散系數(shù)、沉降超離心、凝膠過濾、滲透壓、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。1.根據(jù)化學成分測定最小相對分子質(zhì)量

利用化學分析定量測定蛋白質(zhì)中某一特殊元素的含量，并假定蛋白質(zhì)分子中含1個這種元素，即可測算最低Mr。如：用化學分析法測定血紅蛋白質(zhì)中含F(xiàn)e0.34％，則最低Mr=55.84×100/0.34=16700；用其它方法測定，其實際Mr為16700的4倍，由此可知，血紅蛋白含有4個Fe的原子，而不是1個Fe。2.

超離心法在60000～80000r/min的高速離心力作用下，蛋白質(zhì)分子會沿旋轉(zhuǎn)中心向外周方向移動。超離心法最為準確，但需昂貴的超速離心機。用光學方法測定界面移動的速度即為蛋白質(zhì)的離心沉降速度。蛋白質(zhì)的沉降速度與分子大小和形狀有關(guān)，因為沉降系數(shù)S大體上和分子量成正比關(guān)系，故可應(yīng)用超速離心法測定蛋白質(zhì)分子量，但對分子形狀高度不對稱的大多數(shù)纖維狀蛋白質(zhì)不適用。離心機結(jié)構(gòu)示意圖轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)頭腔沉降樣品驅(qū)動馬達真空冷凍沉降系數(shù)是溶質(zhì)顆粒在單位離心場中的沉降速度，用S表示。一個S單位，為1×10-13秒。相對分子質(zhì)量越大，S值越大。蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)：1～200S。超速離心法既可以用來測定蛋白質(zhì)的分子量也可以用作分離純化蛋白質(zhì)。

s=————vω2x

v=沉降速度（dx/dt）ω=離心機轉(zhuǎn)子角速度（弧度/s）x=蛋白質(zhì)界面中點與轉(zhuǎn)子中心的距離（cm）由沉降系數(shù)S可根據(jù)斯維得貝格〔Svedberg〕方程計算蛋白質(zhì)分子的相對分子質(zhì)量：M=RST/D〔1－iρ〕R：氣體常數(shù)T：絕對溫度D：擴散系數(shù)ρ：溶劑的密度3.凝膠過濾法凝膠過濾所用介質(zhì)為凝膠珠，其內(nèi)部為多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。一定型號的凝膠網(wǎng)孔大小一定，只允許相應(yīng)大小的分子進入凝膠顆粒內(nèi)部，大分子則被排阻在外。洗脫時大分子隨洗脫液從顆粒間隙流下來，洗脫液體積?。恍》肿釉陬w粒網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中穿來穿去，歷程長，后洗脫下來，洗脫體積大。測定蛋白質(zhì)分子量一般用葡聚糖，商品名：Sephadex洗脫體積：自加入樣品開始到該組分的洗脫峰峰頂（即收集液中該組分濃度最大時）出現(xiàn)時所流出的洗脫液體積。測定樣品蛋白質(zhì)分子量的方法：

①測得幾種標準蛋白質(zhì)的洗脫體積〔Ve〕；

②以相對分子質(zhì)量對數(shù)（logM）對Ve作圖，得標準曲線；

③再測出未知樣品洗脫體積〔Ve〕；

④從標準曲線上可查出樣品蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量。4.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法聚丙烯酰胺凝膠：單體—丙烯酰胺（acrylamide,簡稱Acr）和交聯(lián)劑—N,N-甲叉雙丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide,簡稱Bis）在加速劑和催化劑的作用下聚合而成的高分子物質(zhì)，具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和分子篩性質(zhì)。以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis,簡稱PAGE）。SDS:十二烷基硫酸鈉，變性劑普通蛋白質(zhì)電泳的泳動速率取決于荷質(zhì)比（凈電荷、大小、形狀）★此方法只能測得亞基肽鏈的相對分子質(zhì)量方法：①用SDS和巰基乙醇（打開二硫鍵）處理蛋白質(zhì)變性（肽鏈伸展）并與SDS結(jié)合，形成SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，使得不同蛋白質(zhì)分子均帶負電（SDS帶負電），且荷質(zhì)比相同（蛋白質(zhì)分子大，結(jié)合SDS多；分子小，結(jié)合SDS少）；不同蛋白質(zhì)分子具有相似的構(gòu)象。②用幾種標準蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的對數(shù)值對它們的遷移率作圖③測出待測樣品的遷移率④從標準曲線上查出樣品的相對分子質(zhì)量二、蛋白質(zhì)的分離純化蛋白質(zhì)分離純化的一般原則提純的目標：盡量提高蛋白質(zhì)的純度或比活性，設(shè)法除去變性的和不需要的蛋白質(zhì)，盡可能提高蛋白質(zhì)的產(chǎn)量。根據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)加以選擇，如分子大小，溶解度、電荷、吸附性質(zhì)及生物親和力等。一般程序：

1、從組織細胞中溶解放出蛋白質(zhì)，并保持天然狀態(tài)，常用低溫