小兒腹瀉病毒病毒檢測及臨床分析

小兒腹瀉病毒病毒檢測及臨床分析

嬰兒腹瀉是一種5歲以下兒童常見的疾病，主要由大便次數(shù)增加和糞便狀態(tài)變化引起。其發(fā)病率僅次于呼吸道感染,居第2位。據(jù)報(bào)道世界每年大約有30億至50億人次的5歲以下的小兒患腹瀉,嚴(yán)重危害兒童的身體健康和生命安全。引起小兒腹瀉的常見病原體中病毒感染占85%~90%,細(xì)菌及其他感染占0%~15%。因此,病毒性感染越來越受到臨床工作者的重視。小兒腹瀉的常見病原體主要有腺病毒(Adenovirus,ADV)、輪狀病毒(Rotavirus,RV)、諾如病毒(Norovirus,NV)、人雙?？刹《?HumanParechovirus,HPeVs)、札如病毒(Sapovirus,SV)、腸道病毒(Enterovirus,EV)、星狀病毒(Astrovirus,AstV)。為了解本地區(qū)小兒腹瀉病毒性感染的情況,尋求其流行病學(xué)特征,同時(shí)為臨床上治療小兒腹瀉提供臨床依據(jù),進(jìn)行了本研究?，F(xiàn)報(bào)告如下。1數(shù)據(jù)和方法1.1糞便標(biāo)本收集2012年1月至2014年1月涉縣婦幼保健院收集腹瀉患兒糞便標(biāo)本350例,男218例,女132例,男女比例為1.65∶1,年齡10天至5歲,中位年齡3歲。1.2多重pcr檢測標(biāo)本經(jīng)過生理鹽水稀釋后冰箱保存待檢。采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法,ADV、RV、NV、HPeVs、SV、EV、AstV逆轉(zhuǎn)錄引物由中國科學(xué)院上海生物細(xì)胞研究所提供。應(yīng)用TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的病毒RNA核酸反轉(zhuǎn)錄成cDNA,反應(yīng)條件為:30℃10分鐘,42℃反轉(zhuǎn)錄45分鐘,95℃滅活反轉(zhuǎn)錄酶5分鐘,然后迅速冰上放置。以合成的cDNA為模板(ADV為DNA),進(jìn)行多重PCR檢測。PCR反應(yīng)體系如下:10×TaqBuffer2.5μl,dNTP(各2.5mol/L)2.0μl,MgCl222.0μl(25mmol/L),TaqDNA聚合酶(5U/μl)0.125μl,病毒特異性引物(各33μmol/L)0.2μl,模板2.5μl,補(bǔ)充無菌雙蒸水至25μl。PCR擴(kuò)增條件為:94℃預(yù)變性5分鐘;94℃變性30秒,55℃退火30秒,72℃延伸1分鐘,35個(gè)擴(kuò)增循環(huán);最后以72℃終延伸7分鐘,4℃下終止反應(yīng)。應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物。2結(jié)果2.1不同性別新生兒、三期新生兒、三期新生兒、三期新生兒、三期97.2.3慢性充放電藥檢出情況本研究收集的350例腹瀉糞便標(biāo)本中,檢出病毒陽性標(biāo)本288例,占所有標(biāo)本總數(shù)的82.3%(288/350),其中ADV檢出15例,占總標(biāo)本4.3%,RV檢查87例(24.9%),NV檢出66例(18.9%),HpeVS檢出45例(12.9%),SV檢出35例(10.0%),EV檢出20例(5.7%),AstV檢出20例(5.7%);七種病毒性病原在性別間檢出的情況:男性患兒占62.3%(126/201),女性占55.0%(82/149),男女比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.081,P>0.05);七種病毒在各年齡組綜合感染情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.262,P>0.05),其中ADV、EV感染主要集中在>6~12個(gè)月的患兒,RV、HPeVS、SV及AstV在各年齡組間的感染情況差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。2.2不同流行季節(jié)的rv致病性腹瀉發(fā)生情況從七種病毒感染的季節(jié)分布來看,各月間的感染情況差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=61.281,P<0.05),除AstV感染高峰在1月和12月外,其他病毒主要感染時(shí)間集中在5~10月。ADV感染高峰5~7月,檢出比例為60.0%(9/15),流行季節(jié)為夏秋季節(jié);RV檢出高峰時(shí)間在6~10月,5個(gè)月的陽性數(shù)占總陽性數(shù)的78.2%(68/87),與其他月份檢出率相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.604,P<0.05),可見RV病毒性腹瀉的流行季節(jié)主要為夏秋季節(jié);NV檢出率比較高的月份是6~8月份,其檢出率為50.0%(33/66),與其他月份比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.888,P>0.05);HpeVS感染檢出比較高的月份是5~8月份,檢出率為60.0%(27/45),與其他月份比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.900,P<0.05),流行季節(jié)主要在夏季;SV感染呈現(xiàn)無規(guī)律狀態(tài),無季節(jié)性;EV感染高峰在7~9月份,與其他月份相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;AstV檢出率高的月份為12月和1、2月份,檢出率為75.0%(15/20),與其他月份比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=83.118,P<0.05),提示流行季節(jié)在冬季?？傮w來說,七種病毒導(dǎo)致的小兒病毒性腹瀉多發(fā)在夏秋和冬季,少發(fā)于春季。見表2。2.3單一感染型感染的臨床應(yīng)用結(jié)果350例病毒檢查陽性的患兒中,腹瀉比例為100.0%(350/350),26.0%(91/350)伴有發(fā)熱癥狀,41.1%(144/350)伴有嘔吐癥狀。單一病毒感染的發(fā)熱率18.3%(40/218)低于混合感染45.7%(33/70),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);混合感染嘔吐和發(fā)熱比例32.5%(112/350)高于單一感染比例11.4%(40/350),差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3腹瀉患兒rv、nv和hpevs感染情況小兒病毒性腹瀉發(fā)病率高,嚴(yán)重威脅著兒童的生命安全和身體健康。臨床表現(xiàn)多為發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀,排水樣便或者稀便,有時(shí)候還會(huì)出現(xiàn)全身不適等癥狀,嚴(yán)重者還可以引起抽搐。該病具有傳染性,易暴發(fā)流行。已有研究證明RV、SV、AstV和ADV是嬰幼兒病毒性腹瀉的主要病原體,而且RV占的比例最大。本研究中,350份糞便標(biāo)本檢出288份7種常見的胃腸道病毒,陽性率為82.3%(288/350),RV、NV、HPeVS、SV是主要的病原體,其中RV是所占比例最大。RV根據(jù)抗原性的不同分為7個(gè)組(A~G),在全世界各地流行的RV-A是小兒腹瀉的主要原因,研究表明RV-A是導(dǎo)致嬰幼兒發(fā)生嚴(yán)重腹瀉的最重要的病原。美國疾病預(yù)防控制中心報(bào)告每年全世界有1.4億腹瀉患兒為RV感染。本研究RV檢出87例,占送檢標(biāo)本24.9%,是檢出率最多的病原,與國內(nèi)外報(bào)道一致,是本地區(qū)小兒腹瀉的最主要病原體。有研究表明,NV也是引起幼兒急性腹瀉的重要病原體。本研究顯示本地區(qū)的腹瀉患兒中NV的比例(18.9%)與杭州(18.4%)、廣州(17.9%)等地區(qū)相近。NV主要通過水源、食物及人與人的直接接觸傳播。HPeVs在兒童腸道中感染引起腹瀉,HPeVs感染的血清流行病學(xué)調(diào)查提示,嬰幼兒時(shí)期(尤其是小于2歲的患兒)已經(jīng)開始感染HPeVs,而學(xué)齡期兒童血清檢出率更高。本研究HpeVS檢出45例,檢出率12.9%(45/350),從年齡分布上分析,HPeVs陽性患兒年齡2歲以內(nèi)比例最高,這與國外報(bào)道的HPeVs感染以2歲以內(nèi)小孩為主相一致。SV陽性檢出率為10.0%(35/350),但是SV引起的腹瀉比NV引起的腹瀉癥狀輕微甚至無癥狀。ADV、EV和AstV主要以散發(fā)病例為主,引起腹瀉的臨床癥狀相對(duì)較輕,主要發(fā)生在免疫力弱的幼兒。本研究ADV(4.29%)、EV(5.71%)、AstV(5.71%)三種病毒感染率比較低,與有關(guān)結(jié)果基本一致。近年來,許多研究報(bào)道了多種病毒混合感染的現(xiàn)象。有報(bào)道認(rèn)為混合感染以Aich病毒合并其他病毒為主,其次為RV合并其他病毒感染。多種病毒同時(shí)感染是否會(huì)加重疾病的嚴(yán)重程度和增大治療難度,目前尚未定論。本研究350例病毒檢查陽性的患兒中,腹瀉比例為100.0%(350/350),26.0%(91/350)伴有發(fā)熱癥狀,41.1%(144/350)伴有嘔吐癥狀。單一病毒感染的發(fā)熱率(18.3%)低于混合感染(45.6%)(P<0.05);混合感染嘔吐和發(fā)熱比例(32.5%)高于單一感染比例(11.