氣相色譜-質(zhì)譜方法鑒別油脂中的37種脂肪酸

氣相色譜-質(zhì)譜方法鑒別油脂中的37種脂肪酸

1脂肪酸組成分析方法油是由脂肪酸和甘油組成的。就營養(yǎng)而言，油對(duì)人體的生理功能主要體現(xiàn)在不同的脂肪酸上。不同種類的植物油脂所含脂肪酸組成和含量不一樣,植物油脂與動(dòng)物油脂所含脂肪酸組成和含量也不一樣。地溝油是常見的混合油脂,大多是動(dòng)植物油脂的混合。動(dòng)物油脂的特征脂肪酸是低碳數(shù)飽和脂肪酸的含量較高,而植物油脂所含脂肪酸種類比動(dòng)物油脂少很多,很少含有奇數(shù)、支鏈或低于16個(gè)碳原子的飽和脂肪酸。通過分析油脂樣品中低碳數(shù)飽和脂肪酸的含量水平,理論上可以區(qū)分出地溝油與植物油。在前期的研究中,我們首次將脂肪酸組成分析方法用于地溝油的判別。應(yīng)用氣相色譜-火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)方法,對(duì)50多種市售植物油的37種脂肪酸組成進(jìn)行分析,總結(jié)出了特定油脂的脂肪酸組成特征,建立了特定油脂的脂肪酸指紋譜庫,可以進(jìn)行油脂類別歸屬的判斷;同時(shí)對(duì)20多種地溝油的脂肪酸組成進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)了地溝油與植物油的差異性脂肪酸組成,可以用于地溝油的判別分析。應(yīng)用該鑒別地溝油方法參加兩次衛(wèi)生部組織的盲樣考核,陰性準(zhǔn)確率分別為89%和60%,陽性準(zhǔn)確率分別為93%和91%。為成功鑒別地溝油與合格動(dòng)、植物油脂提供了依據(jù)。本研究針對(duì)上次陰性準(zhǔn)確率較低的問題,對(duì)分析方法進(jìn)行了改進(jìn)和優(yōu)化。應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)法,提高了方法的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度;通過對(duì)100多種市售植物油和20多種地溝油的脂肪酸組成的分析,總結(jié)出了新的地溝油判別依據(jù);應(yīng)用該判別依據(jù),對(duì)衛(wèi)生部?jī)纱蚊舆M(jìn)行判定,陽性準(zhǔn)確率分別為100%和95%,陰性準(zhǔn)確率分別為100%和90%,大大提高了方法的適用性。2材料和方法2.1動(dòng)物油脂的種類植物油均為在北京各大超市購買,包括花生油、大豆油、玉米油、橄欖油、食用調(diào)和油、葵花籽油等;動(dòng)物油為從農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購買動(dòng)物油脂;地溝油均為公安部門查封的地溝油廠家生產(chǎn)或已經(jīng)勾兌好準(zhǔn)備銷售的精煉地溝油,由衛(wèi)生部提供。2.1.1脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液十一碳酸甘油三酯(純度98%)、37種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度10mg/mL):sigma公司;正己烷、丙酮為色譜純,三氟化硼、甲醇為分析純。2.1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液為11.00mg準(zhǔn)確稱取0.1g十一碳酸甘油三酯,加入80mL甲醇混合直至溶解,移入100mL容量瓶中甲醇溶液定容,在冰箱中可冷藏保存1個(gè)月。2.1.3標(biāo)準(zhǔn)脂肪酸溶液37將脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液從安培瓶中完全轉(zhuǎn)移到10mL容量瓶中,用二氯甲烷定容,在冰箱中冷藏可保存1周。2.1.4色譜柱及色譜水浴6890/5975氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀,安捷倫公司;色譜柱:毛細(xì)管色譜柱(DB-23,60m×0.25mm×0.25μm,Agilent);恒溫水浴:(40℃-100℃)+1℃,東方電工;分析天平:感量0.1mg,梅特勒-托利多。2.2方法2.2.1氟化硼甲醇溶液的制備稱取樣品0.1g于燒瓶中,加入2%氫氧化鈉甲醇溶液8mL,連接回流冷凝器在80℃水浴上回流,直至油滴消失;從回流冷凝器上端加入15%三氟化硼甲醇溶液7mL,繼續(xù)回流2min;用去離子水沖洗回流冷凝器,繼續(xù)加熱1min;從水浴上取下燒瓶,迅速冷卻至室溫,準(zhǔn)確加入10mL正庚烷,振搖2min,吸取上層正庚烷溶液,過無水硫酸鈉,過膜,上機(jī)待測(cè)。2.2.2儀器和測(cè)定條件氣相色譜分析條件:載氣:氦氣;載氣流量:1.0mL/min;進(jìn)樣口溫度:225℃;色譜柱溫:100℃(4.0min)3℃/min240℃(15min);進(jìn)樣方式:不分流;進(jìn)樣體積:1.0μL。質(zhì)譜條件:離子源溫度:230℃;四極桿溫度:150℃;接口溫度:270℃;電子能量:70eV;定性分析為全掃描方式,質(zhì)量范圍為35-500amu,掃描時(shí)間為1s/scan;定量分析為選擇離子掃描(SIM),37種脂肪酸甲酯的定性定量離子見表表1。3結(jié)果與討論3.1分析條件的優(yōu)化3.1.1脂肪酸同系物選擇十一碳烷酸(C11:0)甲酯為內(nèi)標(biāo)物,因其與37種脂肪酸為同系物,物理和化學(xué)性質(zhì)接近;同時(shí),C11:0在植物油本底中基本不含,可以最大限度的減少因樣品干擾造成的分析誤差,提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。3.1.2與db-fms柱的對(duì)比本研究所采用毛細(xì)管柱是Agilent公司DB-23柱,是用于脂肪酸測(cè)定的專用柱,分離效果好,37種脂肪酸甲酯出峰出峰時(shí)間穩(wěn)定,保證測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性,明顯優(yōu)于DB-5MS柱的分離效果。采用選擇離子掃描方式,排除了樣品基質(zhì)對(duì)37種脂肪酸的干擾,與上一次研究中的火焰離子化檢測(cè)器(FID)相比較,提高了方法的靈敏度,降低了37種目標(biāo)物的檢出限。尤其對(duì)用于判定地溝油的低含量脂肪酸(如月桂酸C12:0和肉豆蔻酸C14:0)的測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確和靈敏,有利于制定更準(zhǔn)確的地溝油判定依據(jù)。3.2脂肪酸含量的測(cè)定以花生油為例,做8個(gè)平行樣品處理,檢測(cè)方法一致,8次重復(fù)性檢測(cè),以內(nèi)標(biāo)法定量分析37種脂肪酸的含量,計(jì)算其變異系數(shù)。結(jié)果顯示,37種脂肪酸的變異系數(shù)均低于15%。證明本實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性很好,數(shù)據(jù)穩(wěn)定,各組數(shù)據(jù)間的偏差小。3.3檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度采用改進(jìn)的氣相色譜-質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)檢測(cè)法,提高了對(duì)低含量脂肪酸的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度。對(duì)100多種市售植物油和20多種地溝油的37種脂肪酸含量進(jìn)行了分析,總結(jié)出根據(jù)37種脂肪酸組成判定地溝油的判定依據(jù),見表2。3.4布署機(jī)關(guān)驗(yàn)證試驗(yàn)根據(jù)表2的判定依據(jù),對(duì)兩次衛(wèi)生部盲樣考核樣品進(jìn)行判別分析,第一次盲樣考核準(zhǔn)確率100%,第二次盲樣考核準(zhǔn)確率95%(32個(gè)中有2個(gè)精煉地溝油不好判定)。但均沒有“假陽性”。4地溝油的判別依據(jù)本研究針對(duì)上次陰性準(zhǔn)確率較低的問題,對(duì)分析方法進(jìn)行了改進(jìn)和優(yōu)化。應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)法,提高了方法的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度;通過對(duì)100多種市售植物油和20多種地溝油的37種脂肪酸組成進(jìn)行分析,總結(jié)出了根據(jù)37種脂肪酸組成判定地溝油的判定依據(jù)。應(yīng)用該判別依據(jù),對(duì)衛(wèi)生部?jī)纱蚊舆M(jìn)行判