中醫(yī)不同治法對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度和肌鈣蛋白的影響

中醫(yī)不同治法對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度和肌鈣蛋白的影響

骨松收緊是一種以減少骨頭數(shù)量、骨的微觀結(jié)構(gòu)為特征的。骨的脆弱增加了，容易發(fā)生全身骨折。肌肉作為骨骼最為鄰近的組織之一,可以通過增加肌肉的力量,加強(qiáng)骨形成和肌肉對骨骼的支持力量,進(jìn)而減少骨質(zhì)疏松癥患者骨折的發(fā)生。本實驗通過比較觀察補(bǔ)腎、健脾、活血法對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度、骨骼肌肌鈣蛋白變化的影響,探討中醫(yī)防治骨質(zhì)疏松癥的作用機(jī)制。1材料和方法1.1性別體重、體重SPF級Wistar大鼠120只,雌雄各半,雌性體重(190±10)g,雄性體重(240±10)g,3月齡。由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供,動物合格證號:SCXK(滬)2008-0016。1.2主試劑和設(shè)備1.2.1主試劑肌鈣蛋白試劑盒,由美國ADL公司提供,生產(chǎn)批號為110371。1.2.2儀器微孔板酶標(biāo)儀(型號為550,美國伯樂公司);XR-26型雙能X線骨密度儀(美國,NORLAND)。1.3北京漢典制藥有限公司補(bǔ)腎中藥由淫羊藿、活性馬鹿茸、牡蠣組成;健脾中藥為補(bǔ)中益氣顆粒,由北京漢典制藥有限公司提供,生產(chǎn)批號為090101;活血中藥為血府逐瘀膠囊,由天津宏仁堂藥業(yè)有限公司提供,生產(chǎn)批號為103015;陽性對照藥為骨疏康顆粒,由遼寧康辰藥業(yè)有限公司提供,生產(chǎn)批號為080729。1.4分組飼養(yǎng),分籠飼養(yǎng)按同性別大鼠體重分層,隨機(jī)數(shù)字表分為6組,每個性別每組20只,雌雄分籠飼養(yǎng),每組分為A、B兩籠,每籠10只。即正常對照組、模型對照組、補(bǔ)腎中藥組、健脾中藥組、活血化瘀中藥組和陽性中藥對照組(骨疏康中藥組)。1.5模型和藥物1.5.1模型設(shè)計用地塞米松肌注,劑量為2.5mg/kg體重,左后肢臀部肌肉注射,每周2次,連續(xù)9周。正常對照組大鼠常規(guī)喂養(yǎng)。1.5.2兩組給藥劑量及給藥劑量適應(yīng)飼養(yǎng)1周后開始造模、給藥、灌胃,每日1次。A、B組給生理鹽水2mL;C組、D組、E組、F組用藥量按人體公斤體重(g/kg)的6.3倍計算,(成人體重按60kg計算),容積為1mL/100g體重,補(bǔ)腎組給藥量為鹿茸0.8g·kg-1·d-1,牡蠣0.263g·kg-1·d-1,淫羊藿0.0756g·kg-1·d-1;健脾組給藥量為0.945g·kg-1·d-1;活血組給藥量為0.504g·kg-1·d-1;陽性對照組給藥量為2.1g·kg-1·d-1。實驗期間,各組大鼠每周稱重一次,并根據(jù)體重變化調(diào)整給藥劑量。1.6離體小鼠msh的檢測實驗大鼠在最后一次灌胃后,禁食24h,經(jīng)10%水合氯醛注射麻醉(0.3mL/100g體重),麻醉后用碘伏消毒手術(shù)部位,剪開腹腔后,立即取出大鼠右后肢腓腸肌的白肌部分和右后肢的全股骨。標(biāo)本處理過程:①將肌組織放入約5倍于組織體積的量的MSH緩沖液中清洗,擦干、稱重后,用剪刀剪碎置入勻漿瓶中;將5mL/g組織加入勻漿液中,并加入蛋白酶抑制劑5μL/mg(按比例增減加入量);以500r/min勻漿充分;將勻漿后的組織放入離心管中離心,2000g,10min;除去脂肪層和上清,離心5000g,15min;除上清,提取線粒體放入1mLEP管中。具體檢測步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。②將大鼠全股骨用生理鹽水沖洗后,用生理鹽水浸漬的醫(yī)用紗布包裹,再用預(yù)先準(zhǔn)備的錫紙包裹。應(yīng)用雙能X線骨密度儀對大鼠離體股骨上1/3骨密度進(jìn)行檢測。應(yīng)用儀器附帶的“TheSmallSubjectScoutScan”小動物軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。1.7均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差統(tǒng)計析采用SPSS10.0軟件處理所得數(shù)據(jù),選用ONE-WayANOVA進(jìn)行統(tǒng)計析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)(xˉ±s)表示。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.01表示差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。2各組大鼠骨密度比較大鼠離體股骨上1/3骨密度檢測結(jié)果顯示:與正常組比較,?？战M大鼠離體股骨上1/3骨密度顯著降低(P<0.01);與?？战M比較,各治療組大鼠股骨上1/3骨密度均有不同程度的升高,其中以補(bǔ)腎中藥組升高程度最為顯著(P<0.01),其余各治療組骨密度較?？战M升高程度比較無統(tǒng)計學(xué)意義。大鼠骨骼肌肌鈣蛋白檢測結(jié)果顯示:與正常組比較,其他各組大鼠骨骼肌的肌鈣蛋白顯著降低(P<0.01);與?？战M比較,補(bǔ)腎組大鼠骨骼肌的肌鈣蛋白均明顯升高(P<0.01);補(bǔ)腎組大鼠骨骼肌的肌鈣蛋白升高最為明顯,明顯高于其他各組,具有顯著性差異(P<0.01);活血組大鼠骨骼肌的肌鈣蛋白升高程度最低,與正常組、?？战M、補(bǔ)腎組比較具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),與健脾組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);健脾組和骨疏康組升高程度也比較明顯,但二者比較無統(tǒng)計學(xué)意義。3糖激素對肌鈣蛋白的影響根據(jù)骨質(zhì)疏松癥的癥狀、病因病機(jī),本病屬于中醫(yī)學(xué)“骨痹”、“骨痿”、“腎虛腰痛”等范疇。腎虛是骨質(zhì)疏松癥的根本病機(jī),因腎精乏源,骨骼失養(yǎng),骨骼脆弱無力可致骨質(zhì)疏松癥,因而該病多發(fā)于老年人。脾為后天之本,腎精依賴脾精的滋養(yǎng)才源源不斷得以補(bǔ)充。若脾失健運(yùn),水谷精微不足,必使腎精乏源或腎精虧虛,骨骼失養(yǎng),則骨骼脆弱無力而致骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生,所以脾虛也是本病的重要病機(jī)。若肌肉瘦弱痿軟無力,從而導(dǎo)致肌肉與骨的協(xié)調(diào)性下降而發(fā)為骨痿,即中醫(yī)所說的“骨不濡則肉不能著也,骨肉不相親則肉軟卻”、“骨枯而髓減”。肌鈣蛋白是橫紋肌收縮的重要調(diào)節(jié)蛋白,存在于骨骼肌和心肌中,由3種亞基構(gòu)成,分別是肌鈣蛋白C、肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T。3種亞基形成復(fù)合物,在肌肉收縮和舒張過程中起到重要調(diào)節(jié)作用。每種亞基成分都有其獨特的功能,鈣結(jié)合亞單位肌鈣蛋C,與鈣離子結(jié)合活化ATP酶,引起肌肉肌球蛋白收縮,調(diào)節(jié)收縮過程;原肌球蛋白結(jié)合亞單位肌鈣蛋白T,將肌鈣蛋白復(fù)合體連接到肌動蛋白和原肌球蛋白分子上,對肌原纖維收縮起調(diào)控作用;肌動球蛋白-ATP酶抑制亞單位肌鈣蛋I,抑制肌動蛋白-肌凝蛋白互動的ATP酶活性,抑制肌球蛋白與肌動蛋白結(jié)合,阻止肌肉收縮。因此肌鈣蛋白在臨床中多用為骨骼肌損傷的特本實驗通過比較補(bǔ)腎、健脾、活血法對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度的影響,發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎組可以異性標(biāo)志物。明顯提高骨質(zhì)疏松癥大鼠的骨密度,與?？战M比較有顯著性差異,而與正常組比較無顯著性差異,說明補(bǔ)腎方法是治療腎虛骨質(zhì)疏松癥的根本方法。比較補(bǔ)腎、健脾、活血法對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥大鼠肌鈣蛋白濃度的影響,發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎組可以明顯提高骨質(zhì)疏松癥大鼠肌鈣蛋白的濃度,提示補(bǔ)腎方法可以通過提高骨質(zhì)疏松癥大鼠骨骼肌的肌鈣蛋白的濃度,提高肌肉組織的能量代謝。腎精充足,腎氣旺盛,以助脾主運(yùn)化而主四