水質(zhì) 細菌總數(shù)測定作業(yè)指導書

文件編號：WJES/QZ-0017-2023常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導書名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導書第文件編號：WJES/QZ-0017-2023常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導書名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導書第1頁共5頁11含義及執(zhí)行標準含義1mL3724小時后，所生長細菌菌落的總數(shù)。方法原理單獨個體、成雙成對、鏈狀、成簇等形式存在，而且沒有任何單獨一種培育基或一套物理、正存在的活細菌的總數(shù)。水環(huán)境質(zhì)量標準表1-1 細菌總數(shù)地下水質(zhì)量分類指標〔GB/T14848-93〕類別類別Ⅰ類Ⅱ類Ⅲ類Ⅳ類Ⅴ類標準值〔個/mL〕≤100≤100≤100≤1000＞1000表1-2 細菌總數(shù)生活飲用水衛(wèi)生標準〔GB5749-2023〕類別類別飲 用 水農(nóng)村小型集中式供水和分散式供水標準值〔個/mL〕≤100≤500分析方法 方法名稱、方法來源和適用范圍方法名稱：平板計數(shù)法(第四版)國家環(huán)保總局2023年第五篇其次章四方法適用范圍：此法主要作為判定飲用水、水源水、地表水等污染程度的標志。儀器高壓蒸汽滅菌器電熱枯燥箱恒溫培育箱冰箱解剖鏡。采樣瓶、三角燒瓶、試管、平皿〔直徑9c、刻度吸管等器皿12℃20mi〕高壓文件編號：WJES/QZ-0017-2023常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導書名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導書第文件編號：WJES/QZ-0017-2023常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導書名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導書第2頁共5頁22蒸汽滅菌后于電熱枯燥箱中烘干。培育基養(yǎng)分瓊脂培育基：市售養(yǎng)分瓊脂培育基，按說明配制，裝于三角燒瓶中，經(jīng)121℃高15min，經(jīng)無菌性檢驗和標準菌株檢驗后，貯存于暗處備用。分析步驟選擇稀釋度稀釋度要選擇適宜，以期在平皿上的菌落總數(shù)介于30～300之間。大多數(shù)飲用水水樣，未經(jīng)稀釋直接接種1mL，所得的菌落總數(shù)可適于計數(shù)。水樣的稀釋方法20～25次，使可能存在的細菌凝團成分散狀。1mL9mL滅菌水的試管中，混勻1：1001：1000、1：10000稀釋液〔稀釋倍數(shù)按水樣污濁程度而定。留意：吸取不同濃度的稀釋液時，必需更換吸管。操作方法1mL2～3個適宜濃度的稀釋水樣1mL15mL45℃左右的養(yǎng)分瓊脂培育基，并馬上旋搖平皿，使水樣與培育基充分混勻。每個水樣應(yīng)傾注兩個平皿。②待瓊脂冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面對上，置于37℃恒溫箱內(nèi)培育24h，進展菌落計數(shù)。菌落計數(shù)培育之后，馬上進展平皿菌落計數(shù)。假設(shè)計數(shù)必需暫緩進展，平皿需存放于5～10℃24h。但是不行以使這種做法成為常規(guī)的操作方式。作平皿菌落計數(shù)時，可用解剖鏡檢查，以防遺漏，在登記各平皿的菌落數(shù)后，應(yīng)求出皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，則可將此半皿計數(shù)后乘以2代表全皿菌落數(shù)，培育基或其他材料染有雜菌，以致平皿無法計數(shù)，則應(yīng)報告“試驗事故對那些看來相像，距離相近但是卻不相觸的菌落，只要它們之間的距離不小于最小菌落的直徑，便應(yīng)一一予以計數(shù)。那些嚴密接觸而外觀〔例如形態(tài)或顏色〕相異的菌落，也應(yīng)當一一予以計數(shù)。計算細菌總數(shù)是以每個平皿菌落的總數(shù)或平均〔例如同一稀釋度兩個重復平皿的平均數(shù)〕乘以稀釋倍數(shù)而得來的。各種不同狀況的計算方法如下：文件編號：WJES/QZ-0017-2023常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導書名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導書第文件編號：WJES/QZ-0017-2023常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導書名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導書第3頁共5頁33①首先選擇平均菌落在30～300之間者進展計算，當只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，即以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)報告〔見表3例1。30～300之間，則應(yīng)當按二者之比值來打算。假設(shè)其比值小于22〔見表3例23③假設(shè)全部的稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最大的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告〔見表3例。④假設(shè)全部稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最小的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告〔見表3例5。⑤假設(shè)全部稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～30030030的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報告〔見表3例6。例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個稀釋菌落總數(shù)報告方式備注例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個稀釋菌落總數(shù)報告方式備注2702.7×102310003.1×104的原則取舍10-110-210-3度菌落數(shù)之比〔個/ml〕〔個/ml〕1136516420—16400160001.6×104兩位以后22760295461.637750380003.8×104的數(shù)字采32890271602.227100270002.7×104取四舍六4無法計數(shù)1650513—5130005100005.1×105入五單雙527115 — 2706無法計數(shù)30512 — 30500質(zhì)量把握要求比照把握承受無菌水作全過程比照把握，當有明顯雜菌污染時，說明測定過程某環(huán)節(jié)無菌性失10min準確度15個陽性水樣平行雙樣結(jié)果為X

1，則準確度推斷值＝3.27R。

1i 2i 1i 2i〔R

R)

logX

logX 〕i i 1i 2i當分析所得Ri1logX1

logX2

3.27R表示周密度已失控；否則平行雙樣的差距可以承受。最正確計數(shù)量文件編號：WJES/QZ-0017-2023常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導書名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導書第文件編號：WJES/QZ-0017-2023常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導書名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導書第4頁共5頁4430～300菌落數(shù)在這一范圍的平皿計數(shù)。數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)審核分析結(jié)果填寫原始記錄表與樣品送檢單，應(yīng)經(jīng)科室內(nèi)部校對、審核后，方可上交。數(shù)據(jù)填報100100承受二位有效數(shù)字報告，有效數(shù)字后面的數(shù)值以四舍五入方法計算，為縮短數(shù)字后面的零數(shù)可用10的指數(shù)形式表示〔如報告1000或1.14。在報告菌落數(shù)為“無法計數(shù)”時，應(yīng)注明水樣的稀釋倍數(shù)。樣品采集采樣瓶應(yīng)經(jīng)高壓或干熱滅菌處理前方可使用；500mL采樣瓶中參與0.3mL10%硫代硫酸鈉溶液；樣品含銅鋅等重金屬較高時采樣瓶滅菌前應(yīng)加螯合劑，即于500mL采樣瓶中參與21.0mL15%乙二胺四乙酸二鈉〔EDTA-Na〕溶液；2同一地點同時采多瓶水樣時，細菌學檢驗水樣先采；采樣時，采樣瓶不得用水樣蕩洗；2106小時。期間核查人員素養(yǎng)首先要參與省上崗證理論考試，理論考試合格前方能上崗。同時站內(nèi)進展操作技能考核、培訓，考核合格前方能持證上崗，承但本項分析。按國家和省環(huán)境監(jiān)測中心的要求，必要進展五年換證的理論考試、操作技能考核。儀器設(shè)備臭氧殺菌效果、高壓鍋壓力表指示、恒溫培育箱溫控狀況每年由站質(zhì)管中心組織持證人員檢驗、校正，玻璃量具每三年由站質(zhì)管中心組織持證人員校正。分析環(huán)境條件把握儀器設(shè)備保持試驗室環(huán)境干凈，定期檢查，避開恒溫培育箱溫控失控，做好儀器設(shè)備使用和保養(yǎng)記錄。無菌室定期承受消毒劑清潔無菌室，定期檢查臭氧殺菌效果，保證無菌室微生物試驗條件的滿足。文件編號：WJES/QZ-0017-2023常州市武進區(qū)環(huán)境監(jiān)測站作業(yè)指導書名稱：水質(zhì)細菌總數(shù)測定作業(yè)指導