基于多層面生物標志物群的中醫(yī)臨床系統(tǒng)生物學研究體系的構建與應用

基于多層面生物標志物群的中醫(yī)臨床系統(tǒng)生物學研究體系的構建與應用

一、化學組學與系統(tǒng)生物學如何構建符合中國國際慣例和規(guī)則的現(xiàn)代研究方法體系是作者長期以來的研究和研究問題。1997年首先提出并發(fā)表了中藥復方有效部分理論，進而構建了中藥化學研究體系，即“一個結合（化學研究與藥效學研究相結合）、兩個基本講清（基本講清藥效物質基礎，基本講清作用機理）、三個化學層次（復方整體、有效部分、有效成分）、四個藥理水平（整體動物、器官組織、細胞亞細胞、分子生物學）”（簡稱為“一二三四”研究體系）。即將中藥化學物質體系的特點與后基因組時代“組學”研究思想相結合，創(chuàng)建了化學物質組學（Chemomics）新方法。將作用于生物體系的某一個外部擾動體系的所有化學物質的集合定義為化學物質組（Chemome），化學物質組學方法則可以研究化學物質組的組成及其變化與生物響應（效應）的相互關系。中藥復雜體系的表征推動了中藥指紋圖譜技術的發(fā)展。在化學物質組學應用于中藥復方研究與開發(fā)中，我們提出了層次化的研究策略，即整體化學物質組（藥材配伍的傳統(tǒng)中藥）、有效化學物質組（開發(fā)有效組分配伍的組分中藥）、有效成分群（未來可以開發(fā)有效成分配伍的復方藥物）逐步遞進，在優(yōu)先保證療效的基礎上使中藥的物質基礎和質量控制水平不斷提高，并提出了“自上而下”和“自下而上”兩種研究模式。英國Brunel大學生物工程研究所所長IanA.Sutherland教授在JournalofChromatographyA上發(fā)表的專題綜述中評價作者所創(chuàng)建的化學物質組學方法（Chemomics）為“東西方文化有趣的結合”的一個代表，并認為作為一種新的“組學”方法將可能開發(fā)出現(xiàn)代復方藥物（MCM）。將中藥化學物質組學與系統(tǒng)生物學研究相結合，提出了中醫(yī)藥整體系統(tǒng)生物學，即“系統(tǒng)-系統(tǒng)”的研究體系，采用化學物質組學表征中藥復雜系統(tǒng)，采用基因組學、蛋白質組學、代謝組學及經(jīng)典藥理學等表征生命系統(tǒng)，建立了研究兩個復雜系統(tǒng)相互作用和網(wǎng)絡調控機制的方法體系。在此基礎上，為適應中醫(yī)藥臨床研究和轉化醫(yī)學的需要，我們提出了以構建多層面生物標志物群為特征的臨床系統(tǒng)生物學研究體系。開展以臨床療效為導向的中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究是中醫(yī)藥發(fā)展的最佳途徑。二、中醫(yī)臨床系統(tǒng)的生物特征1.采用系統(tǒng)生物學研究方法，促進中藥復方研究的發(fā)展王永炎院士曾提到：“中醫(yī)治療不是單用對抗療法。而是以中藥方劑為主，采用整體綜合調節(jié)的形式，針對疾病的主要發(fā)病環(huán)節(jié)，通過多途徑、多環(huán)節(jié)作用于人體的多層面、多靶點，使其整體水平、器官水平、細胞亞細胞水平、分子水平得到相應的調整”。中醫(yī)藥的整體觀還表現(xiàn)在“醫(yī)藥一體觀”，中藥方劑源于臨床，應用于臨床，理、法、方、藥通過“辨證-立法-處方”3個環(huán)節(jié)環(huán)環(huán)相扣，相互呼應，結合為統(tǒng)一的整體。這些“系統(tǒng)論”與“整體論”思想是中醫(yī)藥理論科學內涵的精髓，與現(xiàn)代生命科學發(fā)展主流不謀而合。隨著人類疾病譜的轉變，西方醫(yī)學單靶點對抗性治療難以解決復雜的疾病問題，從人體器官到細胞再到基因的“還原論”模式的缺陷日益凸顯，用系統(tǒng)的思維，組合多種學科研究生物學問題的思路已成為生命科學研究的前沿?！跋到y(tǒng)生物學（SystemsBiology）”是由美國科學家LeroyHood于20世紀90年代末提出的學科理念，它認為在生命過程中更重要的是生命各單元之間存在的相互影響和相互關系，將生命體割裂成彼此孤立的單元去考慮是片面的，主張從系統(tǒng)角度去了解生命體，這與中醫(yī)學對人體生理病理的認識和治療疾病的方法“異曲同工”。系統(tǒng)生物學的提出為中醫(yī)藥理論與現(xiàn)代醫(yī)學的融合提供了方法平臺。目前，基于各種“組學”技術的系統(tǒng)生物學研究方法逐步發(fā)展為中藥復方現(xiàn)代研究的支撐技術，廣泛用于中醫(yī)“證候”模型的評價和篩選、中藥配伍規(guī)律研究、復方藥代動力學研究及新藥的開發(fā)，極大地推動了中藥復方研究的發(fā)展。但迄今為止，中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究工作還存在以下兩個明顯的局限。2.缺乏對中醫(yī)“證候”的診斷和評價指標長期以來中醫(yī)藥的探索性研究沿用了西方醫(yī)學“還原分析”的模式，割裂了“方-證-病”之間的整體系統(tǒng)性。基礎研究多停留在動物和細胞模型，僅通過一個或幾個反映西醫(yī)某一“疾病”特征的特異性藥理指標或局部功能的改變來評價藥物的療效。缺乏與中醫(yī)“證候”相適應的動物模型和評價指標，得到的研究成果不能體現(xiàn)方-證對應的本質特征，無法闡明基于辨證論治的方劑療效機理，與臨床實踐“脫節(jié)”。在臨床診斷中，西醫(yī)對疾病的診斷具有明確生理生化評判標準（包括影像學在內的生理生化指標），對于靶器官等明確部位的器質性病變具有一定的優(yōu)勢，但對于一些多因素復雜性功能性疾病在早期診斷和干預治療仍存在諸多問題?，F(xiàn)代醫(yī)學診療體系尚不適用于以“證”為基礎的中醫(yī)施治、立法、處方。證反映了患者整體癥狀體征，包括病理變化和生理變化，但基于中醫(yī)證候的診斷體系主觀性較強，評價指標難以量化，缺乏反映證候學特征的客觀化數(shù)據(jù)。開展“方-證-病”關聯(lián)的中醫(yī)藥臨床系統(tǒng)生物學研究可望為中醫(yī)藥整體觀指導下的辨證施治提供基礎和支撐。3.從生物學的角度，存在“以藥物為本”的干預模式，缺乏對藥物系統(tǒng)中的“三各種“組學”技術及在此基礎上發(fā)展起來的網(wǎng)絡藥理學、系統(tǒng)生物學等現(xiàn)代生物技術為從整體上研究中藥復方的物質基礎和作用機制提供了新的思路和方法，也取得了可喜的成績。然而目前系統(tǒng)生物學在中醫(yī)藥研究中大部分還局限于使用一種或兩種組學手段（基因組學、蛋白質組學、代謝組學等），從特定靶點和通路著手探討機體對中藥干預的應答反應，這種方法容易導致對疾病的治療出現(xiàn)“碎片化”傾向，缺乏系統(tǒng)性和整體性。此外，西方系統(tǒng)生物學把生物體作為和基因、蛋白質、代謝物等相關的整個系統(tǒng)，而把藥物作為單一擾動因素，注重單一藥物分子干預前后生物系統(tǒng)的整體刻畫（網(wǎng)絡藥理學）即“點（單一藥物分子）-系統(tǒng)（生物系統(tǒng)）”的模式，缺乏對藥物系統(tǒng)（中藥復方）的研究。而中藥復方整體性作用的特點本質上體現(xiàn)為中藥與人體兩個復雜系統(tǒng)間的相互作用并形成一個更高級的系統(tǒng)整體，即“系統(tǒng)（藥物系統(tǒng)）-系統(tǒng)（生物系統(tǒng)）”。照搬西方系統(tǒng)生物學模式顯然無法與“方-證-病”結合的整體化研究相適應，難以揭示兩個系統(tǒng)（生物應答系統(tǒng)和中藥復方的復雜物質系統(tǒng)）之間的內在關聯(lián)，不能從根本上闡明中醫(yī)藥理論的科學內涵。4.中醫(yī)藥臨床研究模式的提出和發(fā)展縱觀近20年來中醫(yī)藥現(xiàn)代化進程，我們需要有兩方面的隊伍。一方面需要有一支按傳統(tǒng)中醫(yī)藥體系，以繼承和傳承為責任，發(fā)揚光大傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論的隊伍；另一方面需要有一支能在中醫(yī)藥理論指導下，結合現(xiàn)代科學技術的發(fā)展，以創(chuàng)新為使命的隊伍。繼承和創(chuàng)新均應以創(chuàng)新為重，繼承為創(chuàng)新所用。創(chuàng)新應包括兩個方面，一是創(chuàng)新內容從繼承中來，但不應受其束縛，而是知識挖掘（KnowledgeMining）；二是傳統(tǒng)的中醫(yī)藥理論與現(xiàn)代科學體系和技術的結合、整合和融合，上升為創(chuàng)新的高度。近年來西方醫(yī)學提出的轉化醫(yī)學B2B2B的雙向運作模式，適合于西方醫(yī)學把大量已取得的基礎研究成果（Bench）應用到臨床（Bedside）中去，所以B2B2B的模式是BenchtoBedside&BedsidetoBench。而中醫(yī)藥來源于臨床實踐，它的轉化醫(yī)學模式雖然還是B2B2B，但其表現(xiàn)形式更適宜的是從臨床到實驗室再到臨床（BedsidetoBench&BenchtoBedside）的模式。我們在中醫(yī)藥整體觀、系統(tǒng)論的理念指導下，提出了將西醫(yī)藥研究模式（單分子藥物針對單個靶點，PointtoPoint,P2P），到單分子藥物針對生物系統(tǒng)（PointtoSystem,P2S），進一步發(fā)展為藥物復雜系統(tǒng)針對生物復雜系統(tǒng)（SystemtoSystem,S2S）的“系統(tǒng)-系統(tǒng)”研究模式。在用化學物質組學表征中藥復方基礎上，將整合化學物質組學的整體系統(tǒng)生物學結合臨床研究，進一步發(fā)展為以整合生物標志物體系（IntegratedBiomarkerSystem）為特征，“系統(tǒng)-系統(tǒng)”研究模式的中醫(yī)藥臨床系統(tǒng)生物學。無論對于藥物復雜系統(tǒng)或生物復雜系統(tǒng)（特別是人的疾病）均要考慮復雜系統(tǒng)的表征方式。對于復雜系統(tǒng)的表征，我們提出要有3個整合：(1）整體表征與局部特征的整合。對生物體系的研究，既要體現(xiàn)整體效應和系統(tǒng)、網(wǎng)絡的構建，也要重視靶點和特定信號通路的研究。對中藥方劑體系的研究，既要體現(xiàn)方劑整體組成輪廓，也要關注關鍵成分的量效關系。(2）定性分析與定量測定的整合。對方劑臨床效應的評價，傳統(tǒng)中醫(yī)擅長定性描述，須進一步加強定量藥效學的研究，將定性分析和定量評價更好結合。對方劑化學表征既要有指紋圖譜的定性、半定量評價，也要整合指標成分的定量測定。要將基因組、蛋白組、代謝物組指紋圖譜和關鍵基因、蛋白質、代謝物的定量測定加以整合并聚焦。(3）多層面指標體系的整合和聚焦。要將中醫(yī)證候指標、臨床生化指標及影像學指標和系統(tǒng)生物學指標體系(基因、蛋白質和代謝物3個層次)等多個層面數(shù)據(jù)加以整合,再用生物信息學方法處理,聚焦得出適宜的整合生物標志物體系(IntergratedBiomakerSystem,IBS)。目前臨床很多疾病的診斷依賴病理診斷，不能用作常規(guī)診斷或早期預警。多系統(tǒng)復雜疾病缺乏早期、特異性生物標志物。臨床治療缺乏個體化診療指標體系和方案。我們提出整合生物標志物體系（IBS）來開展臨床系統(tǒng)生物學的“系統(tǒng)—系統(tǒng)”模式研究（見圖1）。5.基于臨床系統(tǒng)的中藥復方生物組，實現(xiàn)信息融合，信息傳播。在中國我國，我國可以成功利用我國《監(jiān)在中醫(yī)整體觀指導下，我們提出發(fā)展基于“方病對應、證病結合、方證病整合”策略的“系統(tǒng)-系統(tǒng)”的中醫(yī)藥臨床系統(tǒng)生物學研究模式，即在現(xiàn)有系統(tǒng)生物學基礎上，發(fā)展整合化學物質組學的整體系統(tǒng)生物學，通過化學物質組學表征藥物干預系統(tǒng)（中藥復方）的組成及相互關系。通過臨床系統(tǒng)生物學來刻畫生物系統(tǒng)（臨床病人）的應答過程，進一步整合分析兩個系統(tǒng)間的交互關系，系統(tǒng)揭示中藥復方（化學物質組）的變化與生物系統(tǒng)應答的時空響應的相關性，實現(xiàn)“方-證-病”信息的關聯(lián)。2012年6月國際著名Wiley出版社出版了自開展中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究以來第一本英文研究專著《SystemsBiologyforTraditionChineseMedicine》，對這一研究模式進行了全面介紹。中醫(yī)藥臨床系統(tǒng)生物學既符合中醫(yī)藥自身特點，又充分整合最新現(xiàn)代科學技術的研究模式、策略和方法平臺，應用現(xiàn)代科學語言闡釋中醫(yī)藥理論的科學內涵，通過科學數(shù)據(jù)證實中醫(yī)藥的臨床療效，可望為中醫(yī)藥現(xiàn)代化并走向國際架起橋梁。三、對中醫(yī)藥臨床系統(tǒng)生物學的應用中醫(yī)藥臨床系統(tǒng)生物學是為適應中醫(yī)藥臨床研究和轉化醫(yī)學的需要，以推動4P醫(yī)學（預測醫(yī)學、預防醫(yī)學、個體化醫(yī)學、參與式醫(yī)學）為目標，在中醫(yī)藥整體觀和系統(tǒng)論指導下，整合運用多種系統(tǒng)生物學技術，通過對病證診療方法和藥物臨床合理應用方法的創(chuàng)新研究來為臨床服務，提高臨床診治水平的學科?，F(xiàn)階段中醫(yī)藥臨床系統(tǒng)生物學的主要研究目標是要針對中醫(yī)藥研究中存在的“方、證、病割裂，基因、蛋白質、代謝物分離”的通病，建立一套整合的生物標志物體系（IBS），包括中醫(yī)證候生物標志物群、臨床生化指標及影像學標志物、系統(tǒng)生物學標志物群多個層面，系統(tǒng)生物學指標又可以包含基因、蛋白質、代謝物多個層次的標志物群。應用于疾病早期預警、臨床診治、指導個性化用藥、疾病預后以及藥物評價。1.中醫(yī)藥傳統(tǒng)診療方法的不足當前國際主流醫(yī)學界也已普遍認識到過去單純對治療疾病的關注具有局限性，而應該是對人體健康的全面關注，“健康醫(yī)學”、“預防醫(yī)學”等提法基本上都體現(xiàn)了這一理念。實際上中醫(yī)藥一貫強調“治未病”，說明我國很早以來就高度重視對疾病的早期診治，甚至包括對亞健康狀態(tài)的關注和早期預警，然而中醫(yī)藥的診療方法和指標在客觀化和標準化方面還有待發(fā)展。將中醫(yī)藥“治未病”的學術思想與臨床系統(tǒng)生物學研究結合起來，通過對健康對照、亞健康狀態(tài)、疾病早期的比較研究，有望發(fā)現(xiàn)與亞健康狀態(tài)相關或預測疾病發(fā)生風險的系列標志物，可用于早期預警，以便更早做好防范，降低疾病的發(fā)生風險，而疾病早期發(fā)現(xiàn)的生物標志物也有助于提高疾病的早期診斷率，盡早治療，提高治愈率或延緩疾病的進展。2.整合系統(tǒng)生物學體系疾病譜的變化使得多因素復雜性疾病，如心腦血管疾病、代謝綜合征、惡性腫瘤等成為人類健康的主要威脅。常規(guī)西醫(yī)診斷的目的是治療人的病，針對的是靶器官、靶組織和靶點，注重疾病的病理變化，在病理變化局部特征的描述上有優(yōu)勢。西方醫(yī)學應用現(xiàn)代儀器設備以及影像檢查手段進行生化指標檢查，運用量化的指標進行診斷，因此對于病因明確、靶點單一的疾病具有顯著優(yōu)勢，但對于一些未產(chǎn)生實質病變或多因素復雜性疾病在早期預診和判斷預后均存在較大缺陷，容易犯盲人摸象的錯誤。而常規(guī)中醫(yī)診療的目的是治療生病的人（證候），針對的是改善患者整體的癥狀體征，不僅注重于患者病理的變化，同時也關注生理的變化。但是中醫(yī)診斷對于疾病是一種語言的描述，指標的量化和標準化還有待加強。因此，我們提出通過臨床系統(tǒng)生物學研究建立一套整合的生物標志物體系，包括中醫(yī)證候生物標志物群、臨床生化指標及影像學標志物、系統(tǒng)生物學標志物群多個層面，通過與各種臨床表型的相關性研究，可望更全面更準確的應用于多因素復雜性疾病的診斷分型。藥物干預會對代謝酶的表達、代謝產(chǎn)物的組成和相對濃度等產(chǎn)生重要的影響，采用整合系統(tǒng)生物學體系可在藥物干預的早期甚至在藥物干預之前預測藥物反應（藥效或毒性）。通過多種生物樣本（體液、組織和細胞等）的采集整合，多種檢測、分析技術的整合運用，多種數(shù)據(jù)處理方法的整合分析，闡述基因變異、蛋白表達和代謝擾動之間的內在聯(lián)系，找出藥物治療相關的生物代謝標志物，開展藥物治療的安全性和有效性評價。3.藥物藥效學和藥動學行為的差異相同劑量的藥物可能會引起藥物反應（療效和毒性）的個體差異，引起此種差異的主要原因為基因的多態(tài)性及其可能導致的體內過程（吸收、分布、代謝、排泄）不一致性。遺傳多態(tài)性通過影響編碼蛋白質的活性，進而引起藥物藥效學和藥動學行為的差異，以藥物轉運、藥物代謝和藥效學的差異為表現(xiàn)形式。通過藥物基因組學分析基因存在的單核苷酸多態(tài)性（SNP），或者藥物代謝組學揭示代謝系統(tǒng)的個體化差異，結合臨床相關數(shù)據(jù)，一方面預測藥物的效應和毒性反應來達到個體化治療目的，另一方面發(fā)現(xiàn)群體規(guī)律提示新的藥物作用靶點。通過藥物個體化用藥基因和代謝標志物檢測，為臨床個體化治療提供數(shù)據(jù)支持，從而提高藥物治療有效率，降低毒副作用和醫(yī)療成本。同時開展研究遺傳因素與臨床合理用藥之間的重要關系，確定引起個體對藥物處置和療效差異的遺傳學特征，為臨床合理用藥和新藥研發(fā)與評價提供強有力的科學依據(jù)。4.治療藥物監(jiān)測藥物干預人體過程中，通過闡述藥物體內過程，研究藥物與人體相互作用規(guī)律，促進醫(yī)藥結合，指導臨床合理用藥，提高臨床治療水平。例如治療藥物監(jiān)測（TDM）、藥物代謝動力學（藥動學）研究以及藥物相互作用規(guī)律研究等。在總結進行監(jiān)測的治療藥物及其給藥劑量、療效、不良反應以及個體之間的相互關系的基礎上，建立治療藥物監(jiān)測網(wǎng)絡和監(jiān)測藥物的數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)并探索監(jiān)測藥物群體特征，為臨床服務；開展藥物的藥動學研究及制劑生物等效性評價，提供藥物對靶器官效應（藥效或毒性）的依據(jù)，為設計和優(yōu)化臨床研究給藥方案提供有關參考信息；采用體外（肝微粒、原代肝細胞、Caco-2細胞）和體內（動物）模型等方法，研究藥物對藥物代謝酶（CYP450）和轉運蛋白（P-gp）的誘導或抑制作用，以及誘導或表達下調作用，探討中藥之間或中藥與西藥產(chǎn)生相互作用的關系，優(yōu)化藥物治療方案，保障藥物治療的有效性和安全性。四、cdkal1、igf2bp2、mthfr基因與糖尿病腎病相關聯(lián)的臨床樣品分析以近年來我們開展的糖尿病腎?。―N）中醫(yī)藥臨床系統(tǒng)生物學研究為例。糖尿病腎病為糖尿病引起的腎臟損害，其特異性表現(xiàn)為糖尿病性腎小球硬化癥，其基本病理病變?yōu)槟I小球基底膜增厚和系膜基質增生，臨床主要表現(xiàn)為蛋白尿、水腫、高血壓及腎功能損害，因此糖尿病腎病的早期診斷極為重要。西醫(yī)診斷強調患者的腎功能，以蛋白尿作為診斷的金指標，但是對于未出現(xiàn)明顯蛋白尿的糖尿病腎病患者就難以診斷；中醫(yī)診斷強調患者證候，包括氣虛、陰虛以及陽虛證，但是目前缺乏可以量化的指標。臨床合作單位北京中日友好醫(yī)院等開展了多中心、隨機、雙盲、安慰劑對照臨床試驗，證實了中藥糖腎方干預氣陰兩虛夾瘀型2型糖尿病腎病在降低蛋白尿、改善腎功能等方面具有確切臨床療效。我們首先開展了基于橫斷面分析的臨床系統(tǒng)生物學的研究，分別建立了血漿樣本代謝指紋譜分析、七大類百余種磷脂定性與定量分析、15種脂肪酸定量分析、21種嘌呤嘧啶相關代謝物定量分析和8種硫醇氨基酸定量分析，以及14種糖尿病腎病相關基因PCR定量的方法學平臺。通過整合代謝物定量測定與代謝指紋譜、代謝組學研究與臨床生化數(shù)據(jù)、代謝組學與基因組學研究的結果，建立了包括西醫(yī)病理生化指標、臨床系統(tǒng)生物學所確定的生物標志物（基因、蛋白質、代謝物等）和中醫(yī)證候量化指標（整體的癥狀體征）3個方面，應用于糖尿病腎病氣陰兩虛證診斷（辨證）和療效評價（論治）的整合指標體系。通過應用于糖尿病腎病氣陰兩虛證（細分為偏陰虛組和偏氣虛組）及陰陽兩虛證病例150例的預測診斷，使用建立的整合指標體系中醫(yī)分型預測總準確率達到100%，而僅使用中醫(yī)癥狀指標預測總準確率為77.8%，具有明顯的臨床應用優(yōu)勢。對定量代謝組學篩選得到的標志物與中醫(yī)癥狀進行相關性分析，糖尿病腎病中脾胃氣虛、瘀血癥狀與磷脂代謝中的PE750、PG747顯著負相關；嘌呤嘧啶代謝中，肌酐與氣血虛、瘀血癥狀顯著正相關，胞苷與瘀血癥狀顯著正相關，肌苷與肝腎陰虛癥狀顯著負相關，胸苷、腺苷、肌氨酸與痰濕癥狀顯著正相關，此外，腺苷還與氣血虛癥狀顯著正相關；硫醇氨基酸代謝中，Cys-gly與陰虛內熱癥狀，SAH與瘀血癥狀，SAM與氣血虛癥狀，Hcy與脾胃氣虛、痰濕癥狀及癥狀總分均顯著正相關。這表明主觀的中醫(yī)分型癥狀得分與客觀的代謝標志物含量相關，可實現(xiàn)客觀量化?；蜓芯堪?個糖尿病易感基因：CDKN2A,CDKN2B,IGF2BP2和CDKAL1;4個糖代謝基因：醛糖還原酶（AR），糖基化終末產(chǎn)物受體（AGER），受體葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1）和胰島素樣生長因子2(IGF2）;4個血流動力學相關基因：血管緊張素原（AGT），β3-腎上腺素受體（ADRB3），血管緊張素Ⅱ受體-2(AGTR2）和血管緊張素轉換酶（ACE）基因和基礎代謝有關的重要基因蛋白激酶C(PRKCA）和5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因（MTHFR）。結果表明，在糖尿病腎病病理及證候進化發(fā)展的各個階段，CDKAL1、IGF2BP2、AR、AGT及MTHFR基因表達在不同分組間具有顯著差異，可作為糖尿病腎病發(fā)展的潛在基因標志物，其聯(lián)合應用可以作為中西醫(yī)診斷的輔助檢測指標，提高診斷的準確率。特別是PRKCA基因對于氣陰兩虛偏氣虛的分型非常敏感，表達量顯著增高（P<0.001）。PRKCA作為蛋白激酶C，能激活細胞質中的多種酶并參與多種生化反應的調控。而“氣”在中醫(yī)上也偏重于轉運和代謝，是體內的一種推動各個組織器官正常運轉的能量，與PRKCA的功能有所交叉，這可能是導致PRKCA對氣虛較為敏感的原因。CDKAL1與MTHFR基因對于氣陰兩虛偏氣虛也顯示出高度的特異性。我們實現(xiàn)了4個整合：代謝指紋譜與定量代謝循環(huán)的整合，代謝組學與臨床生化指標間整合，中醫(yī)癥狀與代謝組學及臨床生化指標間的整合，代謝與基因通路的整合。在此基礎上，聚焦得到一個潛在的生物標志物群，包括4個代謝物和4個