中醫(yī)證候動物模型的研究進展

中醫(yī)證候動物模型的研究進展

“期末”是中醫(yī)學的專業(yè)詞匯。它總結(jié)了與疾病過程相關(guān)的癥狀的總稱，并通過看、聞、問、切來了解疾病過程中身體的變化，簡稱“期末”。為推進中醫(yī)證候研究的客觀化和規(guī)范化,對于其相對應(yīng)的動物模型的建立和研究勢在必行。自上世紀60年代,鄺安堃等就較早開展了相關(guān)研究。1準分類1.1模型的顯著性檢測在臨床實踐中?？砂l(fā)現(xiàn)某些化合物的毒副作用可造成器質(zhì)性病變。該類病理生理學變化與某些中醫(yī)典型證候病理特征相似。例如趙寧等腹腔注射利血平造成大鼠脾虛證模型,并用四君子湯和理中丸反證該模型,后經(jīng)指標檢測,給藥組和模型組有顯著性差異。王喜軍等先對給藥組大鼠連續(xù)7日灌胃給予茵陳蒿湯,第8日給藥組和模型組同時灌胃給予CCl4(四氯化碳)油溶液,最后對一系列生化指標進行檢測,模型組與空白組的差異存在統(tǒng)計學意義,給藥組也能對CCl4引起各項指標的差異進行回調(diào),由此證明此模型被成功復(fù)制。劉源才等通過連續(xù)14天皮下注射外源性皮質(zhì)酮,制備腎陽虛模型,給予中國勁酒進行干預(yù)。通過對相應(yīng)指標進行檢測,其空白組與腎陽虛模型組比較差異有統(tǒng)計學意義,此藥物能改善腎陽虛模型大鼠HPA軸的功能。1.2各模型的檢測此類模型是基于傳統(tǒng)中醫(yī)理論,在動物上施以病因,使此模型的表現(xiàn)與臨床主要表現(xiàn)一致,再對模型的體征等指標進行觀察,并用與病因相關(guān)的治療藥物進行反證,若動物理化指標相應(yīng)發(fā)生改變,則證明該造模方法有效。徐惠仁通過激怒刺激法復(fù)制大鼠肝郁模型,通過血流變學相關(guān)指標檢測,發(fā)現(xiàn)模型組與對照組差異顯著,同時大鼠出現(xiàn)撕咬、不思飲食等癥狀。這與臨床中情志不遂以致肝郁,且肝氣機失常以致血瘀等描述相符,并用疏肝理氣藥對此模型進行反證,表明此模型與大鼠肝郁模型相符合。孫福立利用睡眠剝奪法復(fù)制大鼠心氣虛模型,發(fā)現(xiàn)模型組大鼠心率和血壓改變明顯,證明以此方法建立的模型符合中醫(yī)心氣虛證。李麗琦通過寒冷刺激法復(fù)制大鼠血瘀證模型,從血液黏度等指標進行驗證,發(fā)現(xiàn)模型組均與對照組存在差異,并且經(jīng)藥物反證,證明此模型與中醫(yī)寒凝血瘀證相吻合。1.3中醫(yī)證候?qū)W模型此類模型是指既能體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的思想,又能在器官上得到明確的病理變化和診斷評價,也就是在動物模型身上同時具備證候和疾病的特征,這種模型在探討疾病病理、生理變化與中醫(yī)證候之間的關(guān)系起著不可或缺的作用。1.3.1血流變學和臨床療效結(jié)合可檢測大鼠血清充多因素復(fù)合模型是基于中醫(yī)藥理論,結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學理論與實驗動物科學知識,分別或同時采用中醫(yī)學病因復(fù)制證候模型和現(xiàn)代醫(yī)學病因復(fù)制疾病動物模型,使模型動物同時表現(xiàn)出疾病和證候的特征。例如任建勛等通過不可預(yù)知的慢性睡眠剝奪并伴隨半高脂高糖復(fù)合飲食刺激大鼠,復(fù)制了大鼠氣虛血瘀模型,發(fā)現(xiàn)模型組與空白組血流變學相關(guān)指標出現(xiàn)顯著性差異。模型大鼠在雙參通冠方干預(yù)給藥后,給藥組的各項指標與模型相比均降低。宋紅等對大鼠進行大黃瀉下、游泳力竭和饑餓復(fù)合法復(fù)制脾氣虛證模型。模型組大鼠經(jīng)血清木糖濃度等指標與對照組比較存在統(tǒng)計學意義,經(jīng)健胃中藥治療,其各項指標均與對照組相比無統(tǒng)計學意義,但與模型組比較,差異有統(tǒng)計學意義。1.3.2對大鼠的復(fù)配疾病的病理變化即中醫(yī)證候,醫(yī)學檢查中的生化指標和病理切片等,一些病理變化在一定程度上與中醫(yī)的證存在相關(guān)性,并能反映部分中醫(yī)證的實質(zhì)。例如佟欣等人在原有黃疸模型研究的基礎(chǔ)上,多因素復(fù)合誘導(dǎo)大鼠陰黃證模型,治療組給予茵陳四逆湯,觀察并測定其生化指標等活性和效價,在藥物治療下,證實大鼠的上述指標恢復(fù),故認為此模型具有良好的穩(wěn)定性,并且經(jīng)得起藥物反證,是一種切實可行的陰黃證造模方法。王喜軍等人,對給藥組按高、中、低劑量分別給予大鼠茵陳蒿湯,于第10日模型組和給藥組同時灌胃給予50%(體積比)乙醇5g/kg,連續(xù)5天復(fù)制大鼠肝損傷模型。觀察生化指標的變化,發(fā)現(xiàn)模型組與給藥組相比,生化指標存在顯著性差異,同時對組織病理學進行觀察,模型組肝臟出現(xiàn)肝損傷,給藥組也出現(xiàn)肝損傷,但與模型組相比程度明顯減輕。故認為成功復(fù)制此模型,且茵陳蒿湯具有良好的保肝作用。1.3.3對大鼠模型的復(fù)制和再進行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建在傳統(tǒng)中醫(yī)理論的指導(dǎo)下,運用六淫、飲食、情志、勞倦等中醫(yī)特有的致病因素建立中醫(yī)病因證候模型,在此基礎(chǔ)上,通過藥物或是手術(shù)等方法,建立西醫(yī)疾病的模型。例如何軍峰等人先通過喂養(yǎng)大鼠高脂飼料4周,誘發(fā)心血管的病理改變,此基礎(chǔ)上腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素制備2型糖尿病大鼠模型,最后再給予強的松龍和腎上腺素,并對其進行心電圖檢測等觀察,模型組大鼠2型糖尿病模型的復(fù)制是成功的。王建等采用老年Wistar大鼠,結(jié)合饑餓、疲勞等因素復(fù)制氣虛血瘀模型,采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎復(fù)制腦缺血模型。模型組血液流變學等一系列微觀指標的變化,均與空白對照組的差異存在統(tǒng)計學意義。并對此模型用中藥復(fù)方制劑腦通絡(luò)進行反證。認為此氣虛血瘀腦缺血模型復(fù)制成功。2中醫(yī)證候動物模型的制備方法無論是西醫(yī)病理模型還是中醫(yī)病因模型模擬中醫(yī)證候的研究,都可單獨闡明某種病因的單獨作用,但不能體現(xiàn)現(xiàn)實生活中疾病發(fā)生的復(fù)雜性和中醫(yī)單一病因的復(fù)雜性,所以這兩種模型的發(fā)展受到了極大的制約。病證結(jié)合動物模型雖然看似全面的模擬中醫(yī)發(fā)病根源,但是由于變量多,可控性和可重復(fù)性都較難把握。因此,如何使中醫(yī)證候動物模型更加規(guī)范化、標準化以及如何提高模型的重現(xiàn)性都將成為發(fā)展趨勢。要做出理想的中醫(yī)證候動物模型,我們應(yīng)闡明宏觀信息與微觀指標的聯(lián)系同時建立“以方測證”,從這兩部分入手。例如PingWang等應(yīng)用UPLCHDMS對大鼠腎陰虛模型進行代謝組學分析,對其尿液進行檢測后發(fā)現(xiàn)腎陰虛組與模型組代謝輪廓有顯著性差異,同時應(yīng)用六味地黃丸后使上述代謝輪廓回調(diào)至正常水平。中醫(yī)證候動物模型不應(yīng)僅局限在單獨的局部生理的改變,還應(yīng)結(jié)合系統(tǒng)生物學,聯(lián)合多種組學、譜學,借助多系統(tǒng),研究實驗整體在證候模型中的改變,觀察整個生物系統(tǒng)在DNA、mRNA、蛋白質(zhì)、代謝物之間復(fù)雜的生物過程。方便科學工作者從整體角度印證中醫(yī)證候動物模型的科學性、有效性,推進對中醫(yī)理論的觀察,探索和研究,深入揭示“證”本質(zhì)的研究。3案例的不斷復(fù)制與創(chuàng)新20世紀中葉至今,中醫(yī)證候動物模型不斷發(fā)展成熟,思路也日漸開闊。成熟體