實驗四、中藥蜜丸的微生物檢查

《微生物學實驗》基礎醫(yī)學院顯微形態(tài)實驗室—微生物學實驗室實驗四、中藥蜜丸的微生檢查

實驗內容一）、蜜丸細菌總數(shù)測定二）、蜜丸霉菌總數(shù)測定三）、蜜丸大腸桿菌測定二、實驗目的掌握蜜丸中細菌及霉菌總數(shù)的檢測方法，大腸桿菌的測定方法，樹立無菌操作的觀念。三、實驗材料中藥蜜丸（六味地黃丸、山楂丸），研缽、天平、稱量紙、100ml量筒、150ml生理鹽水、10ml具塞刻度試管、100ml乳糖膽鹽增菌培養(yǎng)液、1ml、10ml移液管各2支、吸耳球、接種環(huán)、酒精燈、火柴、記號筆、伊紅美蘭瓊脂平板、普通瓊脂培養(yǎng)基、（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）、虎紅馬丁培養(yǎng)基三、實驗方法一）、蜜丸細菌總數(shù)測定二）、蜜丸霉菌總數(shù)測定1、無菌條件下稱隨機稱取10g蜜丸置研缽中逐漸加入100ml生理鹽水研磨為1：10藥液，分別量取9ml生理鹽水置10ml具塞刻度試管中，其中一支加入1：10藥液1ml后稀釋為1：100后再取1ml加入9ml生理鹽水具塞刻度試管中藥物稀釋為1：1000。2、取10個干烤后玻璃平皿，每2個分別加入1：10，1：100，1：1000藥液各1ml共6個，然后加入50℃普通瓊脂培養(yǎng)基、（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）15ml做細菌培養(yǎng)；每2個分別加入1：10，1：100，藥液各1ml共4個，然后加入50℃虎紅馬丁培養(yǎng)基15ml做霉菌培養(yǎng)，并立刻轉動平板使藥液與培養(yǎng)基充分混勻。10個平板置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后并記數(shù)。每一個稀釋度的3個平板的菌落的均數(shù)。3、選取菌落平均值在30-300之間的平板作為菌落總數(shù)的測定范圍，將數(shù)得的菌落數(shù)乘以相應的稀釋度得到每克檢測蜜丸中細菌總數(shù)。選取霉菌菌落平均值在5-50之間的平板作為菌落總數(shù)的測定范圍，將數(shù)得的菌落數(shù)乘以相應的稀釋度得到每克檢測蜜丸中霉菌總數(shù)。

稀釋度的選擇若只有一個稀釋度，菌落均數(shù)在30-300個間，乘以稀釋倍數(shù)報告。若兩個稀釋度，菌落均數(shù)在30-300個間，則求出每克均數(shù)之比，比值小于2報告均數(shù)，若大于2則報告較多的數(shù)字。若所有的稀釋度的均數(shù)均大于300個，取稀釋度最高的菌落均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。若所有的稀釋度的均數(shù)均小于30個，取稀釋度最低的菌落均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。若所有的稀釋度的均數(shù)不在30-300個間，一個稀釋度大于300個，相鄰另一個稀釋度小于30，則以接近30-300個菌落均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。細菌計數(shù)結果及報告方法

例次菌落均數(shù)比值菌落總數(shù)/g或/ml報告方式/g或/ml稀釋倍數(shù)10-110-210-31136516420-164001600022760295461.6377503800032890271602.227100270004不可計4650513-513000510000527115-2702706不可計30512-3050031000三）、蜜丸大腸桿菌測定

1.無菌條件下稱隨機稱取10g蜜丸置研缽中逐漸加入100ml生理鹽水研磨為1：10藥液,取10ml接種