生化及分子大題

1、什么是非編碼RNA？非編碼RNA有哪些？有什么作用？〔13年真題〕非編碼RNA〔non-codingRNA〕是指不編碼蛋白質(zhì)的RNA。其中包括rRNA，tRNA，snRNA，snoRNA和siRNA,miRNA,piRNA等多種功能的RNA，還包括未知功能的RNA。這些RNA的共同特點是都能從基因組上轉(zhuǎn)錄而來，但是不翻譯成蛋白，在RNA水平上就能行使各自的生物學(xué)功能了。非編碼RNA從長度上來劃分可以分為3類：小于50nt，包括miRNA，siRNA，piRNA；50nt到500nt，包括rRNA，tRNA，snRNA，snoRNA，SLRNA，SRPRNA等等；大于500nt，包括長的mRNA-like的非編碼RNA，長的不帶polyA尾巴的非編碼RNA等等。tRNA：功能主要是攜帶氨基酸進入核糖體，在mRNA指導(dǎo)下合成蛋白質(zhì)。rRNA：是細胞中含量最多的RNA，它與蛋白質(zhì)結(jié)合而成核糖體，其功能是作為mRNA的支架，使mRNA分子在其上展開，實現(xiàn)蛋白質(zhì)的合成。snRNA是smallnuclearRNA的簡稱，也稱作小核RNA。其功能是與蛋白因子結(jié)合形成小核核糖蛋白顆粒，參與mRNA前體的加工過程。snoRNA是最早在核仁發(fā)現(xiàn)的小RNA，稱作小核仁RNA，最初發(fā)現(xiàn)它們的生物功能是用來修飾rRNA的。miRNA:也是非編碼RNA，是小的RNA分子，具有破壞目標特異性基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物或者誘導(dǎo)翻譯抑制的功能,與轉(zhuǎn)錄基因互補，介導(dǎo)基因沉默〔RNAi〕。siRNA:激發(fā)與之互補的目標mRNA的沉默.piRNA:piRNA主要存在于哺乳動物的生殖細胞和干細胞中，通過與Piwi亞家族蛋白結(jié)合形成piRNA復(fù)合物〔piRC〕來調(diào)控基因沉默途徑。對Piwi亞家族蛋白的遺傳分析以及piRNA積累的時間特性研究發(fā)現(xiàn)，piRC在配子發(fā)生過程中起著十分重要的作用。還能維持生殖系和干細胞功能和調(diào)節(jié)翻譯和mRNA的穩(wěn)定性.非編碼RNA，目前的研究顯示，ncRNA的主要功能有：參與mRNA的穩(wěn)定和翻譯水平的調(diào)節(jié)、參與蛋白質(zhì)的運輸、參與RNA的加工和修飾、影響染色體的構(gòu)造等。表觀遺傳學(xué)的概念機主要研究容?！?0年真題〕3、表觀遺傳概念、主要容及其與癌癥研究作用?！?1年真題〕4、組蛋白翻譯后修飾、對轉(zhuǎn)錄的意義〔10年真題〕表觀遺傳學(xué)的容太多，一時整理不出來，我這里有本圖書館借來的書，你可以看一下。(2、3、4題都是表觀遺傳學(xué))5、有關(guān)糖酵解、TCA循環(huán)、電子傳遞鏈、戊糖磷酸途徑以及乳糖操縱子、色氨酸操縱子自己總結(jié)〔一定要做〕6、試述泛素的降解過程？〔09年真題，自己整理下，答案上說的不多，下冊301頁〕7、酶的活性受哪些因素調(diào)節(jié)，試說明之?！?3年真題〕答：酶的調(diào)節(jié)和控制有多種方式，主要有：〔1〕調(diào)節(jié)酶的濃度：主要有2種方式：誘導(dǎo)或抑制酶的合成；調(diào)節(jié)酶的降解；〔2〕通過激素調(diào)節(jié)酶活性、激素通過與細胞膜或細胞受體相結(jié)合而引起一系列生物學(xué)效應(yīng)，以此來調(diào)節(jié)酶活性；〔3〕反響抑制調(diào)節(jié)酶活性：許多小分子物質(zhì)的合成是由一連串的反響組成的，催化此物質(zhì)合成的第一步的酶，往往被他們終端產(chǎn)物抑制；〔4〕抑制劑和激活劑對酶活性的調(diào)節(jié)：酶受大分子抑制劑或小分子物質(zhì)抑制，從而影響酶活性；〔5〕其他調(diào)節(jié)方式：通過別構(gòu)酶、酶原的激活、酶的可逆共價修飾和同工酶來調(diào)節(jié)酶活性。①別構(gòu)調(diào)節(jié)：*些調(diào)節(jié)物能與酶的調(diào)節(jié)部位結(jié)合使酶分子的構(gòu)象發(fā)生改變，從而改變酶的活性以及代反響的速度。②可逆共價修飾：酶蛋白肽鏈上的一些基因可與*種化學(xué)基團發(fā)生可逆的共價結(jié)合，從而改變酶的活性。共價修飾包括磷酸化與脫磷酸化，乙酰化與脫乙?；⒓谆c脫甲基化等，其中以磷酸化修飾最為常見。③酶原的激活：有一些酶在細胞合成及釋放的初期，通常不具有催化活性，必須經(jīng)過蛋白酶酶解或其他因素的作用，才能轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘拿浮?、酶的調(diào)節(jié)包括酶活性的調(diào)節(jié)和酶含量的調(diào)節(jié)，前者又分為變構(gòu)效應(yīng)、酶的特異激活和抑制以及共價修飾等幾種形式；后者受合成和降解兩方面的影響。9、激素的作用方式〔作用機理〕，及各種作用方式的代表物質(zhì)?！沧约嚎偨Y(jié)〕〔上冊570頁〕10、真核生物DNA聚合酶有哪幾種"它們主要功能是什么？〔下冊425頁，表34-5〕11、說明真核生物基因表達調(diào)節(jié)機制的主要特點〔10年真題〕。答：真核生物基因表達調(diào)節(jié)機制的主要特點是：真核生物細胞基因的表達可隨細胞外環(huán)境條件的改變和時間程序面在不同表達水平上加以準確調(diào)節(jié)。基因表達是有多個層面上進展的多級調(diào)控：〔1〕轉(zhuǎn)錄前水平的調(diào)節(jié)：染色體喪失；基因擴增；基因重排；染色體DNA的修飾和異染色質(zhì)化。〔2〕轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)：染色質(zhì)的活化；啟動子和增強子的順式作用元件；調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的反式作用因子?！?〕轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)：戴帽；加尾；甲基化修飾；拼接?！?〕翻譯水平的調(diào)節(jié)：對可溶性蛋白質(zhì)因子的修飾；對mRNA穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)；.反義RNA對翻譯水平的調(diào)控?！?〕翻譯后水平的調(diào)節(jié)：切割；化學(xué)修飾；連接。12、真核生物轉(zhuǎn)錄前水平的基因調(diào)節(jié)主要有哪些方式？答：真核生物轉(zhuǎn)錄前水平的基因調(diào)節(jié)主要有染色體喪失、基因擴增、基因重排、染色體DNA的修飾和異染色質(zhì)化等方式。13、比擬真核生物和原核生物轉(zhuǎn)錄水平與翻譯水平的調(diào)節(jié)的異同點。答：原核生物的基因組和染色體構(gòu)造都比真核生物簡單，轉(zhuǎn)錄和翻譯在同一時間和空間發(fā)生，基因表達的調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。原核生物通過由構(gòu)造基因、調(diào)節(jié)基因及由調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物所識別的控制序列〔啟動子、操縱基因〕等所組成的操縱子對基因的表達進展調(diào)節(jié)。真核生物有細胞核構(gòu)造，轉(zhuǎn)錄和翻譯過程在時間和空間上都被分隔開，且在轉(zhuǎn)錄和翻譯后都有復(fù)雜的信息加工過程，其基因表達的調(diào)控可以發(fā)生在各種不同的水平上。真核生物不組成操縱子，不形成多順反子mRNA。真核生物在轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)節(jié)包括染色質(zhì)的活化和基因的活化，基因轉(zhuǎn)錄受順式作用元件，包括啟動子、增強子及其應(yīng)答元件的控制；也受反式作用因子如根本轉(zhuǎn)錄因子、上游轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等的調(diào)節(jié)。真核生物翻譯水平的調(diào)節(jié)主要是控制mRNA的穩(wěn)定性和有選擇的進展翻譯。14、DNA的復(fù)制過程可分為哪幾個階段？其主要特點是什么？答：DNA的復(fù)制過程包括復(fù)制的起始、延伸和終止三個階段。〔1〕復(fù)制的起始引發(fā)：當DNA的雙螺旋解開后，合成RNA引物。引發(fā)體沿著模板鏈5’→3’方向移動〔與岡崎片段合成的方向正好相反，而與復(fù)制叉移動的方向一樣〕，移到一定位置上即可引發(fā)RNA引物的合成?！?〕DNA鏈的延伸前導(dǎo)鏈只需要一個RNA引物，后隨鏈的每一個岡崎片段都需要一個RNA引物，鏈的延長反響由DNApol.Ⅲ催化。復(fù)制體沿著復(fù)制叉方向前進合成DNA。DNApolⅠ的5，→3，外切活力，切除RNA引物。DNApolⅠ的5，→3，合成活性補齊缺口。DNAligase，動物、真核由ATP供能，原核由NAD供能。〔3〕DNA合成的終止環(huán)狀DNA、線性DNA，復(fù)制叉相遇即終止。15、DNA重組可分為哪幾種類型？它們的主要特點是什么？答：DNA重組有3種類型，分別是同源重組、特異位點重組和轉(zhuǎn)座重組。同源重組又叫一般性重組，它是由兩條同源區(qū)的DNA分子，通過配對、鏈的斷裂和再連接，而產(chǎn)生片段交換的過程。同源重組的功能是在減數(shù)分裂中使四聯(lián)體*些位置的非姊妹染色單體之間可以發(fā)生交換。同源重組發(fā)生是依賴大圍的DNA同源序列的聯(lián)會。重組過程中，兩個染色體或DNA分子交換對等的局部。其特點是：需要重組的蛋白質(zhì)參與；蛋白質(zhì)因子對DNA堿基序列的特異性要求不高；真核生物染色質(zhì)的狀態(tài)影響重組的頻率。特異位點重組的特點：重組依賴于小圍同源序列的聯(lián)會，發(fā)生準確的斷裂、連接，DNA分子并不對等交換。轉(zhuǎn)座重組的特點：完全不依賴于序列間的同源性而使一段DNA序列插入另一段中，但在形成重組分子時往往是依賴于DNA復(fù)制而完成重組過程。16、何謂轉(zhuǎn)座重組？它有何生物學(xué)意義？答：由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因移位或重排稱為轉(zhuǎn)座重組。轉(zhuǎn)座重組的生物學(xué)意義有：可引起基因突變——插入或切離；改變?nèi)旧|(zhì)的構(gòu)造〔缺失、倒位等〕；可以插入新基〔ampR、terR等〕；在靶序列上引入新的轉(zhuǎn)座子序列，原來序列保持不變；在靶序列上造成同向重復(fù)序列；產(chǎn)生新的變異，有利于進化。17、細菌的轉(zhuǎn)座因子有幾種？它們的構(gòu)造有何特點？答：微生物的*些DNA片段作為一個獨立單位可在染色體上移動，此種移動甚至可發(fā)生在不同種細胞之間。這種可移動的DNA片段稱之為轉(zhuǎn)座因子。細菌的轉(zhuǎn)座因子有兩種類型：插入序列(insertsequence，IS)和轉(zhuǎn)座子(transposon，Tn)。插入序列不含任何宿主基因，是最簡單的轉(zhuǎn)座子，它們是細菌染色體或質(zhì)粒DNA的正常組成局部。所有插入序列的兩端都有反向重復(fù)。轉(zhuǎn)座子除編碼轉(zhuǎn)座功能有關(guān)的基因外還攜帶抗性或其它標記基因。按構(gòu)造可分為組合因子和復(fù)合因子。18、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的構(gòu)造有何特點？答：轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子分類。轉(zhuǎn)錄因子，分為兩類：①根本轉(zhuǎn)錄因子是RNA聚合酶結(jié)合啟動子所必需的一組因子，為所有mRNA轉(zhuǎn)錄起動共有②特異轉(zhuǎn)錄因子為個別基因轉(zhuǎn)錄所必需，決定該基因的時間、空間特異性表達，包括轉(zhuǎn)錄激活因子和抑制因子。所有轉(zhuǎn)錄因子至少包括兩個構(gòu)造域：DNA結(jié)合域和轉(zhuǎn)錄激活域；此外，很多轉(zhuǎn)錄因子還包含一個介導(dǎo)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的構(gòu)造域，最常見的是二聚化構(gòu)造域。①DNA結(jié)合域通常由60－100個氨基酸殘基組成。最常見的DNA結(jié)合域構(gòu)造形式是鋅指構(gòu)造和堿性α螺旋。類似的堿性DNA結(jié)合域多見于堿性亮氨酸拉鏈和堿性螺旋-環(huán)-螺旋。②轉(zhuǎn)錄激活域——由30-100個氨基酸殘基組成。根據(jù)氨基酸組成特點，轉(zhuǎn)錄激活域又有酸性激活域、谷氨酰胺富含區(qū)域及脯氨酸富含區(qū)域。③介導(dǎo)二聚化的構(gòu)造域——二聚化作用與亮氨酸拉鏈、螺旋-環(huán)-螺旋構(gòu)造有關(guān)。19、為什么逆轉(zhuǎn)座子只存在于真核生物中"它有何生物學(xué)意義？答：在轉(zhuǎn)座過程中需要以RNA為中間體，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄再分散到基因組中的轉(zhuǎn)座子，叫逆轉(zhuǎn)座子。由于只有真核生物能完全滿足逆轉(zhuǎn)座子存在的條件〔逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶，重復(fù)序列等〕，所以逆轉(zhuǎn)座子只存在于真核生物中。逆轉(zhuǎn)座子的生物學(xué)意義：影響所在位點或鄰近基因的活性；成為基因組的不穩(wěn)定因素，促進基因重組；促進生物進化。20、為什么說在酶誘導(dǎo)中的調(diào)節(jié)蛋白起負調(diào)節(jié)作用，而在降解物阻遏中的調(diào)節(jié)蛋白起正調(diào)節(jié)作用？答：酶的誘導(dǎo)和阻遏是在調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物阻遏蛋白〔調(diào)節(jié)蛋白〕的作用下，通過操縱基因控制構(gòu)造基因或基因組的轉(zhuǎn)錄而發(fā)生的。由于經(jīng)濟的原則，細菌通常并不合成那些在代上無用的酶，因此一些分解代的酶類只在有關(guān)的底物或底物類似物存在時才被誘導(dǎo)合成；而一些合成代的酶類在產(chǎn)物或產(chǎn)物類似物足夠量存在時，其合成被阻遏。在酶誘導(dǎo)時，阻遏蛋白與誘導(dǎo)物相結(jié)合，因而失去封閉操縱基因的能力。對代降解物敏感的操縱子受到降解物的阻遏，有關(guān)的調(diào)節(jié)蛋白起正調(diào)節(jié)作用。當細菌在含有葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基中生長時，通常優(yōu)先利用葡萄糖，只有葡萄糖耗盡后，細菌經(jīng)過一段停滯期，在乳糖誘導(dǎo)下才能利用乳糖，這種現(xiàn)象稱為葡萄糖效應(yīng)或降解物阻遏。21、何謂衰減子？說明它的作用機制和生物學(xué)意義。答：在色氨酸操縱子中存在一種轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)節(jié)基因表達的衰減作用〔attenuation〕，用以終止和減弱轉(zhuǎn)錄。這種調(diào)節(jié)作用稱為衰減子〔attenuator〕，是一種位于構(gòu)造基因上游前導(dǎo)區(qū)的終止子。衰減子的作用機制是前導(dǎo)區(qū)編碼mRNA的前導(dǎo)序列，該序列可合成一段小肽〔前導(dǎo)肽〕，它在翻譯水平上控制前導(dǎo)區(qū)轉(zhuǎn)錄的終止。衰減子控制轉(zhuǎn)錄起始后是否繼續(xù)下去，是比之阻遏作用是更為精細的調(diào)節(jié)。22、原位雜交的原理是什么？有何用途？答：將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進展雜交，稱為原位雜交。利用原位雜交，可在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DAN的存在與定位；可在原位研究細胞合成*種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。23、miRNA與siRNA之間有許多一樣之處：1.二者的長度都約在22nt左右。2.二者都依賴Dicer酶的加工，是Dicer的產(chǎn)物，所以具有Dicer產(chǎn)物的特點。3.二者生需要Argonaute家族蛋白存在。4.二者都是RISC組分，所以其功能界限變得不清晰，如二者在介導(dǎo)沉默機制上有重疊。5.miRNA和siRNA合是由雙鏈的RNA或RNA前體形成的。miRNA與siRNA的不同點：1.根本區(qū)別是miRNA是源的，是生物體的固有因素；而siRNA是人工體外合成的，通過轉(zhuǎn)染進入人體，是RNA干預(yù)的中間產(chǎn)物。2.構(gòu)造上，miRNA是單鏈RNA，而siRNA是雙鏈RNA。3.Dicer酶對二者的加工過程不同，miRNA是不對稱加工，miRNA僅是剪切pre-miRNA的一個側(cè)臂，其他局部降解；而siRNA對稱地來源于雙鏈RNA的前體的兩側(cè)臂。4.在作用位置上，miRNA主要作用于靶標基因3′-UTR區(qū)，而siRNA可作用于mRNA的任何部位。5.在作用方式上，miRNA可抑制靶標基因的翻譯，也可以導(dǎo)致靶標基因降解，即在轉(zhuǎn)錄水平后和翻譯水平起作用，而siRNA只能導(dǎo)致靶標基因的降解，即為轉(zhuǎn)錄水平后調(diào)控。6.miRNA主要在發(fā)育過程中起作用，調(diào)節(jié)源基因表達，而siRNA不參與生物生長，是RNAi的產(chǎn)物，原始作用是抑制轉(zhuǎn)座子活性和病毒感染。24、小RNA是一類重要的體調(diào)節(jié)分子，主要包括miRNA、piRNA和siRNA。它的功能主要是誘導(dǎo)基因沉默，參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，從而調(diào)節(jié)細胞生長、分化，以及個體發(fā)育、生殖等重要生物學(xué)過程。25、原核生物與真核生物mRNA有何特點？答：原核生物以操縱子為轉(zhuǎn)錄單位，產(chǎn)生順反子mRNA，即一條mRNA鏈上有多個編碼區(qū)，5ˊ端和3ˊ端各有一段非翻譯區(qū)〔UTR〕。原核生物mRNA，包括噬菌體RNA，都無修飾堿基。真核生物的mRNA都是單順反子，5ˊ端有帽子〔cap〕構(gòu)造，然后依次是5ˊ非編碼區(qū)、編碼區(qū)、3ˊ非編碼區(qū)、3ˊ端為聚腺苷酸〔poly(A)〕尾巴，其分子有時還有極少甲基化的堿基。26、什么是生物膜？研究生物膜的重要性。試述生物膜膜在蛋白三維構(gòu)造的解析的重要性與困難?！?8年真題、課后題〕27、RNA的別離〔上冊513頁，自己整理〕28、總結(jié)檸檬酸循環(huán)在機體代中的作用和地位?！?3年真題〕答：檸檬酸循環(huán)是絕大多數(shù)生物體主要的分解代途徑，也是準備提供大量自由能的重要代系統(tǒng)，在許多合成代中都利用檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物作為生物合成的前體來源，從這個意義上看，檸檬酸循環(huán)具有分解代和合成代雙重性或稱兩用性。檸檬酸循環(huán)是新代的中心環(huán)節(jié)。它們在循環(huán)過程中產(chǎn)生的復(fù)原型NADH和FADH2，進一步通過電子傳遞鏈和氧化磷酸化被再氧化，所釋放出的自由能形成ATP分子。檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物在許多生物合成中充當前體原料。地位：1、三羧酸循環(huán)是機體獲取能量的主要方式2、三羧酸循環(huán)是糖、脂肪和蛋白質(zhì)三種主要有機物在體徹底氧化的共同代途徑3、三羧酸循環(huán)是體三種主要有機物互變的聯(lián)結(jié)機構(gòu)?？傊?，TCA循環(huán)是連接糖代、脂代和氨基酸代的樞紐?！布僭O(shè)能將下冊110頁圖23-14用于這里，答案就接近總分值〕29、什么是化學(xué)滲透學(xué)說？解釋氧化磷酸化作用機理的化學(xué)滲透學(xué)說的主要論點是什么？(13年真題)化學(xué)滲透學(xué)說(chemiosmotictheory)：該學(xué)說假設(shè)能量轉(zhuǎn)換和偶聯(lián)機構(gòu)具有以下特點：①由磷脂和蛋白多肽構(gòu)成的膜對離子和質(zhì)子具有選擇性②具有氧化復(fù)原電位的電子傳遞體不勻稱地嵌合在膜③膜上有偶聯(lián)電子傳遞的質(zhì)子轉(zhuǎn)移系統(tǒng)④膜上有轉(zhuǎn)移質(zhì)子的ATP酶。在解釋光合磷酸化機理時，該學(xué)說強調(diào)：當氧化進展時，呼吸鏈起質(zhì)子泵作用，質(zhì)子被泵出線粒體膜之外側(cè)〔膜間隙〕，造成了膜外兩側(cè)間跨膜的電化學(xué)勢差，后者被膜上ATP合成酶所利用，使ADP與Pi合成ATP。主要論點:1〕呼吸鏈中的電子傳遞體在線粒體膜中有著特定的不對稱分布，遞氫體和電子傳遞體是間隔交替排列的，催化反響是定向的。2〕在電子傳遞過程中，復(fù)合物I，III和IV的傳氫體起質(zhì)子泵的作用，將H+從線粒體膜基質(zhì)側(cè)定向地泵至膜外側(cè)空間將電子傳給其后的電子傳遞體。3〕線粒體膜對質(zhì)子具有不可自由透過的性質(zhì)，泵到外側(cè)的H+不能自由返回。結(jié)果形成膜外的電化學(xué)勢梯度(由質(zhì)子濃度差產(chǎn)生的電位梯度)。4〕線粒體F1-F0-ATPase復(fù)合物能利用ATP水解能量將質(zhì)子泵出膜，但當存在足夠高的跨膜質(zhì)子電化學(xué)梯度時，強大的質(zhì)子流通過F1-F0-ATPase進入線粒體基質(zhì)時，釋放的自由能推動ATP合成。30、DNA測序第一代DNA測序：雙脫氧終止法

即sanger測序法。Sanger法是根據(jù)核苷酸在*一固定的點開場，隨機在*一個特定的堿基處終止，并且在每個堿基后面進展熒光標記，產(chǎn)生以A、T、C、G完畢的四組不同長度的一系列核苷酸，然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進展檢測，從而獲得可見的DNA堿基序列。

第二代DNA測序：邊合成邊測序

在Sanger等測序方法的根底上，通過技術(shù)創(chuàng)新，用不同顏色的熒光標記四種不同的dNTP，當DNA聚合酶合成互補鏈時，每添加一種dNTP就會釋放出不同的熒光，根據(jù)捕捉的熒光信號并經(jīng)過特定的計算機軟件處理，從而獲得待測DNA的序列信息。

第三代DNA測序：單分子測序

用一種聚合酶將DNA的復(fù)制限制在一個微小的間隙中，給各種堿基加上熒光示蹤標記，當堿基合成DNA鏈時，這些熒光標記就會發(fā)出不同顏色的閃光，根據(jù)閃光顏色就可識別出不同的堿基。31、比擬兩種DNA快速測序的方法，包括方法的原理和優(yōu)缺點。答：目前應(yīng)用的兩種快速序列測定技術(shù)是Sanger等〔1977〕提出的雙脫氧法〔酶法〕及Ma*am和Gilbert(1977)提出的化學(xué)降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的假設(shè)干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組寡核苷酸都有固定的起點，但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿基出現(xiàn)在可變終止端的時機均等，因些上述每一組產(chǎn)物都是一些寡核苷酸混合物，這些寡核苷酸的長度由*一種特定堿基在原DNA全片段上的位置所決定。然后在可以區(qū)分長度僅差一個核苷酸的不同DNA分子的條件下，對各組寡核苷酸進展電泳分析，只要把幾組寡核苷酸加樣于測序凝膠中假設(shè)干個相鄰的泳道這上，即可從凝膠的放射自影片上直接讀出DNA上的核苷酸順序。Sanger法DNA測序Sanger法測序的原理就是利用一種DNA聚合酶來延伸結(jié)合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反響構(gòu)成，每個反響含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基團，使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止。終止點由反響中相應(yīng)的雙脫氧而定。每一種dNTPs和ddNTPs的相對濃度可以調(diào)整，使反響得到一組長幾百至幾千堿基的鏈終止產(chǎn)物。它們具有共同的起始點，但終止在不同的的核苷酸上，可通過高分辨率變性凝膠電泳別離大小不同的片段，凝膠處理后可用*-光膠片放射自顯影或非同位素標記進展檢測。Sanger法測序快速、省事，不需要比強很高的32P-dNTP,但有時會出現(xiàn)一些不夠清晰的結(jié)果。Ma*am－GilbertDNA化學(xué)降解法化學(xué)降解法的原理是首先標記雙鏈DNA的5’端，然后參加二甲基亞砜并加熱到90°C，使雙鏈DNA分子變成單鏈。通過凝膠電泳別離兩條鏈，其中一條鏈含有更多的嘌呤成為重鏈，另一條鏈為輕鏈。純化兩條鏈，分成四份，分別利用不同的降解試劑進展降解〔哌啶,氮雜環(huán)己烷〕，產(chǎn)生了一系列的降解片段?？梢酝ㄟ^電泳別離顯示出來?；瘜W(xué)降解法可以提供比擬清晰的結(jié)果，但步驟繁瑣，許多藥品有劇毒。32、電子傳遞鏈和氧化磷酸化之間有何關(guān)系？答：生物氧化亦稱細胞呼吸，指各類有機物質(zhì)在細胞進展氧化分解，最終產(chǎn)生CO2和H2O，同時釋放能量〔ATP〕的過程。包括TCA循環(huán)、電子傳遞和氧化磷酸化三個步驟，分別是在線粒體的不同部位進展的。其中電子傳遞鏈和氧化磷酸化之間關(guān)系密切，電子傳遞和氧化磷酸化偶聯(lián)在一起。根據(jù)化學(xué)滲透學(xué)說〔電化學(xué)偶聯(lián)學(xué)說〕，在電子傳遞過程中所釋放的能量轉(zhuǎn)化成了跨膜的氫離子濃度梯度的勢能，這種勢能驅(qū)動氧化磷酸化反響，合成ATP。即葡萄糖等在TCA循環(huán)中產(chǎn)生的NADH和FADH2只有通過電子傳遞鏈，才能氧化磷酸化，將氧化產(chǎn)生的能量以ATP的形式貯藏起來。33、說明“酮尿癥〞的生化機制〔08年真題〕。答：酮體是乙酰乙酸、β羥丁酸及丙酮的總稱。嚴重饑餓或胰島素水平過低，耗盡體糖的貯存，肝中糖異生作用加強，脂肪酸氧化產(chǎn)生大量乙酰-CoA，由于糖異生已經(jīng)耗盡草酰乙酸，使乙酰-CoA不能進入TCA循環(huán)，轉(zhuǎn)向生成酮體方向，導(dǎo)致血和尿中酮體過多，即“酮尿癥〞，動物沒有乙醛酸循環(huán)。34、試比擬脂肪酸合成與脂肪酸β-氧化的異同?！玻俊炒穑褐舅岷铣膳c脂肪酸β-氧化的差異主要表現(xiàn)在以下幾個方面〔1〕發(fā)生場所不同：胞質(zhì)中；線粒體〔2〕酰基載體不同：ACP；CoA〔3〕發(fā)生的反響不同：縮合、復(fù)原、脫水、再復(fù)原；脫氫、水化、再脫氫、硫解〔4〕參與酶類不同：2種酶系；5種〔5〕輔因子不同：NADPH；FAD，NAD+〔6〕原料轉(zhuǎn)運不同：三羧酸轉(zhuǎn)運機制；肉堿載體系統(tǒng)〔6〕ATP不同：耗7ATP；生成106ATP〔7〕方向不同：甲基端向羧基端；相反35、說明尿素形成的機制和意義。答：尿素是通過尿素循環(huán)形成的。尿素循環(huán)亦稱鳥氨酸循環(huán)，是排尿素動物在肝臟中合成尿素的一個循環(huán)機制。肝細胞胞漿中的氨基酸經(jīng)轉(zhuǎn)氨作用與α-酮戊二酸形成的谷氨酸，透過線粒體膜進入線粒體基質(zhì)，在谷氨酸脫氫酶作用下脫氨形成游離氨。形成的氨〔NH+4〕與三羧酸循環(huán)產(chǎn)生的二氧化碳、2分子ATP，在氨基甲酰合成酶I的催化下生成氨基甲酰磷酸。氨基甲酰磷酸在線粒體的鳥氨酸轉(zhuǎn)氨基甲酰酶的催化下，將氨基甲?；D(zhuǎn)移給鳥氨酸生成瓜氨酸。瓜氨酸形成后即離開線粒體進入胞漿，在ATP的存在下，由精氨酸代琥珀酸合成酶的催化，與天冬氨酸縮合成精氨酸代琥珀酸。天冬氨酸在反響中作為氨基的供體。精氨酸代琥珀酸通過裂解酶的催化生成精氨酸和延胡索酸。精氨酸在胞漿精氨酸酶的催化下水解產(chǎn)生尿素和鳥氨酸。鳥氨酸可重新進入尿素循環(huán)。蛋白質(zhì)在體分解成氨基酸,再分解產(chǎn)生氨,過量的氨具有神經(jīng)毒性,氨的解毒是在肝合成尿素,再隨尿排出。因此，通過合成尿素可以維持正常的血氨水平。36、尿素循環(huán)的過程及發(fā)生部位〔11年真題，自己總結(jié)，真題答案不詳細〕37、生物體嘌呤