復(fù)方麝香注射液中5個有效成分的測定

復(fù)方麝香注射液中5個有效成分的測定

復(fù)方香注射液是一種新型的中藥復(fù)方制劑，采用傳統(tǒng)的中醫(yī)“安宮牛黃丸”。它的主要成分包括麝香、婆羅洲、郁金香、菖蒲和廣茉3430；香。大量臨床研究表明復(fù)方麝香注射液在腦部疾病、病毒、中毒及解熱鎮(zhèn)痛方面作用顯著。而復(fù)方制劑化學(xué)成分復(fù)雜,確定指標(biāo)成分是質(zhì)量控制的關(guān)鍵。目前,原有的復(fù)方麝香注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的指標(biāo)是以麝香酮為單一控制指標(biāo)的目標(biāo)成分。曾有報(bào)道GC法測定麝香酮、薄荷腦等成分,為了更加全面地控制產(chǎn)品質(zhì)量,本實(shí)驗(yàn)選取含量較高,且有豁痰開竅、醒神安腦功效的麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦和薄荷腦作為質(zhì)控指標(biāo),采用GC-MS同時對5個成分進(jìn)行定性定量分析。并利用該方法對市售復(fù)方麝香注射液進(jìn)行質(zhì)量評價(jià),進(jìn)一步說明此方法對復(fù)方麝香注射液質(zhì)量控制研究的優(yōu)越性。1儀器和試劑1.1自動進(jìn)樣器和電子分析天平Agilent7890/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀,配有電子轟擊電離源(EI);7963型自動進(jìn)樣器(美國Agilent公司);DRAGONMED移液器(大龍醫(yī)療設(shè)備(上海)公司);CP2250D電子分析天平(德國Sartorius公司);Maxi-MixII渦旋混合器(美國BarnsteadThermolyne公司)。1.2復(fù)方香精注射液對照品麝香酮(≥98%,批號120709)、百秋李醇(≥98%,批號120927)、龍腦(≥98%,批號120411)、薄荷腦(≥98%,批號120709)均為四川省維克奇生物科技有限公司產(chǎn)品,β-細(xì)辛醚(70.9%,批號03124JRV)為Sigma公司產(chǎn)品;復(fù)方麝香注射液由生產(chǎn)企業(yè)提供(10mL·支-1)。實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水。2方法和結(jié)果2.1測試方法色譜條件:采用AgilentHP-5MS毛細(xì)管柱(30m×0.25μm×0.25mm),進(jìn)樣口溫度280℃,分流比5∶1,柱溫采取程序升溫(初始溫度100℃,保持2min,以5℃·min-1速率升溫至190℃,保持1.5min,以40℃·min-1速率升溫至250℃),載氣為高純氦氣,流速1mL·min-1,進(jìn)樣量1μL。質(zhì)譜條件:EI源,轟擊電壓70eV;離子源溫度230℃;四極桿溫度150℃;輔助接口溫度280℃。采用全掃描模式獲得混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖,確定各目標(biāo)化合物的保留時間和特征離子;再進(jìn)行選擇離子檢測(SIM)定量,選擇m/z238、208、222、138、154分別為麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦和薄荷腦的檢測離子。在上述色譜條件下,混合對照品儲備液與供試品溶液全掃描總離子圖、混合對照品儲備液SIM色譜圖見圖1。2.2溶液的制備2.2.1對照品溶液的制備精密稱定麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦和薄荷腦的對照品適量于10mL量瓶中,加約2mL甲醇溶解,再加2%的聚山梨酯80溶液至刻度,60℃水浴加熱溶解,配制成混合對照品儲備液(麝香酮0.104mg·mL-1,β-細(xì)辛醚1.500mg·mL-1,百秋李醇0.093mg·mL-1,龍腦0.953mg·mL-1,薄荷腦0.946mg·mL-1)。2.2.2試驗(yàn)溶液2.3進(jìn)樣、色譜測定精密移取“2.2.1”項(xiàng)下混合對照品儲備液1、2、4、6、8、10mL,分別置10mL的量瓶中,加2%聚山梨酯80稀釋至刻度,搖勻得系列對照品工作液。分別吸取1μL,按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣,記錄色譜圖,測定峰面積。以峰面積A對對照品濃度C(mg·mL-1)進(jìn)行線性回歸,得麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦、薄荷腦的回歸方程分別為:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦和薄荷腦的濃度分別在0.0104~0.104、0.1529~1.529、0.0093~0.093、0.0953~0.953、0.0946~0.946mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.4精密度試驗(yàn)取供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣6次,計(jì)算麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦、薄荷腦峰面積的RSD(n=6)分別為0.91%、0.88%、1.6%、1.8%、1.2%,表明該法精密度好,滿足檢測要求。取同一批樣品6份,按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣,計(jì)算麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦、薄荷腦平均含量(n=6)分別為0.0390、0.625、0.0361、0.525、0.483mg·L-1,RSD分別為0.39%、1.0%、0.72%、0.89%、1.0%,方法重復(fù)性好,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。2.5香辛料檢測取供試品溶液,室溫下放置0、1、2、4、8、12h后分別在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測定。麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦、薄荷腦所得峰面積的RSD(n=6)分別為2.6%、1.5%、1.1%、2.4%、2.7%。表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.6加標(biāo)回收率試驗(yàn)精密移取同一已知含量的樣品9份,每份0.5mL,分別加入高、中、低濃度的混合對照品溶液0.5mL,每個加入水平各3份,混勻,在上述色譜條件下進(jìn)樣測定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。2.7樣品含量的測量取各批次復(fù)方麝香注射液,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下,每批次隨機(jī)取1份,進(jìn)樣3次求平均值,結(jié)果見表2。3復(fù)方香精注射液的檢測方法在進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)時,其效果好,他從前例物理工藝和長本實(shí)驗(yàn)采用GC-MS所建立的方法,可同時測定復(fù)方麝香注射液中麝香酮、β-細(xì)辛醚、百秋李醇、龍腦和薄荷腦5個成分的含量,該方法操作簡單、可靠、快速,能較好地反映該注射液質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)從優(yōu)選柱溫出發(fā),比較不同的程序升溫方法和毛細(xì)管柱,發(fā)現(xiàn)該實(shí)驗(yàn)所采取的的柱溫和毛細(xì)管柱能使各成分在23min內(nèi)得到很好的分離。當(dāng)選用如