免疫學(xué)應(yīng)用-本科

免疫學(xué)應(yīng)用免疫教研室趙俊杰

2012.5掌握：抗原或抗體檢測的基本原理；凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)的概念及方法。人工主動免疫和人工被動免疫的概念和特點。

熟悉：熟悉免疫標(biāo)記技術(shù)的常見方法；免疫預(yù)防和免疫治療的基本概念和種類。了解：細胞因子的檢測。免疫重建的概念；常用免疫增強劑、免疫抑制劑及新型疫苗的發(fā)展。

目的要求免疫學(xué)檢測免疫預(yù)防免疫治療免疫學(xué)檢測利用免疫學(xué)原理建立的免疫學(xué)檢測技術(shù)主要應(yīng)用于對多種免疫性疾?。ǜ腥拘约膊　⒚庖呷毕莶?、超敏反應(yīng)、自身免疫病、移植排斥反應(yīng)和腫瘤等）的診斷、療效評估、發(fā)病機制探討、以及對抗原性物質(zhì)或免疫細胞的定性、定量，對細胞因子、粘附分子及細胞受體的檢測等。

抗原或抗體檢測免疫細胞的檢測免疫分子的檢測一抗原或抗體的檢測抗原-抗體反應(yīng)：指抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)外高度特異性結(jié)合。在合適體外條件下可呈現(xiàn)凝集、沉淀等現(xiàn)象?？乖蚩贵w的檢測即用肉眼觀察或借助儀器對樣品中的抗原或抗體進行定性、定量或定位檢測?？乖?抗體檢測技術(shù)應(yīng)用1.已知的抗原檢測未知的抗體2.已知的抗體檢測未知的抗原3.體內(nèi)各種大分子物質(zhì)4.已知抗體檢測半抗原抗原抗體反應(yīng)的特點

特異性：抗原表位和抗體可變區(qū)之間的空間構(gòu)象互補可見性：抗原抗體比例可逆性：非共價可逆性結(jié)合

抗原抗體比例對反應(yīng)現(xiàn)象的影響

1電解質(zhì)：抗原-抗體反應(yīng)通常應(yīng)用0.85%的氯化鈉作為稀釋液，以供給適應(yīng)濃度的電解質(zhì)。2溫度：一般常使用反應(yīng)在37度水浴或孵育箱中進行。3酸堿度：抗原-抗體反應(yīng)適應(yīng)的酸堿度一般為PH6～8。4.抗原和抗體的性質(zhì)抗原-抗體反應(yīng)的影響因素抗原-抗體反應(yīng)檢測方法凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補體參與的反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)凝集反應(yīng)（agglutination）細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。

直接凝集：將細菌或紅細胞與相應(yīng)的抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細菌凝集或紅細胞凝集現(xiàn)象。又分為玻片法和試管法。

間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表面，與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象。沉淀反應(yīng)（precipitation

）

可溶性抗原（血清蛋白質(zhì)、細胞裂解液或組織浸液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀。補體參與的反應(yīng)

補體結(jié)合試驗是一種有補體參與，并以綿羊紅細胞和溶血素（紅細胞的特異抗體）是否發(fā)生溶血反應(yīng)作指示的一種高靈敏度的抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)。免疫標(biāo)記技術(shù)

用熒光素、酶或放射性核素等標(biāo)記抗體或抗原，進行抗原抗體反應(yīng)，提高了抗原抗體反應(yīng)的敏感性。免疫熒光法：常用FITC、PE等酶免疫測定：常用HRP、AP等放射免疫測定：常用125I和131I化學(xué)發(fā)光免疫分析免疫印跡(WesternBlot)二免疫細胞的檢測

檢測各群體淋巴細胞的數(shù)量與功能是觀察機體免疫狀態(tài)的重要手段。外周血是病人主要的檢測標(biāo)本，但僅代表再循環(huán)的淋巴細胞。實驗動物還可取胸腺、脾、淋巴結(jié)等作為標(biāo)本進行檢查。PBMC多形核白細胞紅細胞血漿分離液玻璃平皿單核細胞吸附,未吸附的為淋巴細胞.根據(jù)比重的不同將血液離心分層取PBMC（1）免疫細胞亞類及計數(shù)

1.外周血單個核細胞的分離常用密度梯度離心法

2.亞群的分離尼龍棉柱分離----B細胞

E花環(huán)分離---------T細胞流式細胞術(shù)免疫磁珠TE花環(huán)

3.淋巴細胞亞群的計數(shù)根據(jù)表面標(biāo)志不同，分類計數(shù)免疫熒光

CDC

（2）免疫細胞功能測定

1、T細胞功能試驗：T細胞增殖試驗3H-TdR摻入法

MTT法細胞毒試驗2、B細胞功能測定：溶血空斑試驗3、皮膚實驗：檢測細胞免疫功能三免疫分子的檢測1.Ig檢測已知抗原檢測已知抗體定性、定量檢測：免疫比濁等2.C檢測免疫比濁、ELISA、RIA等。3.CK檢測

增殖法、集落形成法、胞毒活性測定PCR、原位雜交技術(shù)等。4.CD分子等檢測

相應(yīng)抗體鑒定5.HLA分型

免疫預(yù)防應(yīng)用生物制品接種，使機體產(chǎn)生對相應(yīng)疾病免疫力的方法。

中國古代種人痘Boywithsmallpox

1979年WHO宣布在全球范圍內(nèi)消滅了天花病毒。人工免疫概念及種類

人工免疫：指有計劃、有目的地給機體輸入抗原、特異性抗體或免疫細胞等制品，使機體獲得對某種疾病的特異性抵抗力，從而達到預(yù)防或治療某些疾病的方法。人工主動免疫人工被動免疫

人工主動免疫：是給機體輸入疫苗或類毒素等抗原物質(zhì)，剌激機體產(chǎn)生特異性免疫力。

1、滅活疫苗：用物理或化學(xué)的方法將病原微生物殺死制備而成的制劑。又稱死疫苗。

2、減毒活疫苗：用人工變異或從自然界篩選獲得的減毒或無毒的活的病原微生物制成的制劑。又稱活疫苗。

3、類毒素：用0.3-0.4%甲醛處理外毒素，使其失去毒性，保留抗原性的物質(zhì)。

4、新型疫苗：亞單位疫苗、合成疫苗、基因工程疫苗人工被動免疫：指應(yīng)用人工的方法直接給機體輸入免疫效應(yīng)分子，使其獲得特異性免疫力，到達緊急預(yù)防和治療的目的。

1、抗毒素：是抗細菌外毒素的抗體。多為馬血清制劑，具有抗體性和免疫原性。

2、人丙種球蛋白：從正常人血漿或健康產(chǎn)婦胎盤中提取制成。

3、人特異性免疫球蛋白：來源于恢復(fù)期病人及含高價特異性抗體供血者血漿，或接受類毒素和疫苗免疫者的血漿。項目人工主動免疫人工被動免疫輸入物質(zhì)抗原抗體產(chǎn)生免疫力時間慢（2-3周）快（輸注