免疫組化與原位雜交課件整理-002

免疫組織化學和原位雜交ImmunohistochemistryInsituhybridization免疫組化與原位雜交免疫組織化學和原位雜交ImmunohistochemistryInsituhybridization免疫組織化學前提條件:所使用的抗體必須能用于免疫組化基本原理Pathogen利用抗體(antibody)與相應(yīng)抗原(antigen)的特Antigen異性結(jié)合,通過與抗體連接的酶反應(yīng)或熒光染料顯示抗原所在的位置Antibodyo.scienceaid.net常用于標記抗體的標記物一)酶(enzyme)1.辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)辣根過氧化物酶的作用物(底物,substrate)1)二氨基聯(lián)苯胺(3,3′-diaminobenzidine,DAB)顯色特點:棕色不溶于水及脂類溶劑(酒精ethanol,二甲苯xylene)不擴散永久保存2)3氨基9乙基卡巴唑(3-Amino9Ethylcarbazole,AEC)我國經(jīng)濟發(fā)展帶來的勞動者遷移，給我們今天的教育帶來重大的課題，特別是蘇北農(nóng)村這種“留守”現(xiàn)象更為嚴重。留守學生在學習中普遍存在著成績不優(yōu)秀，學習習慣差，學習態(tài)度不端正等各種現(xiàn)象，為此，筆者就這一問題略作思考與探究，以與同仁共同收獲。1原因分析1.1社會原因其一，由于監(jiān)護人沒有盡到監(jiān)護的職責。多數(shù)留守兒童是由祖輩監(jiān)護，他們沒有文化，不能主動地去關(guān)注孩子的學習，他們認為只要一日三餐讓孩子吃飽，有個安全的地方供孩子住宿，不讓孩子挨凍受餓，就算是盡到了監(jiān)護的職責。至于孩子的學習成績、行為習慣、心理健康等方面，那都是老師們應(yīng)該做的事情。這種想法在農(nóng)村留守兒童監(jiān)護人中占到了大多數(shù)。其實這種想法是大錯而特錯的。他們并不知道教育孩子、關(guān)注孩子的成長和發(fā)展不僅僅是某個人或某部分人的事情，而是家庭、學校、社會共同關(guān)注、齊心協(xié)力進行的一件重大的事情。其二，有的留守兒童的家庭教育存在著嚴重的問題，不能用發(fā)展的眼光看問題，認為現(xiàn)在讀書沒有好大的用場，為讀書花了幾萬元、甚至幾十萬元，畢業(yè)后還不能找到一份稱心如意的好工作，倒不如和他們一起早點出門打工，早點掙錢，因此對孩子的學習也就不管不問，任其發(fā)展。很多家長無暇顧及或是根本不在意孩子的學習成績更別說態(tài)度與習慣了。1.2學校原因首先，教師忽視對學生學習態(tài)度的關(guān)注和學習習慣的培養(yǎng)。在應(yīng)試教育的影響下，很多教師在教學過程中更多關(guān)心的是學生對知識的掌握情況，而往往忽視對學生學習態(tài)度的關(guān)注，遇到學習態(tài)度不好的學生時，常常會推給班主任或家長，而很少主動將學生的學習態(tài)度培養(yǎng)納入自己的工作計劃中，更少有意識地對學生的學習態(tài)度進行系統(tǒng)培養(yǎng)。多數(shù)教師重視的都是學習結(jié)果（考試成績），而忽視了學生的學習態(tài)度和學習習慣的培養(yǎng)。其次，教師的教學行為對學生學習態(tài)度和學習習慣造成一定的影響。有的教師在課堂教學中，心中只裝著教案，沒有注意調(diào)控課堂紀律，沒有采取有效的措施引導學生參與學習活動，導致學生注意力分散，久而久之，學生失去學習的興趣。有的教師教法比較陳舊，如“滿堂灌”、“填鴨式”等，學生在課堂中的主體地位沒有確立，課堂氛圍不夠民主、和諧，致使學生長期處于被動的接受狀態(tài)，學生沒有提問、沒有思考的時間，也沒有發(fā)言的機會。有的教師教學設(shè)計不合理或不正確，這樣也會影響學生的聽課習慣，如：提問不明確，啟發(fā)性不強，問題質(zhì)量差等，學生不知從何答起或回答不了；小組合作學習的規(guī)則、參與方法不明確，討論的問題交待不清等，致使學生無所適從。有的教師不注意自身的示范作用，如：教師在課堂上隨手畫圓，畫出的圓似圓非圓；要求學生寫正確、規(guī)范的字，自己卻在黑板上“龍飛鳳舞”等。這樣的教學環(huán)境，教師這樣的教學行為，學生怎能養(yǎng)成良好的學習習慣呢？2策略探究2.1注重學生學習態(tài)度和習慣的培養(yǎng)作為教師不能只盯著學生的分數(shù)，更要關(guān)注的是學生的學習態(tài)度與習慣。必須對學生的學習態(tài)度和學習習慣給予高度的重視，要把端正學生的學習態(tài)度和培養(yǎng)學生良好的學習習慣納入各科的教學計劃，并制訂行之有效的具體措施。2.2幫助學生端正學習態(tài)度學習態(tài)度不是生來就有的，而是后天習得的，是個體在家庭、學校和社會生活中，通過交往，接受別人的示范、指導、勸說而逐漸形成的。教師要幫助學生建立正確的學習態(tài)度，改變不良的學習態(tài)度，要及時向?qū)W生提出明確的具體要求，引導學生通過相應(yīng)的活動去改變原有的態(tài)度。教師持續(xù)的要求和及時的表揚是改變舊的不良態(tài)度、形成新態(tài)度的前提。我們首先必須幫助學生樹立遠大的理想，使學生有明確的學習目標；要求學生要學習認真、扎實，勤奮好學，刻苦努力，不恥下問，上課精神集中，認真聽講，努力做到融會貫通、舉一反三，課后按時完成作業(yè)、力求正確無誤，在各門課程的學習上一絲不茍、求真務(wù)實，力求全面發(fā)展等。2.3革新課堂教學，在養(yǎng)成習慣過程中改變學生的學習態(tài)度課堂是素質(zhì)教育的主陣地，也是學生形成良好的學習態(tài)度和良好的學習習慣的主陣地。因此，教師必須轉(zhuǎn)變教學觀念，樹立新課程理念，大膽進行課堂教學改革，進一步優(yōu)化課堂教學，改進教學方法和教學手段。第一，要建立平等的師生關(guān)系，創(chuàng)設(shè)民主、平等、寬松、和諧的學習環(huán)境，讓學生感到自己在這個環(huán)境里是安全的、融洽的、自主能動的，能和同學、教師甚至教材進行平等的對話。在這樣的環(huán)境里，課堂就會變成學生放飛心靈的天空，從而使學生喜歡上課，喜歡讀書，形成積極主動的學習態(tài)度。第二，要努力探索多種教學方法，采取形式多樣的教學手段，激發(fā)學生的學習興趣，充分調(diào)動學生的學習積極性，引導每一個學生積極參加各種學習活動。學會賞識學生，課堂上給學生多一些表揚，少一些批評；多一些鼓勵，少一些訓斥，盡量創(chuàng)造機會讓學生體會成功的喜悅，使學生對學習產(chǎn)生濃厚的興趣。第三，要努力轉(zhuǎn)變角色，做課堂教學的組織者、引導者和合作者，實施自主、合作、探究學習方式。教師要給時間、空間讓學生質(zhì)疑問難、合作學習和探究，讓學生積極參與教學全過程，從而逐步養(yǎng)成獨立思考、大膽提問、敢于發(fā)言、樂于表達的良好習慣，同時培養(yǎng)學生的合作精神和探究問題的品質(zhì)。2.4加強教學常規(guī)管理，依據(jù)學生的自覺性來培養(yǎng)學生的好習慣學校必須把培養(yǎng)學生的良好習慣納入教學常規(guī)管理中，經(jīng)常檢查、督促教師的課堂教學和學生作業(yè)批改情況。教師應(yīng)該經(jīng)常布置和檢查學生的學科預習、復習情況，鼓勵和指導學生課外閱讀。通過教學常規(guī)教學管理，促進學生良好學習習慣的形成。由于學生先天的基因遺傳，后天的家庭教育，知識儲備和個人興趣愛好、性格習慣以及學習方法的運用上都存在著非常大的差異，因此小學數(shù)學教師在教學過程中要因材施教的實施分層教學，促使每一位學生在課堂學習過程中都能夠提升學習的信心，并獲得最佳的發(fā)展。一、實施分層教學的目的在實際教學過程中，可以發(fā)現(xiàn)每一個學生都會存在差異，這可能是來自其自身遺傳或者生長環(huán)境造成的，所以學生對于知識的理解能力也會有所不同，尤其是對于數(shù)學的理解能力、興趣以及掌握程度更是存在差異。主要使用過教學大綱制定基本的教學規(guī)劃，之后根據(jù)學生自身的能力水平和個性進行不同層次的教學，設(shè)計不同層次的作業(yè)，針對數(shù)學學習能力較差的學生采取循序漸進的教學模式幫助學生先從興趣和基礎(chǔ)學習，夯實基礎(chǔ)，之后再考慮其成績的進一步提升；而針對學習能力快的學生可以一邊夯實基礎(chǔ)一邊加大拔高題的布置量，讓學生感受到數(shù)學的魅力，不會因為題目過于簡單而逐漸失去興趣；而針對學習能力處于中間的同學，可以基礎(chǔ)和拔高各半的練習，經(jīng)過一段時間根據(jù)其掌握能力在進行調(diào)整。采用這種因材施教的教學理念可以充分調(diào)動學生的學習積極性以及主動性，使得學生在各自的學習能力范圍內(nèi)做到充分發(fā)展，從而提高教學質(zhì)量。二、根據(jù)學生的特點進行分層小學數(shù)學新課程標準中提出：數(shù)學教育要面向全體學生，促使不同的學生在數(shù)學上都能夠得到不同的發(fā)展。而學生是有著獨立思想和鮮明個性的鮮活生命，他們受先天與后天多種因素的共同影響而在基礎(chǔ)知識、認知規(guī)律與學習水平上表現(xiàn)出明顯的差異，因此教師要想實踐新課標的要求，實施分層教學，就要先對學生進行有效分層。教師可以根據(jù)學生的思維特點和綜合表現(xiàn)將學生分成三個層次：優(yōu)等生：學習能力和思維能力強，基礎(chǔ)好的學生；中等生：基礎(chǔ)知識比較牢固，具備一定的學習能力和理解能力，有發(fā)展?jié)摿Φ膶W生；學困生：基礎(chǔ)知識較差，講授新課過程中不能跟上課堂節(jié)奏，學習意愿與學習興趣不足的學生。教師在對學生進行分層的時候要注意隱形分層，不能傷害學生的自尊心，更不能挫傷學生學習的積極性。我們對學生進行分層是為了有針對性的實施因材施教，不存在歧視心理，因此教師在各個方面都要力求做到公平合理，照顧到每個層次學生的心理需求。三、通過分層設(shè)計教案促使每位學生都能學到新知小學數(shù)學教學設(shè)計是教師上課的必要準備與客觀要求。教師只有認真做好教學設(shè)計，才能夠為提升課堂教學的有效性做充分的保障。因此教師要想實施分層教學，就需要在課前充分了解每一位學生的性格習慣與認知水平，認真研究教學內(nèi)容，分層設(shè)計教案。例如我們在設(shè)計小學數(shù)學《找規(guī)律》這節(jié)的教案時，首先教師可以準備一些基礎(chǔ)的找規(guī)律知識，如一個三角形一個正方形一個三角形一個正方形的有規(guī)律的排列，引導學困生輕而易舉的找到規(guī)律，感覺找規(guī)律也不是那么困難，由此提升他們學習的自信心，這是提升課堂教學有效性的基礎(chǔ)。其次，對于中等生來說，教師可以準備一些既能幫助他們鞏固基礎(chǔ)知識，又能有所提高的知識內(nèi)容。如一排彩旗一排花一排燈籠，一排彩旗一排花一排燈籠，彩旗按照紅、黃、藍、綠的順序排列，花按照三瓣、四版、五瓣、六瓣的順序排列，燈籠按照一大一小一大一小的順序排列。通過稍微復雜一點的內(nèi)容來引導中等生在鞏固基礎(chǔ)知識的同時學到新知。再次，對于優(yōu)等生而言，教師可以在教案中設(shè)計一些難度較大一點的教學內(nèi)容，如一些不同圖形的展開圖，一些具有計算規(guī)律的數(shù)字等等。通過這些難度較大的內(nèi)容來滿足優(yōu)等生挑戰(zhàn)自我的能力。四、通過分層練習促使每位學生都能學有所獲必要的課后練習是提高學生學習成績的重要組成部分，而且課后練習一般都是與課中所學知識聯(lián)系在一起的，能夠很好的幫助學生鞏固新知，因此教師可以將課后習題分為三部分，分別照顧到不同層次的學生，促使每位學生都能夠通過課后練習達到鞏固新知的目的。例如教師在設(shè)計《混合運算》的課后練習時，可以先設(shè)計這樣的練習題目：13×4+622×5+3310÷2+5415÷3+555+10÷268+5×67（11+23）×283×（5+6）912÷（2+4）1049÷（3+4），然后再設(shè)計一些應(yīng)用到混合運算的應(yīng)用題目。就這樣按照題目的順序，依次增加題目的難度，要求學生根據(jù)自己的能力做到一定的程度。通過分層練習，不僅提升了學困生的信心，還能夠為中等生加油打氣，更能夠避免優(yōu)秀生的驕傲自滿，有效的促使了不同層次的學生都能夠通過練習學有所獲。五、課堂教學實現(xiàn)分層化教學過程分層是課堂教學中最為關(guān)鍵的部分，也是最難掌握的。在教學過程中，教師應(yīng)當添加一些課外知識或者活動，豐富課堂教學內(nèi)容，滿足學生的個性發(fā)展需求。對于學習成績較好的學生可以通過課外知識的引入調(diào)動學生對于知識的渴望和興趣，對于學習能力較弱的處于中間部分的學生則可以進行引導性學習，培養(yǎng)其獨立思考的能力，而對于數(shù)學理解能力比較差的學生則可以進行基礎(chǔ)知識點的提煉，幫助學生認識難題中的基礎(chǔ)點。六、課堂練習的分層在教學過程中一定要圍繞教學內(nèi)容進行，由簡單到增設(shè)一定的難度，實行一個循序漸進的學習過程，這里的簡單就是主要以回顧基礎(chǔ)知識為主，幫助學生鞏固課堂內(nèi)容；而難題則設(shè)置一定的梯度，按照能力布置作業(yè)。之后由學生上講臺進行部分題型的解答，以此實現(xiàn)學生之間的相互學習以及解題方法的多元化，激勵學生的學習積極性。七、課后作業(yè)的分層布置教室在選擇分層教學模式之后，需要根據(jù)學生的能力進行分層作業(yè)的布置，不能一刀切，重點應(yīng)放在學生作業(yè)質(zhì)量上的安排，而非量的多上面，設(shè)置三個層次的作業(yè)，一方面可以幫助學生鞏固基礎(chǔ)，另一方面學生在后期能力提升之后可以逐步完成之前未完成的作業(yè)，這樣更有利于學生的能力培養(yǎng)，也可以建立學生心理上的平衡，避免出現(xiàn)落差心里。免疫組織化學和原位雜交免疫組化與原位雜交免疫組織化學和原位雜1免疫組織化學前提條件:所使用的抗體必須能用于免疫組化基本原理Pathogen利用抗體(antibody)與相應(yīng)抗原(antigen)的特Antigen異性結(jié)合,通過與抗體連接的酶反應(yīng)或熒光染料顯示抗原所在的位置Antibodyo.scienceaid.net免疫組織化學2常用于標記抗體的標記物一)酶(enzyme)1.辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)辣根過氧化物酶的作用物(底物,substrate)1)二氨基聯(lián)苯胺(3,3′-diaminobenzidine,DAB)顯色特點:棕色不溶于水及脂類溶劑(酒精ethanol,二甲苯xylene)不擴散永久保存2)3氨基9乙基卡巴唑(3-Amino9Ethylcarbazole,AEC)常用于標記抗體的標記物3顯色特點:-棕紅色不溶于水,但溶于脂類溶劑容易擴散不能永久保存3)4氯1萘酚(4-Chloro-1-naphthol,CN)顯色特點:藍色一不溶于水,但溶于脂類溶劑容易擴散不能永久保存4)四甲基聯(lián)苯胺(3,3‘,5,5,-Tetramethybenzidine,TMB)顯色特點深藍色顯色特點:4不溶于水及脂類溶劑不擴散永久保存2.堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)堿性磷酸酶的作用物(底物,substrate)1)四唑淡藍/5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸鹽(Nitro-Blueˉetrazolium/5-bromo-4-chloro-3-inodly1-phosphate,NBT/BCIP)顯色特點紫色不溶于水但溶于脂類溶劑容易擴散不能永久保存不溶于水及脂類溶劑52)快紅(固紅/萘酚磷酸鹽,FastRedTR/NaphtholAs-MX)顯色特點:桃紅色不溶于水但溶于脂類溶劑容易擴散一不能永久保存3)快藍(固藍BB/萘酚磷酸鹽,Fastbluebb/NaphtholAS-MX)顯色特點:藍色不溶于水但溶于脂類溶劑容易擴散不能永久保存4)品紅(品紅/萘酚磷酸鹽,Fuchsin/NaphtholAS-TR)2)快紅(固紅/萘酚磷酸鹽,FastRedTR/Na6顯色特點:紅色一不溶于水及脂類溶劑-不擴散永久保存FastblueAECFastredNBTIBCIP顯色特點:7二)熒光染料(fluorescentdye)ProbeEx(nm)Em(nm)MWNotesReactiveandconjugatedprobesHydroxycoumarin331SuccinimidylesterAminocoumarin330SuccinimidylesterMethoxycoumarinSuccinimidylesterCascadeBluePacificBlue404006MaleimidePacificOrange403551Luciferyellow528NBD46694NBD-xR-Phycoerythrin480565578240kconjugates480565650670akaCychrome,R670.Tn-ColorQuantumRedconjugates480565,743767Red613480.565613PerCP490675PeridininchlorphyllproteinruR490,675PercP-Cy55conjugateFluor5205887(GEHealthcareFluorescein519389FITC:pHsensitive二)熒光染料(fluorescentdye)8BODIPY-FL512TRITC572444TRITCX-Rhodamine570576548XRITCLissamineRhodamineB570590TexasRed615625Sulfonylchlorideallophycocyanin(APC660104kconjugates650755767CharRedAlexaFluordyesantibodyconjugates]MolecularProbesAlexaFluor350410AlexaFluor4051028AlexaFluor43040702lexaFluor4885190.92lexaFluor500lexaFluor51442714AlexaFluor532530555724aY061AlexaFluor5465721079QY0.79AlexaFluor5555531250QY0.1AlexaFluor568579603792|aY069BODIPY-FL9Alexafluor594591618820QY066Alexafluor610AlexaFluor63300AlexaFluor6476526681300aY033Alexafluor6606636911100AlexaFluor6806807021150AlexaFluor7006967191400AlexaFluor7507527761300Alexafluor7907828041750CyDyesCy2489506714QY012Cy3(512)550570(615)767Y015Cy3B558572(620)658aY067Cv3.5594640)1102aY015Cy525650670792Y02Cy5.56756941128aY023CV7743767818QY028Alexafluor59410免疫組化與原位雜交課件整理_00211免疫組化與原位雜交課件整理_00212免疫組化與原位雜交課件整理_00213免疫組化與原