香菇多糖對脾胃作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

香菇多糖對脾胃作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

根據(jù)我們的初步研究，經(jīng)絡(luò)穴位對藥物的治療效果具有特異性。動物心包經(jīng)脈線上穴位和非穴位點(diǎn)注射影響心臟功能的藥物具有相似的作用規(guī)律,正常機(jī)體的心包經(jīng)穴位注射給藥,能降低藥物(外來異物)的毒性或藥效作用,但當(dāng)機(jī)體處于病理狀態(tài)下(心律失常),心包經(jīng)穴位注射又能加強(qiáng)藥物的治療效果;人體腎經(jīng)復(fù)溜穴給藥結(jié)果也相似,同時(shí)經(jīng)脈與臟腑功能密切相關(guān)。那么,穴位組織對藥物的這種特殊反應(yīng)是否適用于所有經(jīng)脈?為此,我們做了進(jìn)一步研究,在動物足太陰脾經(jīng)穴位注射相應(yīng)的藥物,觀察其藥效反應(yīng)是否也具有特異性、循經(jīng)性以及經(jīng)脈與臟腑的相關(guān)性。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動物及動物新西蘭家兔,雄性,2.20～2.60kg,購自上海生旺實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖有限公司,合格證號:scxk(滬)2002-0012、2007-0007。1.2生大黃水利益制劑生大黃:購自福建同春藥業(yè)有限公司,1000g,4000mL水浸泡30min,煎煮3遍,合并3次煎液,紗布過濾,經(jīng)旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀低溫濃縮至1000mL,配成100%(1g/mL)生大黃水煎液;4℃冰箱存貯待用,臨用時(shí)加熱至室溫。香菇多糖注射液(LNT):1mg/2mL,批號:061102-2,福建金陵藥業(yè)有限公司,臨用時(shí)用無菌生理鹽水對倍稀釋。免疫球蛋白IgM試劑盒:上?？迫A生物工程股份有限公司,批號:20061001。1.3設(shè)備和流程2.旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀:BC-R501813,上海貝凱;低溫冷卻循環(huán)機(jī):DLSB-10/CC,鞏義市英峪華儀器廠;水浴鍋:HH-S.214,江蘇省醫(yī)療器械廠;旋渦振蕩器:WH-2,上海滬西分析儀器廠;離心機(jī):BFX5-320,白洋離心機(jī)廠;光學(xué)顯微鏡:YSH-2,日本NIKON;全自動生化分析儀:日立7020,日本。1.4體重、臥位下降參照家兔的生物學(xué)特性以及有關(guān)文獻(xiàn),家兔脾氣虛模型具體參考標(biāo)準(zhǔn):①體重明顯下降;②倦怠,嗜臥;③肛溫下降;④大便溏瀉,肛口污;⑤毛色枯槁不榮;⑥食欲明顯下降。其中①②③為主要指標(biāo)。造模方法:正常家兔每日用100%生大黃水煎液15mL/kg灌胃,連續(xù)10d。1.5動物分組、給藥及肌肉注射家兔隨機(jī)分為正常組(10只)、模型組(8只)、肌肉治療組(10只)、三陰交治療組(10只)、地機(jī)治療組(8只)、血海治療組(8只)。除正常組外,各組動物以100%生大黃水煎液造成脾氣虛模型。治療各組自造模第2天起,按不同給藥途徑隔日注射LNT0.025mg/kg,共注射5次。模型組隔日肌肉注射生理鹽水0.025mL/kg。肌肉注射點(diǎn):“血?！毖ū硞?cè)向心端約1cm肌肉豐隆處。三陰交治療組穴位注射“三陰交”穴,地機(jī)治療組穴位注射“地機(jī)”穴,血海治療組穴位注射“血?！毖ā?.6刑大鼠體內(nèi)細(xì)胞的免疫功能檢測指標(biāo)體征變化:每日測家兔體重、肛溫,觀察飲食、大便、活動、精神等狀態(tài)。免疫指標(biāo):以紅細(xì)胞免疫功能(RBC-C3bR、RBC-IC)、體液免疫功能(血清IgM)為觀察指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)第11日,家兔耳背中動脈采血。取0.5mL肝素抗凝血,郭峰法測紅細(xì)胞C3b受體(RBC-C3bR)及紅細(xì)胞免疫復(fù)合物(RBC-IC)花環(huán)結(jié)合率,即每200個(gè)紅細(xì)胞形成的花環(huán)數(shù);另取2mL全血,離心(2500r/min,10min),取血清,采用全自動生化分析儀測血清IgM濃度。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)表示,用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,組間比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用LSD檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。2結(jié)果2.1穴位注射脾經(jīng)“三陰交”“地機(jī)”lnt對模型家兔體重、嗅溫、稀便的改善作用見表1-表3。脾氣虛模型家兔體重、肛溫明顯下降,出現(xiàn)泄瀉、食欲下降、活動減少、萎靡不振、毛色稀疏等征象,符合脾氣虛的診斷指標(biāo);穴位注射脾經(jīng)“三陰交”“地機(jī)”LNT對模型家兔體重、肛溫、稀便有明顯的改善作用,與模型組相比,P<0.05或P<0.01;血海治療組及肌肉治療組效果不明顯(P>0.05)。2.2lnt不同途徑注射對家兔rbc-c3br花環(huán)結(jié)合率的影響見圖1。與正常組相比,脾氣虛模型家兔RBC-C3bR花環(huán)結(jié)合率下降(P<0.01),RBC-IC變化不明顯,說明模型家兔發(fā)生了繼發(fā)性紅細(xì)胞免疫功能下降;LNT不同途徑注射后,家兔的RBC-C3bR花環(huán)結(jié)合率得到不同程度的提高,與模型組相比,三陰交治療組、血海治療組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。血海治療組RBC-C3bR花環(huán)結(jié)合率升高幅度最大,與肌肉治療組相比,P<0.05,甚至超過正常組,表明脾經(jīng)不同穴位點(diǎn)注射LNT對紅細(xì)胞免疫的影響程度不同,“血?！毖赡芫哂刑禺愋?。2.3對血清igm的影響見圖2。與正常組比較,脾氣虛模型家兔血清IgM濃度明顯下降(P<0.01);經(jīng)不同途徑注射LNT后,均能明顯提高模型家兔血清IgM水平(與模型組比,P<0.05或P<0.01);脾經(jīng)3個(gè)穴位治療組作用強(qiáng)于肌肉治療組,以三陰交治療組效果最好(與肌肉治療組相比,P<0.01,與正常組相比,P<0.01)。表明LNT經(jīng)脾經(jīng)穴位注射,其正性調(diào)節(jié)體液免疫的效應(yīng)被放大了。3u3000不同穴位點(diǎn)對穴功能的作用臨床研究表明,選擇適當(dāng)?shù)难ㄎ蛔⑸?藥效被放大;動物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也證明了穴位注射藥物確有特效和強(qiáng)效性。但是目前對經(jīng)穴藥效的研究主要以穴位為主,講究單個(gè)或數(shù)個(gè)穴位相伍的特性,對經(jīng)絡(luò)功能的整體性研究較少。楊繼洲在《針灸大成》中就提出“寧失其穴,勿失其經(jīng)”,經(jīng)絡(luò)學(xué)說強(qiáng)調(diào)的是一條經(jīng)脈的功能,本文旨在觀察經(jīng)脈線上若干個(gè)穴位點(diǎn)注射給藥的藥效是否有某種特異性、一致性。經(jīng)絡(luò)學(xué)說認(rèn)為足太陰脾經(jīng)“屬脾、絡(luò)胃”,主治“脾胃虛弱”諸癥。而中醫(yī)脾臟“主升清”,為“氣血生化之源”“后天之本”,與機(jī)體免疫功能關(guān)系密切。研究表明,脾虛證患者較正常人體內(nèi)特異性、非特異性紅細(xì)胞免疫功能降低,免疫調(diào)節(jié)機(jī)制紊亂;脾虛模型動物亦有不同程度的免疫缺陷。本模型是常用的5種脾氣虛模型之一,符合脾氣虛的病因病機(jī)發(fā)生過程,表現(xiàn)為動物體重減輕、腹瀉、萎靡,嚴(yán)重者出現(xiàn)體溫下降、倦縮,甚至死亡等,以及細(xì)胞免疫、非特異性免疫功能的改變。LNT系國內(nèi)正式上市的3種多糖之一,具有較好的免疫調(diào)節(jié)功能和刺激干擾素形成、抗腫瘤、抗病毒等作用,廣泛用于臨床化療患者的輔助治療。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型家兔RBC-C3bR花環(huán)結(jié)合率、血清IgM明顯下降,經(jīng)不同途徑注射相同劑量LNT后,二者均得到不同程度的提高,表明LNT確實(shí)有效;另一方面,脾經(jīng)上的穴位點(diǎn)注射LNT藥效強(qiáng)于肌肉注射,表明藥物在穴位的作用下效應(yīng)被放大,機(jī)體的免疫功能朝正態(tài)方向發(fā)展,經(jīng)絡(luò)穴位組織可能起了增強(qiáng)藥效的作用;此外,脾經(jīng)3個(gè)穴位點(diǎn)對各指標(biāo)的影響程度不一,“三陰交”對血清IgM水平、“血?！睂BC-C3bR花環(huán)結(jié)合率的提高效果特別顯著。體征上,脾經(jīng)“三陰交”“地機(jī)”注射LNT能顯著地增加模型動物的體重、肛溫,改善脾氣虛諸癥,“血?！毙Ч沃?肌肉注射治療效果不明顯。以上結(jié)果說明脾經(jīng)上不同穴位點(diǎn)給藥對脾臟功能具有一致的調(diào)節(jié)效應(yīng),但同一經(jīng)脈不同經(jīng)穴對臟腑功能的作用存在差異,經(jīng)脈功能的整體性與腧穴功能的特異性共同參與了其中。穴位注射的部位位于肌肉層或筋膜中,其藥理效應(yīng)理應(yīng)與肌肉注射相當(dāng)。但是本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,病理狀態(tài)下,經(jīng)絡(luò)穴位增強(qiáng)了糾正機(jī)體異常的藥效,經(jīng)絡(luò)穴位給藥具有藥效特異性。我們初步推測其作用機(jī)制是:①經(jīng)脈線上的組織與肌肉組織對藥物的處理方式不同,機(jī)體經(jīng)脈線上的組織可能具有主動的辨識性與選擇能力,通過改變藥物的代謝過程而發(fā)揮作用。②穴位注射可能改變藥物的靶向性或靶器官對藥物的反應(yīng)性、敏感性。③穴位注射可能通過對經(jīng)脈穴位產(chǎn)生針刺樣作用而發(fā)揮針刺效應(yīng),從而使藥效和穴效發(fā)揮了“整合”放大作用。脾經(jīng)3個(gè)穴位對不同免疫指標(biāo)的調(diào)節(jié)作用不同,其原因可能與不同穴位的特殊功效有關(guān),脾經(jīng)不同穴位其主治各有側(cè)重:三陰交為足三陰經(jīng)之交會穴,兼治足三陰經(jīng)病變,具有滋陰補(bǔ)腎健脾之功效,與先后天免疫功能密切相關(guān),而IgM是初次免疫反應(yīng)早期階段的主要Ig,產(chǎn)生于脾臟與淋巴結(jié),其殺菌、溶血、促吞噬以及凝集作用比IgG高50