食品微生物檢驗(yàn)基本技術(shù)-放線菌、酵母菌和霉菌的形態(tài)觀察

放線菌的形態(tài)觀察技術(shù)目錄/Contents01放線菌形態(tài)觀察技術(shù)微生物檢驗(yàn)室01一、放線菌簡(jiǎn)介放線菌細(xì)胞一般呈分枝無(wú)隔的絲狀，纖細(xì)的菌絲體分為在培養(yǎng)基內(nèi)部的基內(nèi)菌絲和伸出培養(yǎng)基表面的氣生菌絲。氣生菌絲上部分化成孢子絲，呈螺旋狀、波浪狀或分枝狀等，其著生的形式也有所不同。菌絲呈各種顏色，有的還能分泌水溶性色素到培養(yǎng)基內(nèi)。01插片法用無(wú)菌鑷子取數(shù)塊無(wú)菌蓋片，以45°角斜插在平板培養(yǎng)基上。用接種環(huán)取孢子接種于蓋片內(nèi)側(cè)基部中央部位，28℃培養(yǎng)4～5d。01插片法2、制片用鑷子取出蓋片，用吸水紙擦去生長(zhǎng)較差一面的菌絲體，然后用鑷子夾住蓋玻片，使有菌面朝上，通過(guò)燈焰2～3次進(jìn)行加熱固定、冷卻。3、染色在蓋玻片上滴加一滴石炭酸復(fù)紅液染色1min，水洗，干燥。4、鏡檢取干凈載玻片一張，將蓋玻片染色面向下，放在載玻片中央，在低倍鏡、高倍鏡、油鏡下觀察，辨認(rèn)放線菌的菌絲體、孢子絲及孢子的形態(tài)及排列方式。酵母菌的形態(tài)觀察技術(shù)目錄/Contents01酵母菌形態(tài)觀察技術(shù)微生物檢驗(yàn)室01酵母菌的形態(tài)觀察法酵母菌是單細(xì)胞的真核微生物，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)有明顯分化，個(gè)體比細(xì)菌大得多。不必染色即可用顯微鏡觀察其形態(tài)。

01酵母菌的形態(tài)觀察法

（1）水浸片觀察①制片：在干凈的載玻片中央加一滴預(yù)先稀釋至適宜濃度的酵母液體培養(yǎng)物，從側(cè)面蓋上一片蓋玻片，應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，并用吸水紙吸去多余的水分。②鏡檢：將制作好的水浸片置于顯微鏡的載物臺(tái)上，先用低倍鏡，后用高倍鏡進(jìn)行觀察，注意觀察各種酵母的細(xì)胞形態(tài)和繁殖方式，并進(jìn)行記錄。

01酵母菌的形態(tài)觀察法

（2）美藍(lán)染色①染色：在干凈的載玻片中央加一小滴0.1%美藍(lán)染色液，然后再加一小滴預(yù)先稀釋至適宜濃度的釀酒酵母液體培養(yǎng)物，混勻后從側(cè)面蓋上蓋玻片，并吸去多余的水分和染色液。②鏡檢：將制好的染色片置于顯微鏡的載物臺(tái)上，放置約3min后進(jìn)行鏡檢，先用低倍鏡，后用高倍鏡進(jìn)行觀察，根據(jù)細(xì)胞顏色區(qū)分死細(xì)胞（藍(lán)色）和活細(xì)胞（無(wú)色），并進(jìn)行記錄。③比較：染色約30min后再次進(jìn)行觀察，注意死細(xì)胞數(shù)量是否增加。

01酵母菌的形態(tài)觀察法（4）假菌絲的觀察壓片培養(yǎng)法：取新鮮的酵母菌在薄層馬鈴薯浸出汁瓊脂培養(yǎng)基平板上劃線接種2~3條，取無(wú)菌蓋玻片蓋在接種線上，于25~28℃培養(yǎng)4~5d后，打開(kāi)皿蓋，置于顯微鏡下直接觀察劃線的兩側(cè)所形成的假菌絲的形狀。霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)目錄/Contents01微生物檢驗(yàn)室霉菌形態(tài)觀察技術(shù)01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)（一）直接制片觀察法直接制片觀察法：是將培養(yǎng)物置于乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液中，制成霉菌制片鏡檢。此染色液制成的霉菌標(biāo)本片其特點(diǎn)是：①細(xì)胞不變形；②具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長(zhǎng)時(shí)間；③溶液本身呈藍(lán)色，有一定染色效果。

01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)（二）載玻片培養(yǎng)觀察法載玻片培養(yǎng)觀察法：此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后用顯微鏡觀察。這種方法可觀察霉菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)。

01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)（三）玻璃紙培養(yǎng)觀察法玻璃紙培養(yǎng)觀察法：為了得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)還可利用玻璃紙透析培養(yǎng)法進(jìn)行觀察。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性，將霉菌生長(zhǎng)在覆蓋于瓊脂培養(yǎng)基表面的玻璃紙上，然后將長(zhǎng)菌的玻璃紙剪取一小片，貼放在載玻片上用顯微鏡觀察。01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)（1）一般觀察法于潔凈載玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細(xì)心地將菌絲挑散開(kāi)，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時(shí)再換高倍鏡。01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)

（2）載玻片觀察法①將略小于培養(yǎng)皿底內(nèi)徑的濾紙放入皿內(nèi)，再放上U形玻棒，其上放一潔凈的載玻片，然后將二個(gè)蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端，蓋上皿蓋，把數(shù)套（根據(jù)需要而定）如此裝置的培養(yǎng)皿疊起，包扎好，用1.05kg/cm2，121.3℃滅菌20min或干熱滅菌，備用。②將6～7mL滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后，用無(wú)菌解剖刀切成0.5～1cm2的瓊脂塊，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)的載玻片上，每片上放置2塊。01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)

（2）載玻片觀察法③用滅菌的尖細(xì)接種針或裝有柄的縫衣針，?。ㄈ庋鄯侥芸匆?jiàn)的）一點(diǎn)霉菌孢子，輕輕點(diǎn)在瓊