復(fù)方酮康唑乳膏的制備及在釋放度檢查中的應(yīng)用

復(fù)方酮康唑乳膏的制備及在釋放度檢查中的應(yīng)用

作為一種抗真菌藥物，丙酮醇乳膏是一種丙烯醇。在制備復(fù)方酮康唑乳膏的工藝中,高溫溶解基質(zhì)中的酮康唑在冷卻后極易析出,造成其釋放速度上的不同,從而影響臨床療效;而現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅控制酮康唑的含量等項(xiàng)目,未能反映樣品使用后有效成分的釋放情況,不能完全、有效地控制療效。中國(guó)藥典2005年版二部收載的釋放度測(cè)定法也未收載軟膏劑的釋放度檢查,因此,國(guó)內(nèi)外學(xué)者不斷地嘗試建立適合于軟膏劑的釋放度檢查方法,其中的流通池法(flow-throughcellmethod)顯示了其廣闊的應(yīng)用前景,目前已被美國(guó)藥典、英國(guó)藥典、日本藥局方和歐洲藥典收載。流通池法是針對(duì)現(xiàn)行的溶出度檢查法中無(wú)法克服的困難而發(fā)展起來(lái)的技術(shù),主要優(yōu)點(diǎn)有:①克服因缺乏下沉條件而導(dǎo)致的飽和或吸附作用的平衡;②在測(cè)試中改變pH條件,使測(cè)試參數(shù)適應(yīng)生理?xiàng)l件;③給樣品定位于小尺寸的溶出室中,溶出介質(zhì)的體積可根據(jù)試驗(yàn)條件或體內(nèi)參數(shù)而定;④保持不溶微粒在池內(nèi),不需要附加另外的過(guò)濾或離心步驟;⑤設(shè)計(jì)了多種流通池,不僅可以對(duì)片劑、軟膠囊、硬膠囊等多種常用劑型直接進(jìn)行測(cè)試,而且也可對(duì)軟膏劑、粉末、栓劑、顆粒劑和植入劑等固體半固體進(jìn)行測(cè)試;⑥如與其他分析儀器連接,可完成溶出曲線的自動(dòng)化操作,重現(xiàn)性好;⑦克服藥物在溶液中由于停留時(shí)間短而引起的不穩(wěn)定問(wèn)題。故該方法正被許多制藥公司所采用。本文根據(jù)流通池法的特點(diǎn),研究并建立了復(fù)方酮康唑乳膏釋放度檢查方法,為其生產(chǎn)、研究、質(zhì)量控制及軟膏劑釋放度檢查提供參考。1相對(duì)分子質(zhì)量分?jǐn)?shù)dintSOTAXCE7Offline流通池溶出儀,包括SOTAXCE7溶出試驗(yàn)儀主機(jī)、CP7-35陶瓷柱塞泵和C615組分收集器;Agilent1100高效液相色譜儀、醋酸纖維素半透膜(0.45μm,上海市綠鳥(niǎo)科技有限公司),截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)為1000。酮康唑?qū)φ掌?批號(hào)0294-9801,中國(guó)藥品生物制品檢定所),復(fù)方酮康唑乳膏(規(guī)格:含酮康唑10mg·g-1;上海A公司提供,批號(hào)分別為060622,060701,060704;市場(chǎng)購(gòu)得B公司產(chǎn)品,批號(hào)為051001)。磷酸氫二鈉、甲醇、磷酸、鹽酸均為分析純。2流通池和樣品放置器所有試驗(yàn)都使用SOTAX的CE7流通池法溶出儀,有6個(gè)流通池;試驗(yàn)中,溶媒儲(chǔ)放瓶中的釋放介質(zhì)經(jīng)CP7-35陶瓷柱塞泵打入每個(gè)流通池,經(jīng)過(guò)流通池錐形部放置的約1mm直徑的玻璃珠(可使溶出介質(zhì)在流通池內(nèi)均勻流動(dòng))后,與樣品放置器表面接觸(藥物釋放),并從頂端流出回到溶媒儲(chǔ)放瓶中。流通池用準(zhǔn)備好的插入裝置密閉,過(guò)濾器由1個(gè)篩網(wǎng)和1個(gè)玻璃纖維組成,樣品放置器由樣品儲(chǔ)室、醋酸纖維素半透膜及密封圈組成。完整的流通池如圖1所示。3測(cè)定條件及時(shí)間采用流通池法(USP29版溶出度測(cè)定法第4法)閉合系統(tǒng)裝置,將樣品約0.3g分別精密稱(chēng)定,裝入池內(nèi),用半透膜封口,以0.01mol·L-1鹽酸溶液200mL為釋放介質(zhì),流速為8mL·min-1,溫度(32±0.5)℃,按儀器說(shuō)明書(shū)連接各部件,啟動(dòng)CP7-35陶瓷柱塞泵,同時(shí)記時(shí),分別在10,30,60,120,240,360,720,1080,1440min時(shí)取樣2mL(并補(bǔ)充相同體積已預(yù)熱的釋放介質(zhì)2mL),使用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾,精密量取續(xù)濾液20μL,按本文選定的HPLC色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算酮康唑含量,求出各時(shí)間點(diǎn)藥物的釋放量和累計(jì)釋放量。HPLC色譜條件:色譜柱為WatersSymmetryC18柱(3.9mm×150mm,5μm),柱溫為30℃,流動(dòng)相0.02mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-甲醇(25:75,用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.9±0.1);流速為1mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm;進(jìn)樣量20μL。在此色譜條件下,酮康唑峰的保留時(shí)間為11.2min,理論板數(shù)約為2500,丙酸氯倍他索以及輔料不干擾測(cè)定。對(duì)照品樣品色譜圖見(jiàn)圖2。4hplc方法的研究4.1,5,10.9,4.8,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,精密量取酮康唑?qū)φ掌愤m量,用0.01mol·L-1鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1mL含酮康唑0.30mg的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液,精密量取適量,用0.01mol·L-1鹽酸溶液定量稀釋制成0.3,0.6,0.9,1.2,2.4,4.8,9,12,15,18μg·mL-1的溶液,搖勻,按上述色譜條件進(jìn)樣20.0μL。結(jié)果酮康唑濃度在0.30～18μg·mL-1范圍內(nèi),與峰面積A具有良好的線性關(guān)系,標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為:A=45.45C-8.173r=0.9999(n=10)4.2平均回收率測(cè)定按A公司的處方,取空白基質(zhì)約0.15g,置100mL量瓶中,共9份,分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.5,2.0,5.0mL各3份,用0.01mol·L-1鹽酸溶液定容至刻度,搖勻,用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾,精密量取續(xù)濾液20μL進(jìn)樣,以標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定酮康唑含量,計(jì)算低、中、高3個(gè)濃度點(diǎn)的平均回收率(n=3)分別為99.8%,100.4%,99.2%;RSD分別為0.70%,0.76%,0.56%。4.3進(jìn)樣及色譜穩(wěn)定性試驗(yàn)取“線性試驗(yàn)”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液(9.0μg·mL-1)20μL,在色譜系統(tǒng)不改變的情況下分別于0,3,6,10,24h進(jìn)樣,測(cè)定酮康唑峰的峰面積,計(jì)算RSD(n=5)為0.52%。表明酮康唑?qū)φ掌啡芤涸?4h內(nèi)穩(wěn)定。4.4每次1000公里上述試驗(yàn)結(jié)果表明,所建立的HPLC法適合于復(fù)方酮康唑乳膏的釋放度檢查法。5樣品釋放試驗(yàn)的結(jié)果按“3”項(xiàng)下的釋放度檢查法對(duì)A公司的3批樣品和B公司的1批樣品分別進(jìn)行釋放曲線試驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)圖3。6討論6.1固體制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)釋放度試驗(yàn)是區(qū)分藥物固體或半固體制劑體外溶出速率的一種手段,它的應(yīng)用指導(dǎo)了新藥的研究,增加了控制藥物質(zhì)量的檢查項(xiàng)目,客觀評(píng)價(jià)了固體或半固體制劑,提高了制劑的質(zhì)量。中國(guó)藥典2005年版二部附錄XD釋放度測(cè)定法第三法適用于透皮制劑的釋放度檢查,但對(duì)于沒(méi)有襯布的乳膏則無(wú)法進(jìn)行試驗(yàn),本文采用流通池法建立了復(fù)方酮康唑乳膏釋放度的測(cè)定方法,并對(duì)試驗(yàn)條件進(jìn)行了篩選。6.1.2介質(zhì)流速選擇流速代表著試驗(yàn)溶劑對(duì)樣品的流體攪動(dòng)。分別設(shè)定流通池法釋放介質(zhì)的流速為4,8,16mL-1。結(jié)果隨著流速的提高,在相同的時(shí)間內(nèi)藥物釋放量略微增加,但無(wú)顯著性變化,為保證測(cè)定的恒定,選擇流速為8mL·min-1進(jìn)行試驗(yàn)。6.1.3溶出度對(duì)藥物釋放的影響考察了流通池法的溫度(32～37℃)對(duì)溶出度結(jié)果的影響,結(jié)果表明,隨著溫度的增加,在相同的時(shí)間內(nèi)藥物釋放量明顯增加。鑒于本品為皮膚用藥,故選擇32℃進(jìn)行試驗(yàn)。6.1.4檢測(cè)介質(zhì)的選擇半透膜的作用為減少藥物(包括賦形劑)與釋放介質(zhì)之間接觸,同時(shí)不阻止藥物從基質(zhì)向溶出介質(zhì)的擴(kuò)散。復(fù)方酮康唑乳膏為一種乳劑型親水性基質(zhì)的乳白色軟膏,故選擇醋酸纖維素膜(有孔親水膜)進(jìn)行試驗(yàn),多孔的醋酸纖維素膜可以接受釋放介質(zhì)流入軟膏中。為保證試驗(yàn)的進(jìn)行和檢測(cè),選擇200mL釋放介質(zhì),取樣量約為0.3g;經(jīng)試驗(yàn),取樣量在0.25～0.35g間,同一生產(chǎn)廠家的釋放曲線無(wú)明顯變化。6.2測(cè)量因素的選擇6.3合成產(chǎn)品的釋放曲線本文采用的2個(gè)生產(chǎn)廠家的復(fù)方酮康唑乳膏經(jīng)法定檢驗(yàn)(國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-XG-005-2001),結(jié)果均符合規(guī)定。其中A制藥公司的3批產(chǎn)品釋放曲線恒定,在24h釋放量超過(guò)65%;而市場(chǎng)購(gòu)得的B公司的1批產(chǎn)品,其釋放量明顯偏底;本文所建立的方法能夠反映不同產(chǎn)品間的釋放差異。6.1.1測(cè)定藥物的釋放度本文采用0.01mol·L-1的鹽酸溶液為釋放介質(zhì),原因是酮康唑在水中幾乎不溶,而在0.01mol·L-1的鹽酸溶液中溶解度良好,同時(shí),分別采用磷酸鹽緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液以及添加不同濃度表面活性劑(十二烷基硫酸鈉等)等作為釋放介質(zhì)的方法,均無(wú)法改善藥物的溶出(24h僅最大釋放10%),這項(xiàng)研究有待繼續(xù)。但鑒于釋放度試驗(yàn)不僅是模仿臨床用藥情況,更主要的是控制生產(chǎn)過(guò)程以及生產(chǎn)產(chǎn)品質(zhì)量的一致性,因此本文建立的方法已達(dá)到了目的。另外,本實(shí)驗(yàn)采用的樣品池,其最大裝量(復(fù)方酮康唑乳膏)約為0.35g,因此選用測(cè)定劑量約為0.3g。同