毛細(xì)管電泳法快速測(cè)定齊墩果酸片的含量

毛細(xì)管電泳法快速測(cè)定齊墩果酸片的含量【摘要】目的建立快速測(cè)定齊墩果酸片含量的方法。方法采用毛細(xì)管電泳法，未涂層彈性石英毛細(xì)管；壓力進(jìn)樣，壓力：kPa；進(jìn)樣時(shí)間：5s；分離電壓：25kV；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：200nm；運(yùn)行緩沖液：含5％甲醇的20mmol·L-1硼砂溶液(pH)；運(yùn)行時(shí)間：10min。結(jié)果齊墩果酸的線性范圍為～660μg·mL-1，平均回收率為%，RSD為%(n=6)。結(jié)論方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便，適于齊墩果酸片的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】齊墩果酸片毛細(xì)管電泳含量測(cè)定

Abstract:ObjectiveToestablishanHPCEmethodforrapidmonitoringthecontentofoleanolicacidinoleanolicacidtablets.MethodsSampleswereanalyzedonafusedanduncoatedsiliccapillaryof75μm×50cm(40cmofeffectivelength).20mmol·L-1ofboraxcontaining5%methanolwasusedasrunningbuffer.Sampleswereinjectedhydrodynamically(5s,kPa)intothecapillary.Theappliedvoltagewas25kVandthedetectionwavelengthwassetat200nm.Thetemperaturewaskeptat25℃.Therunningtimewas10min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeofμg·mL-1(r=)foroleanolicacid.Theaveragerecovery(n=6)was%withRSD%.ConclusionThismethodisaccurate,rapid,andsimpleforthecontentdeterminationofoleanolicacid.

Keywords:oleanolicacidtablet;HPCE;contentdetermination

齊墩果酸片具有護(hù)肝降酶、抗炎、強(qiáng)心利尿、抗腫瘤等作用，上除廣泛于急、慢性肝炎的輔助治療外，也用于配合腫瘤病人的手術(shù)、放療、化療，促進(jìn)免疫功能恢復(fù)以及再生障礙性貧血、紅斑狼瘡等免疫缺陷性疾病。目前國(guó)內(nèi)有許多廠家生產(chǎn)齊墩果酸片，生產(chǎn)上采用酸堿非水滴定法［1］測(cè)定其含量，但該方法終點(diǎn)不易掌握，專屬性差，誤差較大。也有采用比色法［2］、薄層掃描法［3］、HPLC法［4］等測(cè)定齊墩果酸片的含量，但以上方法均存在費(fèi)時(shí)長(zhǎng)、樣品用量多、操作繁瑣等問(wèn)題。而毛細(xì)管電泳法具有高效、快速、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便、樣品用量少等優(yōu)點(diǎn)，適合快速分析樣品［5］。筆者采用毛細(xì)管電泳測(cè)定齊墩果酸片中有效成分的含量，結(jié)果方法快速、靈敏、簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確。

1儀器與試藥

俄羅斯LumexCAPEL105型毛細(xì)管電泳儀，紫外檢測(cè)器，彈性石英毛細(xì)管。

齊墩果酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；齊墩果酸片；硼砂、硼酸、乙醇、甲醇、乙腈均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為重蒸水。

2方法與結(jié)果

分離條件

進(jìn)樣方式，壓力進(jìn)樣，壓力kPa，進(jìn)樣5s；分離電壓為25kV；柱溫25℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)200nm；以含5％甲醇的20mmol·L-1硼砂溶液(pH)為運(yùn)行緩沖液。實(shí)驗(yàn)前，毛細(xì)管依次用mol·L-1鹽酸、重蒸水、mol·L-1NaOH溶液、重蒸水各沖洗5min，然后用運(yùn)行緩沖液沖洗3min。在每2次運(yùn)行之間，毛細(xì)管用mol·L-1NaOH溶液沖洗2min，重蒸水和運(yùn)行緩沖液各沖洗3min。試驗(yàn)前運(yùn)行緩沖液用μm濾膜過(guò)濾和超聲波脫氣。齊墩果酸對(duì)照品和齊墩果酸片樣品的色譜見圖1。

A.齊墩果酸對(duì)照品;B.齊墩果酸片樣品;C.陰性樣品;1.齊墩果酸

圖1毛細(xì)管電泳圖

Figure1CEchromatograms

溶液制備

對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取齊墩果酸對(duì)照品mg于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，以μm濾膜過(guò)濾，即得。

供試品溶液的制備取供試品20片精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于齊墩果酸20mg)置100mL量瓶中，加甲醇約60mL，超聲30min，放冷，加甲醇定容刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。實(shí)驗(yàn)前樣品溶液經(jīng)μm濾膜過(guò)濾，備用。

線性關(guān)系

精密量取不同體積“”項(xiàng)下的齊墩果酸對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別加甲醇制得質(zhì)量濃度為、、、、165、330、660μg·mL-1的一系列對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為：A=ρ+，r=7。表明齊墩果酸在～660μg·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)

取質(zhì)量濃度330μg·mL-1齊墩果酸對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果峰面積積分值的RSD為％，表明精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別在0、4、8、24、72h進(jìn)樣，記錄色譜，結(jié)果峰面積積分值的RSD為%，表明樣品溶液在72h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品，照“”項(xiàng)下的方法制備6份供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果齊墩果酸平均含量為標(biāo)示量的%，RSD為%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取6份已知含量的供試品細(xì)粉適量(相當(dāng)于齊墩果酸10mg)，加入齊墩果酸對(duì)照品約mg，按“”項(xiàng)下的方法制備溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果齊墩果酸的平均加樣回收率為%(n=6)，RSD為%,見表1。

最低檢出限和定量限

當(dāng)信噪比為3時(shí)，最低檢出限為μg·mL-1；當(dāng)信噪比為10時(shí)，定量限為μg·mL-1。

樣品測(cè)定

取3個(gè)不同批號(hào)的齊墩果酸片，按“”項(xiàng)下方法制備溶液，依上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，3批樣品的測(cè)定結(jié)果分別為標(biāo)示量的%、%、%

Table1Resultsofrecovery(n=6)

3討論

比較了磷酸鹽、磷酸鹽硼砂、硼砂硼酸等多種緩沖體系及其濃度對(duì)分離效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，20mmol·L-1的硼砂緩沖溶液體系，電泳電流較小，基線平穩(wěn)，齊墩果酸出峰快(min)，信號(hào)靈敏度高。故選擇20mmol·L-1的硼砂作為背景電解質(zhì)溶液比較理想。

為改善峰形和提高檢測(cè)靈敏度，實(shí)驗(yàn)添加了適量的有機(jī)溶劑。比較了添加不同有機(jī)溶劑種類(甲醇、乙醇、乙腈)及體積比例對(duì)分離檢測(cè)的影響。結(jié)果表明選用體積分?jǐn)?shù)為％甲醇作為添加劑可有效提高分離度和靈敏度。

齊墩果酸片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》二部第三冊(cè)，含量測(cè)定采用酸堿滴定法，用乙醇制氫氧化鉀滴定液，其配制較繁瑣，測(cè)定終點(diǎn)不明顯；采用HPLCUV檢測(cè)時(shí)，由于齊墩果酸為五環(huán)三萜類成分，在200nm處有末端吸收，測(cè)定結(jié)果受流動(dòng)相影響大，基線不理想，檢測(cè)靈敏度較低；毛細(xì)管電泳具有快速、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便、樣品用量少等優(yōu)勢(shì)，本實(shí)驗(yàn)中，樣品的測(cè)定在5min內(nèi)就能完成，且能克服HPLC法紫外末端檢測(cè)的不足。

本實(shí)驗(yàn)同時(shí)采用衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)收載的酸堿滴定法和HPLCUV法測(cè)定3批樣品中的齊墩果酸含量，測(cè)得的結(jié)果分別為%、%、%和%、%、%。說(shuō)明酸堿滴定法測(cè)定的結(jié)果偏高，毛細(xì)管電泳法測(cè)定的結(jié)果與HPLC法測(cè)定的結(jié)果接近，表明本方法的準(zhǔn)確性可靠。

【參考文獻(xiàn)】

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［3］都述虎,饒金華,耿