微生物實(shí)驗(yàn)-細(xì)菌的染色技術(shù)及大小的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌的染色技術(shù)及微生物大小的測(cè)定第一部分

細(xì)菌的染色技術(shù)目的要求染色劑和染色的原理實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)程序目的要求掌握微生物的染色原理掌握染色的基本操作技術(shù)掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法染色劑和染色原理Ⅰ微生物染色的基本原理：細(xì)菌機(jī)體無色透明，與背景反差小，可將細(xì)菌染色，增加其反差；細(xì)菌在通常培養(yǎng)狀態(tài)下總帶負(fù)電荷，故可用帶正電荷的堿性染料染色。染色劑染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類型：1.酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。2.堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細(xì)菌易被堿性染料染色。3.中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細(xì)胞核染色）。4.單純?nèi)玖希哼@類染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類的染料。染色劑和染色原理Ⅱ微生物染色常用染料如下表：實(shí)驗(yàn)材料顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。石炭酸復(fù)紅染液、草酸銨結(jié)晶紫染液、革氏碘液、95％乙醇、蕃紅染液菌種：枯草桿菌、大腸桿菌實(shí)驗(yàn)程序Ⅰ

（細(xì)菌染色的方法和步驟）細(xì)菌染色的方法:

1.簡(jiǎn)單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以觀察微生物的大小、形狀和細(xì)胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。2.復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、細(xì)胞染色法等。染色技術(shù)的一般過程

涂片干燥固定染色媒染脫色復(fù)染水洗干燥鏡檢實(shí)驗(yàn)程序Ⅱ

（簡(jiǎn)單染色的方法和步驟）簡(jiǎn)單染色法(一般染色法)1.涂片2.干燥：自然晾干或酒精燈高處微微加熱。3.固定4.染色：在整個(gè)涂面上滴加染色液，染色１min。

5.水洗：傾去染液，用自來水細(xì)流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。6.吸干7.鏡檢實(shí)驗(yàn)程序Ⅲ

（革蘭氏染色的方法和步驟）革蘭氏（Gram）染色法1.涂片、干燥、固定2.初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液染1min，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：加革氏碘液媒染1min，水洗。4.脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約30s～45s，接著立即用流水沖洗。