炎癥性腸病與微生態(tài)

GUTDysbioticgutmicrobiotacausestransmissibleCrohn’sdisease-likeileitisindependentoffailureinantimicrobialdefence有害性腸道菌群導(dǎo)致傳染性克羅恩病樣回腸炎的發(fā)生且與抗菌防御失效無(wú)關(guān)Student：YuTaoSupervisor：BaiAiping2016Feb;65(2):225-37GUTIF=14.66Semimonthly審稿周期:1.2個(gè)月“胃腸肝病學(xué)”子行業(yè)的頂級(jí)雜志TheCorrespondingAuthorProf.Dr.DirkHaller慕尼黑工業(yè)大學(xué)食品健康學(xué)院營(yíng)養(yǎng)免疫學(xué)系主任主要研究方向：營(yíng)養(yǎng)因子和細(xì)菌對(duì)炎癥性腸病等慢性炎癥性疾病的生物醫(yī)學(xué)效應(yīng)代表性論文1.OralversusintravenousironreplacementtherapydistinctlyaltersthegutmicrobiotaandmetabolomeinpatientswithIBD.Gut.2016Feb4.（IF=14.66）2.LactocepinsecretedbyLactobacillusexertsanti-inflammatoryeffectsbyselectivelydegradingpro-inflammatorychemokines.CellHost&Microbe.2012;11(4):387-396（IF=12.328）3.Geneenvironmentinteractioninchronicinflammatorydisease.Nat.Immunol.2011;12(4):273-277（IF=20.004）4.EnterococcusfaecalisMetalloproteaseCompromisesEpithelialBarrierandContributestoIntestinalInflammation.Gastroenterology.2011;141(3):959-71.(IF=16.716)Contents12344BackgroundTechnicalroadmapResultsConclusion5Comment炎癥性腸?。↖nflammatoryBowelDisease,IBD）是一類病因不是十分清楚以慢性炎癥為特征的腸道炎癥病變主要包括潰瘍性結(jié)腸炎（UlcerativeColitis,UC）和克羅恩?。–rohn'sDisease,CD）UC是一種慢性非特異性結(jié)腸炎，重癥發(fā)生潰瘍，病變主要累及結(jié)腸黏膜和黏膜下層，呈連續(xù)性分布。CD為一種慢性肉芽腫性炎癥，病變可累及胃腸道各部位，而以末端回腸及其鄰近結(jié)腸為主，多呈節(jié)段性、非對(duì)稱性分布BackgroundBackgroundUC，以結(jié)腸炎為主CD，為回腸炎為主Background潘式細(xì)胞（Panethcells，PCs）潘氏細(xì)胞（PCs）是小腸腺的特征性細(xì)胞，位于腺底部，細(xì)胞呈錐體形，頂部胞質(zhì)充滿粗大嗜酸性的分泌顆粒其分泌顆粒含有溶菌酶、隱窩素等抗菌肽對(duì)腸道微生物有殺滅功能。PCs在黏膜防御中扮演重要角色，IBD患者顯示PCs功能受損，尤其是CD患者。BackgroundIBD基因工程常見(jiàn)動(dòng)物模型結(jié)腸炎（colitis）模型：IL10-/-小鼠T-bet-/-Rag2-/-(TRUCB)小鼠NF-κB-/-小鼠HLA/B27-β2m轉(zhuǎn)基因大鼠回腸炎（ileitis）模型:TNFdeltaARE小鼠SAMP/YitFc小鼠TNFdeltaARE小鼠：腫瘤壞死因子（TNF）在IBD等炎癥性疾病中起到關(guān)鍵作用，通過(guò)把TNFdeltaARE基因敲除可建立小鼠回腸炎模型TNFmRAN3'末端有一端富含AU序列的元件（AU-richelements，ARE）,ARE序列在維持TNFmRNA穩(wěn)定上發(fā)揮重要作用，喪失了ARE序列，常常就喪失了調(diào)控該mRNA降解的能力，即使得該mRNA的表達(dá)增強(qiáng)Backgroundmiceconv生活在普通環(huán)境中，腸道菌群跟環(huán)境有關(guān)生活在屏障環(huán)境，不存在鼠類諾瓦克病毒、螺桿菌屬、巴斯德菌屬、三管狀線蟲屬等，腸道無(wú)上述病原菌生活在無(wú)菌環(huán)境中，腸道完全無(wú)菌生物分類SPFGF動(dòng)物界

脊索動(dòng)物門哺乳動(dòng)物綱靈長(zhǎng)目人科人屬智人種原核生物界變形菌門γ-變形菌綱腸桿菌目腸桿菌科沙門菌屬傷寒沙門菌16SrRNA基因測(cè)序界(Kingdom)門(Phylum)綱(Class)目(Order)科(Family)屬(Genus)種(Species)生物進(jìn)化的親緣關(guān)系由遠(yuǎn)到近Background為什么選用16SrRNA作為生物進(jìn)化的標(biāo)尺？樣品采集及DAN提取設(shè)計(jì)方案選定引物PCR擴(kuò)增16SrRNA基因純化建庫(kù)高通量測(cè)序生物信息學(xué)統(tǒng)計(jì)分析16SrRNA存在于所以細(xì)菌基因中占細(xì)菌總RNA量的80％以上基因序列長(zhǎng)度適中既有保守區(qū)，又有高變區(qū)保守區(qū)域：細(xì)菌間差異不大，設(shè)計(jì)通用引物；高變區(qū)域：具有屬或種的特異性，測(cè)序分析和菌種鑒定。BackgroundTechnologyroadmapTNFdeltaARE+/-小鼠及WT小鼠CONVSPFGF8-12周VM處理，VM中止后處死取第8周NRsRS小鼠盲腸內(nèi)容物備制成懸液1周0周2周4周6周NRsLRsRs2周4周H＆E染色；免疫熒光染色；16SrRNA基因序列檢測(cè)；質(zhì)譜分析等ResultsFig1ChangesinthegutmicrobialecosystemareassociatedwithinflammationinTNFdeltaAREmice.18周小鼠末端回腸H＆E切片不同年齡段的TNFdeltaARE和WT小鼠的糞便菌群多樣性和組成抗生素停用后小鼠回腸炎評(píng)分（n=5-6/組）CONV-TNFdeltaARE小鼠出現(xiàn)回腸炎回腸炎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)ResultsFig1ChangesinthegutmicrobialecosystemareassociatedwithinflammationinTNFdeltaAREmice.TNF表達(dá)水平反應(yīng)了回腸炎疾病嚴(yán)重度的動(dòng)態(tài)變化回腸厭氧菌細(xì)菌密度，表明對(duì)VM耐藥的細(xì)菌種類的增加Shannon指數(shù)：用來(lái)估算樣品中微生物的多樣性指數(shù)之一，Shannon值越大，菌群多樣性就越高盲腸細(xì)菌在門（phylum）水平的組成變化TNFdeltaARE小鼠腸道炎癥發(fā)生具有微生物依賴性

ResultsFig2Ileitisinthespecificpathogen-free(SPF)environmentshowsdifferentgrades