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雙向電泳雙向電泳■sun■sun#~一SDS：使蛋白變性并形成帶負(fù)電荷的蛋白-SDS復(fù)合物。DTT：在膠條平衡中的目的是打斷二硫鍵，使變性的非烷基化蛋白處于還原狀態(tài)。IAA:通過(guò)烷基化反應(yīng)，使蛋白質(zhì)硫醇基團(tuán)烷基化，在電泳過(guò)程中防止蛋白再氧化，封閉打斷的二硫鍵的部位，使其不能相互連接。在電泳過(guò)程中蛋白質(zhì)的再氧化會(huì)產(chǎn)生拖尾或其他假象，同時(shí)可以使殘留的DTT烷基化，從而防止點(diǎn)拖尾或其他銀染假象。染色一、銀染：銀染試劑：（每塊膠）250mL固定液：乙酸乙醇純水乙酸乙醇純水2.敏化液：10%100mL乙醇75mL乙醇75mL硫代硫酸鈉（NaSO）223乙酸鈉純水3.染色液：硝酸銀純水0.79g10.25g175mL0.25%0.625g250mLTOC\o"1-5"\h\z甲醛（臨用前加入）100uL20min顯色液碳酸鈉2.5%6.25g純水250mL甲醛（臨用前加入）100uL終止液：

3.65g乙二胺四乙酸二鈉1.46%3.65g純水250mL實(shí)驗(yàn)步驟：銀染步驟：1固定：使用固定液固定雙向電泳膠，固定時(shí)間大于1小時(shí)，過(guò)夜也可。敏化：倒掉固定液，加入敏化液，敏化半小時(shí)。水洗：倒掉敏化液，加入純水，水洗時(shí)每隔十分鐘更換一次純水，沖洗四次。銀染：避光，加入銀染液，銀染30分鐘。倒掉銀染液，純水沖洗膠，洗掉附著在膠面和盒子上的硝酸銀。顯色：加入顯色液后，溶液變黃，置于搖床觀察顯色情況。保證顯色效果一致，顯色保證底色不要太深。終止：當(dāng)膠上點(diǎn)全部顯出后，倒掉顯色液，加入終止液。迅速終止反應(yīng)，并終止10分鐘。使用純水沖洗膠面，適當(dāng)去除膠面的銀顆粒，準(zhǔn)備掃膠。二、考馬斯亮藍(lán)染色考染試劑：染色液（200mL）：考馬斯亮藍(lán)R250乙醇0.1%0.2g50%100mL乙酸5%10mL純水90mL脫色液（可直接使用純水）冰乙酸7.5%75mL甲醇5%50mL水87.5%875mL蛋白來(lái)源差異：細(xì)菌蛋白：高核酸蛋白比，核酸去除占重要地位。真菌蛋白：有較厚的細(xì)胞壁，使用較強(qiáng)的裂解劑，比如活性高的破壁酶以及SDS等。細(xì)胞：培養(yǎng)基中鹽分較多，使用蔗糖緩沖液(washingbuffer)沖洗植物組織細(xì)胞：

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