脂肪乳實驗(匯編)

2一、教學(xué)要求把握生物分別科學(xué)的進(jìn)展、相關(guān)項單元操作技術(shù)的根本原理。把握試驗方案設(shè)計的根本原則，學(xué)會試驗方案設(shè)計的根本方法。嫻熟地實施設(shè)計方案，優(yōu)化試驗條件。把握所學(xué)技術(shù)、方法在藥學(xué)爭論中的應(yīng)用。把握試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與處理，學(xué)會試驗圖表的制作方法以及試驗結(jié)果分析爭論二、教學(xué)學(xué)時6464856161024〕載藥脂肪乳的組成以及在藥物制劑中的爭論進(jìn)展。脂肪乳制備的根本流程和原則。各試驗的根本原理，操作步驟和留意事項。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法和要求，5．在本模塊根底上開展蛋白質(zhì)爭論的思路和常用技術(shù)、方法。6.試驗設(shè)計和實施的根本的根本要求、留意事項。四、爭論課題氯維地平脂肪乳制劑的處方爭論氯維地平脂肪乳制劑的工藝優(yōu)化氯維地平脂肪乳制劑的表征及質(zhì)量評價氯維地平脂肪乳制劑的穩(wěn)定性爭論五、主要單元操作技術(shù)與設(shè)備1、單元操作技術(shù)：剪切乳化、高壓均質(zhì)、微射流2、主要設(shè)備：高剪切分散乳化機(jī)、高壓微射流納米分散儀、高壓納米均質(zhì)機(jī)、Zetasizer/Nano-ZS90真空枯燥箱、分析天平、電子臺秤、制冰機(jī)高效液相色譜等。六、教學(xué)組織方式兩人一組，全部試驗由學(xué)生設(shè)計方案，獨立完成。七、教學(xué)的重點和難點1、學(xué)習(xí)的自主性加大，審核學(xué)生的試驗方案、供給必要的條件。2、講授局部的難點是進(jìn)展、制備思路、原則和常用技術(shù)、方法的學(xué)習(xí)。3、本模塊涉及的儀器特別多，技術(shù)方法多，學(xué)習(xí)難度較大，力求與理論課的對接、舉一反三。八、難點的解決方法：1、認(rèn)真?zhèn)湔n，該講的講深、講透，重點一對一答疑。2、做好設(shè)計報告的審核，提前一個月做好儀器檢修和藥品的預(yù)備。3、做好必要的單元操作示教和爭論過程的現(xiàn)場指導(dǎo)。1、孫彥，生物分別工程；2、嚴(yán)?？?，生化分別技術(shù)；1、孫彥，生物分別工程；2、嚴(yán)希康，生化分別技術(shù)；3、譚天偉，生物分別技術(shù)4、李建武，生物化學(xué)原理和方法；5、生物分別工程試驗指導(dǎo)2—1材料與方法試驗材料T-18basic〔IKA；M100PCE〔高壓納米均質(zhì)機(jī)〔廣州聚能生物科技〕YM50〔上海三申DF-101S〔鄭州長城科工貿(mào)；Zetasizer/Nano-ZS90〔Malver，英國蛋黃卵磷脂〔LipoidE80，供注射用〕〕EDTA-2Na〔阿拉丁〕油酸〔Lipoid，供注射用〕油酸鈉〔Lipoid，供注射用；試驗方法zeta來評價，爭論并探討了油相、穩(wěn)定劑以及抗氧劑對氯維地平脂肪乳的影響。處方組分的選擇FDA〔見下表在此根底上，選擇對制劑影響較大的關(guān)鍵組分進(jìn)展優(yōu)化。美國FDA批準(zhǔn)上市的氯維地安靜脈注射用脂肪乳處方油的種類和用量考察MCT制備氯維地平脂肪乳，考察不同油相比例對乳劑的粒徑等穩(wěn)定性指標(biāo)的影響。穩(wěn)定劑的種類和用量考察的粒徑等穩(wěn)定性指標(biāo)的影響?？寡鮿┑姆N類和用量考察注射液中常用的水溶性抗氧劑硫代硫酸鈉、脂溶性抗氧劑VE以及兩親性抗氧60℃10PDIzeta其最適合的用量。EDTA-2Na的用量EDTA-2Na能與微量金屬離子絡(luò)合，具有提高油脂抗氧化及防止變色的作用。參考相關(guān)文獻(xiàn)以及美國FDA批準(zhǔn)上市0.005%質(zhì)量的評價指標(biāo)及方法外觀氯維地平脂肪乳制劑的外觀應(yīng)為乳白色，均勻，流淌性良好。粒徑0.5μm以下，在大于0.5μm1μm3％，并不得檢5μm的乳粒。光粒度儀進(jìn)展粒徑的測定。zetazeta電位是連續(xù)相與附著在分散粒子上的流體穩(wěn)定層之間的電zeta電位是衡量體系穩(wěn)定性的一個重要指標(biāo)。目前測量zeta電位的方法主要有電泳法、電滲法、流淌電位法以及超聲波法，其中以電泳法應(yīng)用最廣。正zeta電位，即＜-30mV和＞+30mV都將視為高zetazeta好的分散液具有抗分散性。游離脂肪酸pH值降低，pH的降低顯著降低磷脂的離子化zeta電位的降低，從而導(dǎo)致脂肪乳不穩(wěn)定，因此其含量5mmol/L?！衬崃_藍(lán)顯色劑的配制：稱取尼羅藍(lán)0.01g溶解于50ml25ml振搖，棄去上層正庚烷，反復(fù)操作約410ml，90ml，混勻。本液置棕色瓶中，室溫下可存放一個月。0.12821g棕櫚酸置于25ml容量20mmol/L的溶液，20mmol/L溶液52.51.25ml和2.5mmol/L溶液5、2.5、1.25ml至10ml容量瓶中得到10、5、2.5、1.25、0.625、0.3175mmol/L的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。ml具塞試管中，加異丙醇-正庚烷-0.5mol/L硫酸溶液(40:10:1)的5.0ml振搖1分鐘，放置10分鐘〔硫酸作用：將乳劑中的脂肪酸鈉水解為脂肪酸，以測定全部的游離脂肪酸含量。加正庚烷2ml4ml10次，靜置15分鐘，使mol/LNaOH氧化鈉的體積，以xy作圖，得游離脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線。量取樣品1ml〔平行共2份，置20ml具塞試管中，加異丙醇-正庚烷-0.5mol/L硫酸溶液(40:10:1)的混合溶液5.0ml1103ml3ml，密塞，上下翻轉(zhuǎn)10次，靜置153ml，參與1ml尼羅藍(lán)指示劑，用0.01mol/LNaOH滴定液滴定，至溶液低端由藍(lán)色變?yōu)榈仙x出所用氫氧化鈉的體積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得游離脂肪酸濃度。4操作，上層液3ml渾濁，可能1ml3進(jìn)展操作！假設(shè)實驗過程中未消滅渾濁，可實行一步萃取。過氧值其量。過氧化值多承受碘量法進(jìn)展滴定測量，過氧化值一般不超過2.5mmol/L。1〕碘化鉀飽和溶液的配制：碘化鉀在20℃的時候溶解度是144g，量取10ml水，參與14.4g碘化鉀，溶解，即可配置成碘化鉀的飽和溶液〔保證有晶體存在〔2〕1%淀粉指示劑的配制：稱取1.0g可溶性淀粉，加少量純化水?dāng)噭颍S后一邊攪拌，一邊參與約60ml熱水，再將此溶液煮沸2~3min，靜置冷卻〔3〕參照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，取冰醋酸-氯仿〔6:4〕30ml250ml5ml，快速參與混合液中，輕0.5ml，密塞，振搖1min，加沸過的冷水30ml與12ml。用硫代硫酸鈉滴定液〔0.01mol/L〕滴定至藍(lán)紫色消逝，消耗的硫代硫酸鈉滴定液不得超過1.0ml。留意用除去空白消耗NaOH過氧化值〔mmol/L〕=式中：V為樣品消耗硫代硫酸鈉溶液的體積Vo為空白消耗硫代硫酸鈉溶液的體積ml；過氧化值〔mmol/L〕=W為供試品的取樣量m。甲氧基苯胺值350nm處用分2.2。1甲醚〔0.25g〕100ml量瓶中，加冰醋酸溶解并稀釋至刻度，得0.25〔2〕周密量取10ml樣品于圓底燒瓶中，參與20ml甲醇，旋蒸除盡水分〔需要重復(fù)操作3次，殘渣加20%異丙醇-異辛烷溶液溶解并稀釋至25ml，搖勻，過濾得供試品。在350nm處，以20%異丙醇-異辛烷溶液做空白，測定供試品的吸取度A0〔3〕5ml1ml甲氧基苯胺醋酸溶液，加塞振搖，密閉放置15min，以20%溶液：醋酸=5:1350nm處測定吸取度A，計算甲氧基苯胺值。甲氧基苯胺值=式中：V為供試品的取樣量，ml；甲氧基苯胺值=Bg/ml；為參與0.25%甲氧基苯胺的冰醋酸溶液后的溶液稀釋因子。含量測定0.5ml于10ml量瓶中，加適量甲5000rpm離心5min，HPLC測定方法進(jìn)展。TC-C18柱(5μm,4.6×250mm)，80:20v/1ml/min25℃，364nm20μl。結(jié)果與爭論氯維地平脂肪乳的工藝爭論氯維地安靜脈注射用脂肪乳處方試驗材料與方法試驗材料T-18basic〔IKA；M100PCE〔高壓納米均質(zhì)機(jī)〔廣州聚能生物科技〕YM50〔上海三申DF-101S〔鄭州長城科工貿(mào)；Zetasizer/Nano-ZS90〔Malver，英國蛋黃卵磷脂〔LipoidE80，供注射用〕〕EDTA-2Na〔阿拉丁〕油酸〔Lipoid，供注射用〕油酸鈉〔Lipoid，供注射用；試驗方法初乳工藝優(yōu)化初乳制備工藝。油水相的制備磷脂的參與方式有參與油相或參與水相，試驗中覺察將磷脂參與水中剪切分散后制備的初乳放置5min很快分層；而參與油相剪切時，油相產(chǎn)生太度把握在卵磷脂的相變溫度〔75℃〕四周，可以使溶解速度加快。75℃，水相制備溫度要盡量與油相溫度接近，否則70℃為制備水相的溫度。剪切工藝3、5、10、20、30min〕取樣，測定初乳粒徑、PDI。均質(zhì)工藝勻質(zhì)設(shè)備選擇承受優(yōu)化的脂肪乳處方和剪切工藝，承受高壓勻質(zhì)機(jī)和高壓微射流兩種不同的布的影響。勻質(zhì)參數(shù)優(yōu)化壓力和循環(huán)次數(shù)對氯維地安靜脈注射脂肪乳粒徑及其分布的影響。脂肪乳pH值優(yōu)化為了使樣品的pH值與人體血液pH接近，必需保證最終的樣品pH在6~8pH值會下降，pH值應(yīng)調(diào)整至稍高。處方前爭論結(jié)果說明氯維地平在pH5~10范圍中相對較穩(wěn)定?？疾烊閜H值對脂肪乳的zeta電位的影響。滅菌工藝優(yōu)化pH115℃30min121℃下15min的熱壓滅菌工藝對氯維地安靜脈注射乳劑的影響。3.結(jié)果與爭論氯維地平脂肪乳的表征與質(zhì)量評價對藥物制劑進(jìn)展質(zhì)量評價可以為制定制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)供給依據(jù)，對其進(jìn)展表征則可以進(jìn)一步爭論藥物制劑的微觀構(gòu)造。zetaTEM、DSC、XRD1儀器與試劑i220透射電子顯微鏡I公司，荷蘭；DSC-7差熱(Perkin-Elmer公司，美國)；o6L冷凍枯燥系統(tǒng)o公司，美國；XIIIB粉末衍射儀u公司，日本；其他試驗儀器同前試驗方法質(zhì)量評價以外觀、粒徑、電位、游離脂肪酸、過氧化值、甲氧基苯胺值以及藥物含量為指標(biāo)對氯維地平脂肪乳進(jìn)展質(zhì)量評價。表征〔TEM〕5003μl滴5μl磷鎢酸溶液〔2%，w/v〕5min，再次烘干即可。〔DSC〕-2℃冰箱預(yù)凍8-83置于冷凍枯燥機(jī)中-40℃升華，冷凍枯燥三天，待樣品完全枯燥，將樣品拿出備用。預(yù)備四個凍干粉末樣品待做DSC：1、氯維地平原料藥；2、空白制劑凍干粉末；3、空白制劑凍干粉末與氯維地平原料藥的物理混合粉末；4、氯維地平脂肪乳制劑粉末。條件：在0~20010℃/min。X射線衍射分析〔XRD〕按5.3.2.2項下的方法制備凍干樣品，XRD試驗條件為：Cu-Kα輻射，工作電壓40k505°~5〔θ100.02°步。結(jié)果與爭論氯維地平脂肪乳的穩(wěn)定性依據(jù)中國藥典2023版二部附錄藥物穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則加速試驗；并爭論制劑在生理鹽水及葡萄糖注射液中的稀釋穩(wěn)定性。儀器與試劑氯化鈉〔分析純，國藥；葡萄糖〔分析純，國藥其它儀器試劑同前試驗方法影響因素試驗高溫試驗取經(jīng)過充氮灌封、滅菌的氯維地平脂肪乳置于60℃條件下放置100天和第10低溫試驗4℃條件下放置100和第10天取樣，考察其粒徑、電位以及游離脂肪酸等指標(biāo)。冷凍試驗取經(jīng)過充氮灌封、滅菌的氯維地平脂肪乳置于-20℃條件下放置10天，分別在0天和