幾種促滲劑對(duì)來(lái)氟米特體外經(jīng)皮滲透的影響

幾種促滲劑對(duì)來(lái)氟米特體外經(jīng)皮滲透的影響

lampion是一種治療性關(guān)節(jié)炎的藥物。目前，該藥物的上市版本是片劑。副作用包括厭食、腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐、胃炎和上腸炎等胃腸道癥狀和肝功能障礙。改變來(lái)氟米特的給藥途徑是避免發(fā)生不良反應(yīng)的有效辦法之一。透皮給藥可有效避免肝臟首過(guò)效應(yīng),有穩(wěn)定持續(xù)作用,但由于人體皮膚的屏障功能,藥物透皮速率較慢,故尋找促進(jìn)藥物經(jīng)皮滲透的方法是開(kāi)發(fā)透皮吸收制劑的關(guān)鍵,目前常用物理促滲法和化學(xué)促滲法。為此我們考察了化學(xué)促滲法中一些常用促滲劑對(duì)來(lái)氟米特透過(guò)SD-大鼠腹皮的促進(jìn)作用。1材料、機(jī)器和動(dòng)物1.1、試劑與儀器由水平擴(kuò)散池組成的體外透皮擴(kuò)散裝置(中國(guó)科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所玻璃儀器廠),78-1A型磁力加熱攪拌器(上海南匯電訊器材廠),CS501超級(jí)恒溫器(重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠),高效液相色譜儀,包括LC-10ADVP泵,SPD-10AVP檢測(cè)器,C-R6A積分儀(日本島津制作所)。月桂氮酮(Azone,廣州助劑廠),松節(jié)油(上海聯(lián)合香料廠),1,2-丙二醇(下稱(chēng)丙二醇,上?；瘜W(xué)試劑公司),油酸(上海遠(yuǎn)航試劑廠),聯(lián)苯酚(Sigma公司,批號(hào)Lot82H3515),生理鹽水(本院制劑室,批號(hào)20010418),來(lái)氟米特(長(zhǎng)征-欣凱制藥有限公司),乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。pH3.6醋酸緩沖溶液:取10.2g無(wú)水醋酸鈉,加40mL冰醋酸,加水至1000mL,溶解混合均勻后經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)。Dimples脫毛膏(英國(guó)LincoImpexLtd.)。1.2動(dòng)物SD大鼠,雄性,體重(200±10)g(第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物合格證號(hào):醫(yī)動(dòng)字第02-25-3)。2方法和結(jié)果2.1除皮膚、清洗取SD大鼠,腹部用脫毛膏脫毛,飼養(yǎng)24h,實(shí)驗(yàn)前斷頸處死,剪下腹部皮膚,小心剔除皮下組織和脂肪,以生理鹽水漂洗干凈。以面積約2.7cm×2.7cm的紗布覆蓋在角質(zhì)層面,于紗布上滴加促滲劑0.5mL,保持?jǐn)U散至整個(gè)表面并與皮膚接觸12h,除去紗布,用生理鹽水洗凈后立即使用。2.2材料的接受介質(zhì)采用水平擴(kuò)散池。將經(jīng)促滲劑預(yù)處理過(guò)的皮膚固定于水平擴(kuò)散池接口處,使角質(zhì)層面向供給室,真皮層面向接受室。供給室內(nèi)為5mL的LFM飽和水溶液,接受室內(nèi)為5mL含0.01%枸櫞酸的生理鹽水。開(kāi)動(dòng)恒溫水浴循環(huán)(37±1)℃和磁力加熱攪拌器(300r·min-1),開(kāi)始計(jì)時(shí),在設(shè)定時(shí)間內(nèi)(1,2,4,6,8,10,12,14,16,24h)分別從接受室內(nèi)取樣1mL,并補(bǔ)充等體積37℃的接受介質(zhì)。樣品經(jīng)稀釋后測(cè)定其濃度,并通過(guò)下式校正接受室的藥物濃度(μg·mL-1):c校=cn+V0/V∑cii=1n?1=cn+V0/V∑cii=1n-1式中V為接受室體積,V0為每次取樣的體積,cn為第n個(gè)樣品實(shí)際測(cè)得的藥物濃度,c校為校正后的藥物濃度,∑ci為該取樣點(diǎn)前各點(diǎn)的測(cè)定濃度之和。2.3樣品測(cè)定2.3.1檢測(cè)條件和標(biāo)準(zhǔn)曲線色譜柱為HypersilODSC18柱(4.6mm×150mm,10μm,大連依利特科學(xué)儀器有限公司),流動(dòng)相為乙腈-醋酸鹽緩沖溶液(45∶55),流速為1.0mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm,靈敏度為0.01AUFS,內(nèi)標(biāo)為聯(lián)苯酚,進(jìn)樣量為20μL。2.3.2聯(lián)苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備以甲醇為溶劑,精密配制濃度為30.96μg·mL-1的聯(lián)苯酚貯備液和濃度為166.00μg·mL-1的來(lái)氟米特貯備液。精密量取來(lái)氟米特貯備液5,10,20,50,100,250,500,600,750μL置10mL量瓶中,加入聯(lián)苯酚貯備液500μL,并加入10%枸櫞酸溶液10μL,用流動(dòng)相稀釋定容,即得濃度依次為0.083,0.166,0.332,0.83,1.66,4.15,8.3,9.96,12.45μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,取20μL進(jìn)樣。以來(lái)氟米特的濃度c對(duì)其與內(nèi)標(biāo)聯(lián)苯酚的峰面積比R進(jìn)行回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程c=2.742947R+0.013751,r=0.9999(n=8)。說(shuō)明來(lái)氟米特的濃度c和來(lái)氟米特與內(nèi)標(biāo)的峰面積比R在0.083～12.45μg·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。2.3.3最低檢測(cè)限的確定經(jīng)逐步稀釋,確定來(lái)氟米特的最低檢測(cè)濃度為0.0302μg·mL-1(S/N=3∶1),進(jìn)樣量為20μL時(shí),來(lái)氟米特的最低檢測(cè)限約為0.60ng。2.3.4加標(biāo)回收率測(cè)定按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作方法,配制高、中、低3組濃度來(lái)氟米特樣品液,測(cè)定其與內(nèi)標(biāo)的峰面積比,依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程換算成測(cè)定濃度,計(jì)算回收率,結(jié)果分別為(100.37±0.21)%,(99.97±0.04)%,(104.82±3.73)%。2.3.5與內(nèi)標(biāo)的峰面積比及穩(wěn)定性按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作方法,配制高、中、低3組濃度來(lái)氟米特樣品液,分別于日內(nèi)4,8,12h和日間1,2,3d測(cè)定其與內(nèi)標(biāo)的峰面積比,依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算實(shí)際測(cè)得濃度和RSD,所測(cè)得的日內(nèi)RSD分別為0.21%,0.04%,3.56%,日間RSD分別為0.41%,0.12%,4.08%,樣品穩(wěn)定性和方法重現(xiàn)性均可滿足分析要求。2.3.6單位面積累計(jì)滲透量測(cè)定精取滲透接受液0.5mL,加內(nèi)標(biāo)聯(lián)苯酚貯備液0.02mL,用流動(dòng)相稀釋至1mL,10000r·min-1離心10min,取上清液進(jìn)樣測(cè)定,按下式計(jì)算單位面積累計(jì)滲透量(μg·cm-2):Q=(c?！罺)/A,式中c校為第n個(gè)樣品校正后的藥物濃度,V為接受室體積,A為擴(kuò)散池有效滲透面積,兩者都為已知量。以擴(kuò)散平衡后的Q對(duì)滲透時(shí)間t進(jìn)行回歸,所得的直線斜率即為滲透速率常數(shù)J(μg·cm-2·h-1)。2.3.7數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理采用Excel軟件中對(duì)數(shù)據(jù)的配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行處理。2.4aike與丙二醇聯(lián)用對(duì)來(lái)氟前氟米的促滲作用實(shí)驗(yàn)采用皮膚預(yù)處理的方法分別考察了丙二醇,Azone,油酸,松節(jié)油,Azone-丙二醇(1∶5)等促進(jìn)劑對(duì)LFM滲透行為的影響,并與LFM在未經(jīng)預(yù)處理的空白皮膚上的滲透行為做了比較,見(jiàn)圖1。來(lái)氟米特飽和水溶液透過(guò)未經(jīng)預(yù)處理的空白皮膚的滲透速率及其透過(guò)經(jīng)促滲劑預(yù)處理的皮膚的滲透速率(μg·cm-2·h-1)為:空白(3.3905±0.5486);丙二醇(12.2400±0.4271);Azone(2.8110±0.3647);松節(jié)油(4.4001±1.5949);油酸(5.3229±0.7265);Azone+丙二醇(7.8500±0.4044)。結(jié)果表明,丙二醇、油酸、Azone合用1,2-丙二醇對(duì)來(lái)氟米特都具有良好的促滲作用,與空白皮膚相比,能顯著提高來(lái)氟米特的滲透速率(P<0.01),尤以丙二醇促滲作用最強(qiáng),其次為Azone與丙二醇合用。而松節(jié)油和單用Azone則對(duì)來(lái)氟米特?zé)o明顯促進(jìn)作用,滲透速率無(wú)顯著性差異(P>0.05)。這是因?yàn)閬?lái)氟米特脂溶性強(qiáng),能很好的溶解于丙二醇中而增加其在皮膚角質(zhì)層中的分配。Azone具有相當(dāng)?shù)挠H脂性,可能與來(lái)氟米特發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制,故單用Azone對(duì)來(lái)氟米特?zé)o明顯促滲作用。而與丙二醇能產(chǎn)生協(xié)同作用,增加了Azone在皮膚角質(zhì)層中的溶解度,從而提高了Azone對(duì)來(lái)氟米特的作用強(qiáng)度。3awell和丙二醇酯類(lèi)促滲劑有很多種,但起效時(shí)間不盡相同,如Azone的促滲作用有明顯的滯后現(xiàn)象。采用皮膚預(yù)處理的方法,可減少這種現(xiàn)象。丙二醇是一種常用的透皮促進(jìn)劑,具有良好的溶解性能,可以增加多種滲透促進(jìn)劑的溶解度,是良好的共溶媒。在本實(shí)驗(yàn)中,丙二醇能顯著提高來(lái)氟米特的滲透速率。一般認(rèn)為它能使角質(zhì)層中角蛋白溶劑化,占據(jù)蛋白質(zhì)的氫鍵結(jié)合部位,減少藥物-組織間結(jié)合而發(fā)揮促滲作用。Azone是目前公認(rèn)的一種較理想的新型滲透促進(jìn)劑,Azone并非對(duì)所有藥物都有促滲作用,它對(duì)親水性藥物的促滲作用大于對(duì)親脂性藥物的促滲作用。在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)Azone對(duì)來(lái)氟米特?zé)o促滲作用,這可能是因?yàn)閬?lái)氟米特的親水性特別小。而Azone合用丙二醇則對(duì)來(lái)氟米特有明顯促滲作用。油酸是脂肪酸類(lèi)滲透促進(jìn)劑,能滲入角質(zhì)層細(xì)胞間