六味地黃丸的綜合質(zhì)量檢測（中藥制劑檢測課件）

六味地黃丸的綜合質(zhì)量檢測【實(shí)訓(xùn)目的】1.能依據(jù)《中國藥典》對六味地黃丸進(jìn)行全面檢驗(yàn)。2.能判斷六味地黃丸的質(zhì)量狀況，能正確填寫相關(guān)檢驗(yàn)原始記錄及檢驗(yàn)報(bào)告單?！緦?shí)訓(xùn)內(nèi)容】（一）實(shí)訓(xùn)用品1.儀器：高效液相色譜儀、顯微鏡、水浴鍋、烘箱、電子天平、崩解儀、培養(yǎng)箱、勻漿、超聲振蕩器、滅菌鍋、硅膠G薄層板、中性氧化鋁柱等。2.試劑：甲醇、乙醚、丙酮、環(huán)己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈、磷酸、甘油醋酸試、水合氯醛試液、5%三氯化鐵乙醇溶液、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基等。3.材料：六味地黃丸、丹皮酚對照品、馬錢苷對照品等。（二）實(shí)訓(xùn)方法六味地黃丸為熟地黃、牡丹皮、山茱萸、茯苓、山藥、澤瀉六味中藥制成的水蜜丸、小蜜丸或大蜜丸。本實(shí)訓(xùn)依據(jù)《中國藥典》一部，利用顯微方法對藥材進(jìn)行鑒別；利用薄層色譜方法，對牡丹皮中的主要有效成分丹皮酚進(jìn)行鑒別。依據(jù)制劑通則進(jìn)行水分、重量差異、裝量、溶散時(shí)限和微生物限度等檢；應(yīng)用高效液相色譜法測定制劑中馬錢苷和丹皮酚的含量，對六味地黃丸進(jìn)行全面檢驗(yàn)。（三）實(shí)訓(xùn)步驟1.查閱資料，設(shè)計(jì)方案閱《中國藥典》正文597~598頁及相應(yīng)附錄部分，設(shè)計(jì)檢驗(yàn)方案。2.取樣按檢驗(yàn)要求取樣，并記錄品名、批號、規(guī)格、數(shù)量、來源等內(nèi)容。然后根據(jù)需要進(jìn)行適宜處理。3.性狀取六味地黃丸數(shù)粒，按照由表及里的順序，仔細(xì)觀察其形狀、色澤和氣味等性狀特征。為棕黑色的水蜜丸、黑褐色的小蜜丸或大蜜丸；味甜而酸。4.鑒別（1）顯微鑒別：取六味地黃丸2~3粒，置乳缽中研成粉末，取適量粉末，置載玻片，滴加甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他適宜的試液，蓋上蓋玻片（必要時(shí)，加熱透化），置顯微鏡下觀察：①山藥：淀粉粒三角狀卵形或矩圓形，直徑24~40μm，臍點(diǎn)短縫狀或人字狀。②茯苓：不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無色，遇水合氯醛試液溶化，菌絲無色，直徑4~6μm。③熟地黃：薄壁組織灰棕色至黑棕色，細(xì)胞多皺縮，內(nèi)含棕色核狀物。④牡丹皮：草酸鈣簇晶存在于無色薄壁細(xì)胞中，有時(shí)數(shù)個(gè)排列成行。⑤山茱萸：果皮表皮細(xì)胞橙黃色，表面觀類多角形，垂周壁連珠狀增厚。⑥澤瀉：薄壁細(xì)胞類圓形，有橢圓形紋孔，集成紋孔群；內(nèi)皮層細(xì)胞垂周壁波狀彎曲，較厚，木化，有稀疏細(xì)孔溝。（2）牡丹皮中丹皮酚的TLC鑒別：①供試品溶液的制備：取本品水蜜丸6g，研細(xì)；或取小蜜丸或大蜜丸9g，剪碎，加硅藻土4g，研。加乙醚40ml，回流1小時(shí)，濾過，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖?ml使溶解，即得。②對照品溶液的制備：取丹皮酚對照品，加丙酮制成每1ml含lmg的溶液，即得。③薄層色譜：吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（3：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。④結(jié)果判斷：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。5.常規(guī)檢查（1）水分：取六味地黃丸25g，破碎成碎片，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，精密稱定，打開瓶蓋在100~105℃干燥5小時(shí)，將瓶蓋蓋好，移置于干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定，再在上述溫度干燥1小時(shí)，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算六味地黃丸中含水量（％），不得過12.0%（水蜜丸）或15.0%（小蜜丸或大蜜丸）。（2）重量差異：①大蜜丸：以本品1丸為1份，取供試品10份，分別稱定重量，再與標(biāo)示重量相比較（9g），超出±6%的不得多于2份，并不得有1份超出±12%。②水蜜丸或小蜜丸：以本品10丸為1份，取10份，分別稱定重量，再與每份標(biāo)示重量相比較，超出±6%不得多于2份，并不得有1份超出±12%。（3）裝量：取六味地黃丸5個(gè)完整包裝，除去外蓋和標(biāo)簽，容器外壁用適宜的方法清潔并干燥，分別稱定重量，除去內(nèi)容物，容器用適宜的溶劑洗凈并干燥，再分別稱定空容器的重量，求出每個(gè)容器內(nèi)容物的裝量與平均裝量。平均裝量不得少于標(biāo)示裝量，且每個(gè)容器裝量不得少于標(biāo)示裝量的97%。如有1個(gè)容器裝量不符合規(guī)定，則另取3個(gè)復(fù)試，均應(yīng)符合規(guī)定。（4）溶散時(shí)限：取六味地黃丸6丸，分別置于升降崩解儀吊籃的玻璃管中，加擋板，啟動崩解儀進(jìn)行檢，應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)全部溶散且通過篩網(wǎng)。如有1丸不能完全溶散，應(yīng)另取6丸復(fù)試，均應(yīng)符合規(guī)定。如果供試品黏附擋板，應(yīng)另取6丸，不加擋板按上述方法檢，應(yīng)符合規(guī)定。（5）微生物限度：按微生物限度檢法依法檢查，應(yīng)符合下列規(guī)定：①細(xì)菌數(shù)：每lg不得過30000cfu。②霉菌和酵母菌數(shù)：每lg不得過100cfu。③大腸埃希菌：每lg不得檢出。④大腸菌群：每lg應(yīng)小于100個(gè)。⑤霉變、長螨者以不合格論。6.含量測定按高效液相色譜法測定。（1）山茱萸1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1：8：4：87）為流動相；檢測波長為236nm；柱溫40℃。理論板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000

2）對照品溶液的制備：取馬錢苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。3）供試品溶液的制備：取本品水蜜丸或小蜜丸，切碎，取約0.7g，精密稱定；或取重量差異檢項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，取約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）15分鐘使溶散，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10ml，置中性氧化鋁柱（100~200目，4g，內(nèi)徑1cm，干法裝柱）上，用40%甲醇50ml洗脫，收集流出液及洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。5）結(jié)果判斷：本品含山茱萸以馬錢苷計(jì)，水蜜丸每lg不得少于0.70mg；小蜜丸每lg不得少于0.50mg；大蜜丸每丸不得少于4.5mg。（2）牡丹皮1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（70：30）為流動相；檢測波長為274mn。理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3500。2）對照品溶液的制備：取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含20%的溶液，即得。3）供試品溶液的制備：取本品水蜜丸或小蜜丸，切碎，取約0.3g，精密稱定；或取重量差異檢項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，取約0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲提?。üβ?50W，頻率33kHz）45分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。4）測定：分別精密吸取對照品溶液1μL與供試品溶液20μ1，注入液相色譜儀，測定，即得。5）結(jié)果判斷：本品含牡丹皮以丹皮酚，水蜜丸每lg不得少于0.90mg；小蜜丸每lg不得少于0.70mg；大蜜丸每丸不得少于6.3mg?！緦?shí)訓(xùn)注意】1.進(jìn)行薄層色譜鑒別時(shí)，展開槽的玻璃槽口與蓋的邊緣磨砂處應(yīng)涂抹甘油淀粉糊（展開劑為脂溶性時(shí)）或凡士林（展開劑為水溶性時(shí)），使其密閉。展開前需用展開劑對展開缸進(jìn)行預(yù)平衡15~30分鐘，以防止邊緣效應(yīng)。注意展開過程中的恒溫恒濕。展開劑應(yīng)新鮮配制，所用溶劑純度應(yīng)高，應(yīng)分別量取后再混合，不得在同一量具中累積量取。丹皮酚具揮發(fā)性，故提取時(shí)需緩緩加熱，低溫回流；由于點(diǎn)樣量較大，宜點(diǎn)樣成條帶狀。2.進(jìn)行溶散時(shí)限檢查時(shí)，如有細(xì)小顆粒狀物未通過篩網(wǎng)，但已軟化且無硬心者可按符合規(guī)定處理；大蜜丸不檢溶散時(shí)限。3.進(jìn)行微生物限度檢查時(shí)，應(yīng)從2個(gè)以上最小包裝單位中隨機(jī)抽取本品，且不少于30g，大蜜丸不得少于4丸。檢出大腸埃希菌和大腸菌群時(shí)，按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不再復(fù)試；若細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)其中一項(xiàng)不符合規(guī)定，應(yīng)從同一批供試品中隨機(jī)抽樣，獨(dú)立復(fù)試兩次，以3次結(jié)果的平均值報(bào)告菌數(shù)，只有上述四項(xiàng)全部符合規(guī)定，才判斷本品微生物限度符合規(guī)定。4.用于含量測定的馬錢苷和丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品必須在60℃減壓干燥4小時(shí)以上。1.為什么選擇鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液作為丹皮酚的顯色劑？2.如果本品為單劑量包裝，還應(yīng)檢何項(xiàng)目？3.六味地黃丸供試品制備時(shí)，加入硅藻土的作用是什么？【實(shí)訓(xùn)檢測】【實(shí)訓(xùn)報(bào)告】記錄檢驗(yàn)結(jié)果，并將其與藥品標(biāo)準(zhǔn)相比較，判斷供試品是否符合規(guī)定?！緦?shí)訓(xùn)測試】序號考核內(nèi)容技能要求分值實(shí)得分1方案設(shè)計(jì)正確選取資料，科學(xué)設(shè)計(jì)實(shí)訓(xùn)方案，操作性強(qiáng)10

2取樣正確取樣5

3性狀正確判斷5

4

鑒別

藥材的顯微鑒別：正確操作與鑒別10