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文檔簡介
基礎(chǔ)知識(一)固定化酶的應(yīng)用實(shí)例
——生產(chǎn)高果糖漿(1)高果糖漿的生產(chǎn)原理:葡萄糖異構(gòu)酶果糖葡萄糖(2)葡萄糖異構(gòu)酶固定:
將葡萄糖異構(gòu)酶固定在顆粒狀載體上,裝入反應(yīng)柱中。(3)高果糖漿的生產(chǎn)操作:從反應(yīng)柱上端注入葡萄糖溶液,從下端流出果糖溶液,一個(gè)反應(yīng)柱可連續(xù)使用半年。2.固定化酶的反應(yīng)柱示意圖(二)固定化細(xì)胞技術(shù)1.將酶或細(xì)胞固定化的方法(二)固定化細(xì)胞技術(shù)1.將酶或細(xì)胞固定化的方法包埋法(二)固定化細(xì)胞技術(shù)1.將酶或細(xì)胞固定化的方法將酶(或細(xì)胞)包埋在細(xì)微網(wǎng)格里包埋法(二)固定化細(xì)胞技術(shù)1.將酶或細(xì)胞固定化的方法將酶(或細(xì)胞)包埋在細(xì)微網(wǎng)格里包埋法化學(xué)結(jié)合法(二)固定化細(xì)胞技術(shù)1.將酶或細(xì)胞固定化的方法將酶(或細(xì)胞)包埋在細(xì)微網(wǎng)格里將酶(或細(xì)胞)相互連接起來包埋法化學(xué)結(jié)合法(二)固定化細(xì)胞技術(shù)1.將酶或細(xì)胞固定化的方法將酶(或細(xì)胞)包埋在細(xì)微網(wǎng)格里將酶(或細(xì)胞)相互連接起來包埋法化學(xué)結(jié)合法吸附法(二)固定化細(xì)胞技術(shù)1.將酶或細(xì)胞固定化的方法將酶(或細(xì)胞)包埋在細(xì)微網(wǎng)格里將酶(或細(xì)胞)相互連接起來將酶(或細(xì)胞)吸附在載體表面上包埋法化學(xué)結(jié)合法吸附法【比較】酶和細(xì)胞的固定方法和特點(diǎn)固定對象酶細(xì)胞適宜固定法化學(xué)結(jié)合法、物理吸附法包埋法特點(diǎn)體積小,固定一種酶。包埋法容易丟失體積大,固定一系列酶。難以化學(xué)結(jié)合和吸附2.固定化酶和固定化細(xì)胞的聯(lián)系與區(qū)別2.固定化酶和固定化細(xì)胞的聯(lián)系與區(qū)別聯(lián)系:應(yīng)用相同,都能催化某些反應(yīng)2.固定化酶和固定化細(xì)胞的聯(lián)系與區(qū)別聯(lián)系:應(yīng)用相同,都能催化某些反應(yīng)區(qū)別:1)固定化細(xì)胞技術(shù)操作容易,成本低,
容易回收;2)固定化細(xì)胞技術(shù)對酶活性影響更?。?)固定化細(xì)胞固定的一系列酶;4)由于大分子難以通過細(xì)胞膜,因此固
定化細(xì)胞的應(yīng)用有一定的限制;〖思考〗將谷氨酸棒狀桿菌生產(chǎn)谷氨酸的發(fā)酵過程變?yōu)檫B續(xù)的酶反應(yīng),應(yīng)當(dāng)固定(酶、細(xì)胞);若將蛋白質(zhì)變成氨基酸,應(yīng)當(dāng)固定(酶、細(xì)胞)。〖思考〗將谷氨酸棒狀桿菌生產(chǎn)谷氨酸的發(fā)酵過程變?yōu)檫B續(xù)的酶反應(yīng),應(yīng)當(dāng)固定(酶、細(xì)胞);若將蛋白質(zhì)變成氨基酸,應(yīng)當(dāng)固定(酶、細(xì)胞)。3.固定化細(xì)胞的材料:固定化細(xì)胞時(shí)應(yīng)當(dāng)選用不溶于水的多孔性載體材料,如明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等1.制備固定化酵母細(xì)胞(1)酵母細(xì)胞的活化:1g干酵母+10mL蒸餾水→50mL燒杯→攪拌均勻→放置1h,使之活化。2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)〖思考2〗活化是指什么?1.制備固定化酵母細(xì)胞(1)酵母細(xì)胞的活化:1g干酵母+10mL蒸餾水→50mL燒杯→攪拌均勻→放置1h,使之活化。2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)活化是指讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常生活狀態(tài)的過程?!妓伎?〗活化是指什么?1.制備固定化酵母細(xì)胞(1)酵母細(xì)胞的活化:1g干酵母+10mL蒸餾水→50mL燒杯→攪拌均勻→放置1h,使之活化。2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(2)配制CaCl2溶液:0.83gCaCl2+150mL蒸餾水→200mL燒杯→溶解備用。(3)配制海藻酸鈉溶液:0.7g海藻酸+10mL水→50mL燒杯→酒精燈微火(或間斷)加熱,并不斷攪拌,使之溶化→蒸餾水定容到10mL。(3)配制海藻酸鈉溶液:0.7g海藻酸+10mL水→50mL燒杯→酒精燈微火(或間斷)加熱,并不斷攪拌,使之溶化→蒸餾水定容到10mL?!妓伎?〗微火加熱并不斷攪拌的目的是什么?防止海藻酸鈉焦糊。(3)配制海藻酸鈉溶液:0.7g海藻酸+10mL水→50mL燒杯→酒精燈微火(或間斷)加熱,并不斷攪拌,使之溶化→蒸餾水定容到10mL?!妓伎?〗微火加熱并不斷攪拌的目的是什么?(4)海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞的混合:將溶化的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫,加入活化酵母細(xì)胞液,攪拌后吸入到注射器中。(4)海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞的混合:將溶化的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫,加入活化酵母細(xì)胞液,攪拌后吸入到注射器中?!妓伎?〗為什么要海藻酸鈉溶液冷卻后才能加入酵母細(xì)胞?(4)海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞的混合:將溶化的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫,加入活化酵母細(xì)胞液,攪拌后吸入到注射器中?!妓伎?〗為什么要海藻酸鈉溶液冷卻后才能加入酵母細(xì)胞?防止高溫殺死酵母細(xì)胞。(5)固定化酵母細(xì)胞:以恒定速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中,形成凝膠珠狀顆粒。(6)沖洗:將固定的酵母細(xì)胞凝膠珠用蒸餾水沖洗2~3次。(二)固定化酵母細(xì)胞的發(fā)酵(二)固定化酵母細(xì)胞的發(fā)酵(6)沖洗:將固定的酵母細(xì)胞凝膠珠用蒸餾水沖洗2~3次。(7)發(fā)酵:150mL10%葡萄糖+固定化酵母細(xì)
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