第四章 中藥制劑的含量測定2014

第四章

中藥制劑的含量測定pyh2006含量測定的目的與意義目的：研究某種成分的含量高低是否符合規(guī)定，來判定藥物的優(yōu)劣，確保臨床用藥的安全、有效。意義：對于藥品生產(chǎn)、研究、優(yōu)化生產(chǎn)工藝、控制藥品質(zhì)量起著重要作用；確保藥物的安全有效；pyh2006第一節(jié)含量測定樣品的處理處理目的：被測成分從樣品中釋放出來除雜純化，提高分析方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度富集濃縮或衍生化，便于測定低成分的含量使試樣的形式及所用溶劑符合分析測定的要求。pyh2006第二節(jié)含量測定樣品的處理一、樣品的粉碎目的：1.樣品均勻有代表性，提高測定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度2.快速完全地提取待測成分注意：

粉末不要過細(xì)防損失防止污染pyh2006

設(shè)備：粉碎機(jī)、銅沖、研缽勻漿機(jī)、玻璃勻漿器pyh2006第二節(jié)含量測定樣品的處理二、樣品的提取1.過程：精密稱定樣品粉末溶劑提取分離殘渣

pyh2006第二節(jié)含量測定樣品的處理2.

提取方法：萃取法浸漬法回流提取法連續(xù)回流提取法超聲提取法水蒸氣蒸餾法超臨界流體提取法（SFE）pyh2006（一）萃取法

利用溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)不同，使物質(zhì)從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，經(jīng)過多次萃取，將待測組分提取出來的方法。（適宜于液體制劑）pyh2006正丁醇——

用于皂苷類乙酸乙酯——

用于黃酮類氯仿——

用于生物堿類乙醚、石油醚——

用于揮發(fā)油（1）萃取溶劑的選擇pyh2006（2）水相pH的選擇（使弱酸性或弱堿性成分主要以非離子化的游離酸或游離堿的形式存在）弱酸性成分——比其pKa低1~2個pH單位弱堿性成分——

比其pKa高1~2個pH單位pyh2006（3）儀器和提取次數(shù)（4）酒劑和酊劑——先揮去乙醇（5）防止和消除乳化分液漏斗鑒別——1次含量測定——3~4次pyh2006樣品置溶劑里，室溫下浸泡一段時間的提取方法操作簡單適宜遇熱不穩(wěn)定的樣品提取雜質(zhì)少缺點優(yōu)點費(fèi)溶劑（溶劑用量為樣品重量的10倍～50倍）費(fèi)時（12~24小時）1、冷浸法（二）浸漬法2、溫浸法（室溫15℃～25℃）（室溫40℃～60℃）pyh2006

樣品置有機(jī)溶劑中加熱回流的提取方法加快溶出速度，省時（0.5～2h）適宜受熱穩(wěn)定的藥物適宜較難溶出的組分特點儀器普通回流裝置（三）回流提取法pyh2006樣品置有機(jī)溶劑中加熱，蒸發(fā)的溶劑經(jīng)冷凝流回樣品管的提取方法節(jié)省溶劑，提高提取效率適宜受熱穩(wěn)定的藥物費(fèi)時（5～10h）特點儀器索氏提取器（四）連續(xù)回流提取法pyh2006A普通回流裝置B索氏回流裝置pyh2006（1）原理：超聲波在液體中以疏密相間的形式向物體輻射，出現(xiàn)“空化”現(xiàn)象（氣泡的形成、產(chǎn)生及破裂現(xiàn)象），形成超過1000個大氣壓的沖擊力，具有強(qiáng)烈的振動和擊碎作用，可以把物體打成極為細(xì)小的微粒，起到助溶的作用，因此可以用于樣品中測定組分的提取。（五）超聲提取法pyh2006（2）超聲提取的優(yōu)點①無需高溫。在40℃～50℃水溫下超聲波強(qiáng)化萃取，無水煮高溫，不破壞中藥材中某些具有熱不穩(wěn)定，易水解或氧化特性的藥效成份。②常壓萃取，安全性好，操作簡單易行，維護(hù)保養(yǎng)方便。③萃取效率高。超聲波強(qiáng)化萃取20～40分鐘即可獲最佳提取率。pyh2006④具有廣譜性。適用性廣，絕大多數(shù)的中藥材各類成份均可超聲萃取。⑤超聲波萃取對溶劑和目標(biāo)萃取物的性質(zhì)（如極性）關(guān)系不大。因此，可供選擇的萃取溶劑種類多、目標(biāo)萃取物范圍廣泛。pyh2006適用于具揮發(fā)性的可隨水蒸氣蒸出的組分的測定麻黃堿、檳榔堿、丹皮酚、揮發(fā)油（六）水蒸氣蒸餾法pyh2006pyh2006

（Microwaveassistedextraction,MAE）是指在樣品的提取過程中（或提取的前處理）加入微波場，利用微波場的特點來強(qiáng)化有效成分浸出的新型提取技術(shù)。（七）微波輔助萃取法pyh2006步驟：（1）挑選物料，然后進(jìn)行預(yù)處理：清洗、切片或混合，以便充分的吸收微波能；（2）將物料和合適的萃取劑混合，放置于微波設(shè)備中，接受微波輻射；（3）從萃取相中分離濾去殘渣；（4）獲得目標(biāo)產(chǎn)物。pyh20061、萃取時間短，效率高2、溶劑用量少，污染小3、可通過選擇不同的溶劑，控制樣品與溶劑間的熱交換4、可實現(xiàn)多個樣品的同時萃取特點pyh2006（一）沉淀法基于某些試劑與被測成分或雜質(zhì)生成沉淀，分離沉淀或保留溶液以得到精制的方法。三、樣品的分離純化如含益母草制劑總水蘇堿的測定，可用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）在酸性介質(zhì)中可與生物堿生成難溶于水的復(fù)合物，將此沉淀過濾而與其他雜質(zhì)分離。pyh2006利用某些被測成分具有揮發(fā)性，可采用蒸餾法，收集餾出液進(jìn)行含量測定，或某些成分經(jīng)蒸餾分解生成揮發(fā)性成分，利用分解產(chǎn)物（要求結(jié)構(gòu)明確）進(jìn)行測定。如水蒸氣蒸餾法測定丹皮酚：蒸餾時，在樣品的水溶液中加入氯化鈉，使丹皮酚提取完全。（二）蒸餾法pyh20061、直接萃取法利用試樣中被測成分與干擾成分在有機(jī)溶劑（萃取劑）中的溶解度不同，通過多次萃取達(dá)到分離凈化的目的。2、離子對萃取法原理：BH+(水相)+In-(水相)BH+.In-(水相)

BH+.In-

(有機(jī)相)

（三）液-液萃取法（LLE）pyh2006離子對萃取法在適當(dāng)?shù)膒H介質(zhì)中pyh2006柱色譜、薄層色譜、紙色譜、經(jīng)典微柱色譜等。（1）保留測定組分在柱上，洗去雜質(zhì)，再用適當(dāng)溶劑洗下組分（2）保留雜質(zhì)于柱上常用固定相硅膠、氧化鋁鍵合相硅膠大孔樹脂聚酰胺硅藻土、纖維素離子交換樹脂（四）色譜法pyh2006該方法采用的是一個類似于氣相色譜微量進(jìn)樣器的萃取裝置，由一根涂布多聚物固定相的熔融石英纖維從液/氣態(tài)基質(zhì)中萃取待測物，并直接與HPLC或GC儀聯(lián)用，在進(jìn)樣口（氣相色譜即為氣化室）將萃取的組分解吸附后進(jìn)行色譜分離檢查。（五）固相微萃取技術(shù)pyh2006固相微萃取裝置pyh20061、濕法消化（1）硝酸-高氯酸法（2）硝酸-硫酸法（3）硫酸-硫酸鹽法2、干法消化（不適用于含易揮發(fā)性金屬有機(jī)樣品的破壞）注意：（1）加熱灼燒溫度控制在420℃以下，以免某些被測金屬化合物揮發(fā)。（2）灰化完全與否，直接影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確度。（3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但切勿棄去。（六）消化法（需要測定無機(jī)元素）pyh2006（五）范圍

指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。pyh2006（六）耐用性指測定條件稍有變動時，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。是衡量實驗室和工作人員之間在正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。

pyh2006第三節(jié)常用定量分析方法一化學(xué)分析法重量分析法揮發(fā)法萃取法沉淀法滴定分析法酸堿沉淀配位氧化還原缺點:操作繁瑣專屬性不高微量成分準(zhǔn)確度不夠pyh2006硼砂的含量測定取供試品1.5000g，加水50ml溶解后，加甲基紅指示液3滴，用0.5002mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)槌壬?，消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液14.40ml，每1ml的0.5mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液相當(dāng)于95.34mg的硼砂，求硼砂的含量。pyh2006二可見紫外分光光度法常用于測定生物堿，丹皮酚,盧丁,總黃酮等(一)單波長光度法吸收系數(shù)法對照品法標(biāo)準(zhǔn)曲線法(二)計算分光光度法1.等吸收點法2.系數(shù)倍率法3.三波長法4.導(dǎo)數(shù)光譜法(三)對儀器和溶劑要求pyh2006硫酸阿托品注射液的含量測定精密量取硫酸阿托品注射液2.50ml置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，得供試液；取供試液2.0ml、硫酸阿托品對照液（49.8μg/ml）2.0ml，按規(guī)定的酸性染料提取法提取后，以氯仿液為空白，在420nm處測得對照管和供試管吸光度分別為0.446和0.444，試計算本品含硫酸阿托品的量？

pyh2006

取咖啡酸，在165℃干燥至恒重，精密稱取10.00mg，加少量乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至200mL容量瓶中，加水至刻度線，取此溶液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL4mL，加水至刻度線。取此溶液于1cm比色池中，在323nm處測定吸光度為0.463，已知該波長處的，求咖啡酸百分含量.pyh2006

三薄層掃描法一定波長的光掃描在薄層板上，薄層色譜有吸收紫外光或可見光的斑點或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點進(jìn)行掃描薄層吸收掃描法薄層熒光掃描法pyh2006

測定方式

（1）吸收法

適用于有紫外（可見）吸收的成分，較常用。該法又可采用反射法或透射法測定。實際工作中常用反射法，因為紫外光不能通過玻板。

（2）熒光法

適用于有熒光性質(zhì)的成分，例如小檗堿等。該法僅采用反射法測定，其靈敏度比吸收法高。pyh2006

定量方法外標(biāo)法一點法兩點法

pyh2006氣相色譜的一般流程圖pyh2006

系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：色譜柱的理論塔板數(shù)分離度重復(fù)性拖尾因子pyh2006塔板理論高度（H）和理論塔板數(shù)（n）都是柱效指標(biāo)，建立方法時必測。n=16（tR/W）2或n=（tR/σ）2

或n=5.54（tR/W1/2）2

pyh2006分離方程式

分離度（R）：是用于衡量分離效果的參數(shù)，其定義式如下：R=14σ分離95.4%R=1.56σ分離99.7%tR2－tR1w1pyh2006重復(fù)性：取各品種項下的對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。pyh2006拖尾因子：為保證測量精度，特別當(dāng)采用峰高法測量時，應(yīng)檢查待測峰的拖尾因子（T）是否符合各品種項下的規(guī)定，或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求pyh2006

實驗條件的選擇固定相溫度汽化室柱溫檢測室載氣檢測器ECDFIDTCDNPDpyh2006（三）定量方法

pyh2006定量校正因子定義：絕對定量校正因子：單位峰面積所代表的物質(zhì)的量。相對校正因子：某物質(zhì)i與所選定的基準(zhǔn)物質(zhì)S的絕對定量校正因子之比。pyh2006定量方法內(nèi)標(biāo)法選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對照物質(zhì)加入待測樣品中，以待測組分和對照物質(zhì)的響應(yīng)信號對比，測定待測組分的含量。內(nèi)標(biāo)的要求：樣品中不含有；保留時間與待測組分接近但完全分離；純度合乎要求。pyh2006

內(nèi)標(biāo)對比法pyh2006定量方法外標(biāo)法用待測物質(zhì)的純品作對照物質(zhì)。以對照物質(zhì)和樣品中待測組分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行定量。工作曲線法；外標(biāo)一點法不需重量校正因子，樣品中其它峰或成分不需出盡。pyh2006定量方法分為歸一化法使用條件：所有組分都能產(chǎn)生信號；組分的量與其峰面積成正比。pyh2006

標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法：Ais/Ax=(Cx+Cs)/Cxpyh2006高效液相色譜法（1）反相鍵合相色譜法：典型的反相鍵合色譜法是用非極性固定相和極性流動相組成的色譜體系。固定相：常用十八烷基（octadecylsily，縮寫ODS或C18）鍵合相；流動相：常用甲醇-水或乙腈-水。非典型反相色譜系統(tǒng)，用弱極性或中等極性的鍵合相和極性大于固定相的流動相組成。pyh2006

（2）正相鍵合相色譜法固定相——氰基與氨基化學(xué)鍵合相氰基化學(xué)鍵合相的分離選擇性與硅膠相似，但極性小于硅膠，即用相同的流動相及其它條件相同時，同一組分的保留時間將小于硅膠。氨基鍵合相與硅膠的性質(zhì)有較大差異，前者為堿性；后者為酸性。氨基鍵合相色譜柱是分析糖類最重要