流式細胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用

流式細胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用一、選擇題（一）A1型題（原則型）1．流式細胞儀是由下述哪項基本構(gòu)造構(gòu)成A．流體系統(tǒng)B．光學(xué)系統(tǒng)C．計算機系統(tǒng)D．流體系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)和信號解決系統(tǒng)E．流體系統(tǒng)、光學(xué)與信號轉(zhuǎn)換測試系統(tǒng)和信號解決與放大的計算機系統(tǒng)2．流式細胞儀流動池鞘液孔徑普通為A．50μmB．50～100μmC．50～200μmD．50～300μmE．300μm3．有關(guān)液流系統(tǒng)的鞘液，下述哪項是對的的A．鞘液是輔助樣本作正常檢測的基質(zhì)液B．鞘液是用來與樣本作對比的C．鞘液是包裹在樣本流周邊D．使樣本保持處在噴嘴中心位置，確保檢測精確性E．避免樣本流細胞靠近噴孔而形成堵塞4．流式細胞儀光學(xué)系統(tǒng)的構(gòu)成為A．激光系統(tǒng)B．激光光源與分光鏡C．激光光源、分光鏡與光束成形器D．激光光源、分光鏡、光束成形器和透鏡組E．激光光源、分光鏡、光束成形器、透鏡組和光電倍增管5．下述哪項有關(guān)激光光源的敘述是對的的A．采用氣冷式氬離子激光器B．激光波長488nm，15mWC．激光束波長466nm，10mWD．不散焦E．容易聚焦成有高斯能量分布的光斑6．光束成形器的作用是將激光器發(fā)射的激光束聚焦成A．高15μm、寬57μm的橢圓形光斑B．高10μm、寬57μm的橢圓形光斑C．高15μm、寬50μm的橢圓形光斑D．高10μm、寬50μm的橢圓形光斑E．高20μm、寬60μm的橢圓形光斑7．反射較長波長的光而通過較短波長的光的是A．氣冷氬離子激光器B．分色反光鏡C．光束成形器D．透鏡組E．光電信增管8．檢測熒光和反射光，并將光學(xué)信號轉(zhuǎn)換成電脈沖信號的是A．氣冷氬離子激光器B．分色反光鏡C．光束成形器D．光電倍增管E．透鏡組9．流式細胞儀構(gòu)成部件中對實驗分析數(shù)據(jù)存儲、顯示與分析的是A．液流系統(tǒng)B．光學(xué)系統(tǒng)C．光電倍增管D．軟件E．數(shù)據(jù)解決系統(tǒng)10．一臺好的流式細胞儀每秒鐘可測量A．25000個細胞B．0個細胞C．15000個細胞D．10000個細胞E．5000個細胞11．一臺好的流式細胞儀每秒鐘可測定熒光染料粒子A．5000個B．4000個C．3000個D．個E．1000個12．前向散射光（ＦＳ）信號的強弱與下述哪項成正比A．體積大小B．細胞性狀C．顆粒多少D．位移速度E．熒光強弱13．前向散射光是用于檢測細胞或其它粒子的A．內(nèi)部屬性B．表面屬性C．著染屬性D．粒子屬性E．以上都不是14．側(cè)向檢測器與發(fā)射激光束的方向A．平行B．在激光前方C．在激光上方D．垂直E．在激光下方15．側(cè)向散射光（ＳＳ）用于檢測細胞的A．表面屬性B．內(nèi)部構(gòu)造屬性C．著染屬性D．物理屬性E．化學(xué)屬性16．熒光信號由被檢細胞上標記的特異性熒光染料受A．熒光激發(fā)后產(chǎn)生B．紫外光激發(fā)產(chǎn)生C．紅外光激發(fā)產(chǎn)生D．發(fā)光物質(zhì)激發(fā)產(chǎn)生E．激光激發(fā)產(chǎn)生17．流式細胞儀檢測原理中最重要的一點是A．檢測熒光的特定發(fā)射波長B．檢測激發(fā)光的波長C．檢測熒光的顏色D．檢測前向散射光E．檢測側(cè)向散射光18．對數(shù)放大器中輸入信號放大10倍，輸出信號放大A．1倍B．2倍C．3倍D．10倍E．100倍19．對數(shù)放大器中輸入信號放大10倍，輸出信號由A．1轉(zhuǎn)變?yōu)?B．2轉(zhuǎn)變?yōu)?C．3轉(zhuǎn)變?yōu)?D．1轉(zhuǎn)變?yōu)?E．1轉(zhuǎn)變?yōu)?20．線性放大器用于測量的信號A．強度變化范疇較廣B．放大倍數(shù)較大C．放大倍數(shù)較小D．強度變化范疇較少E．以上都不是21．對數(shù)放大器用于測量信號是A．強度變化大但信號簡樸B．強度變化小但信號復(fù)雜C．強度變化大且信號復(fù)雜D．強度變化小且信號簡樸E．以上都不是22．流式細胞儀中最慣用于單抗標記的熒光染料是A．FITC、RB200、TRITCB．FITC、PE、PCC．FITC、RB200、PED．FITC、TRITC、PEE．FITC、PE、ECD或PECY523．消除重疊信號普通采用A．熒光賠償B．濾光片C．調(diào)節(jié)熒光染料D．線性轉(zhuǎn)換E．對數(shù)轉(zhuǎn)換24．分選細胞時液流柱形成液流的速率約每秒鐘A．50000個B．40000個C．30000個D．0個E．10000個25．均勻連串的液滴中大量液滴是A．含有細胞B．含有淋巴細胞C．含被熒光染色的淋巴細胞D．不含細胞的空白液滴E．以上都不是26．待分選細胞形成液滴時會被A．染色B．充電C．酶標記D．抗體捕獲E．以上都不是27．帶電荷的液滴在落入電極偏轉(zhuǎn)板的高壓靜電場后會A．聚集B．散開C．繼續(xù)下落D．停止下落E．向左或右偏轉(zhuǎn)28．普通規(guī)定分選速度最少達成A．0個/秒B．10000個/秒C．7000個/秒D．5000個/秒E．3000個/秒29．分選速度與細胞懸液中分選細胞的下述哪項直接有關(guān)A．細胞含量B．細胞性質(zhì)C．細胞大小D．有否胞膜E．單核或多核30．骨髓來源細胞的分選宜選擇高速是由于A．細胞太多B．細胞太大C．細胞膜結(jié)實D．細胞核結(jié)實E．在總細胞群體中所占比例不高31．分選純度除與儀器的精密度有關(guān)外，還與A．被分選細胞的性質(zhì)有關(guān)B．其它細胞的性質(zhì)有關(guān)C．被分選細胞的數(shù)量有關(guān)D．其它細胞的數(shù)量有關(guān)E．分選細胞與其它細胞有無互相重疊有關(guān)32．要想獲得分選高收獲率，就應(yīng)A．提高被分選細胞的純度B．減少被分選細胞的純度C．提高被分選細胞的濃度D．減少被分選細胞的濃度E．減少其它細胞的濃度33．現(xiàn)在設(shè)立收獲率均在A．100%B．99%以上C．98%以上D．95%以上E．90%以上34．分選得率是指A．分選收獲率B．通過測量點的分選細胞的比率C．從懸液中分辨出的目的細胞的總量D．通過測量點的細胞與實際收獲的分選細胞的比率E．從懸液中分辨出的目的細胞總量，再經(jīng)分選后獲得的實際比率35．分選得率與A．分選速度有關(guān)B．分選目的細胞總量有關(guān)C．不選細胞總量有關(guān)D．分選細胞的生物學(xué)性質(zhì)E．不選細胞的生物學(xué)性質(zhì)36．面積脈沖信號是指A．電壓脈沖曲線內(nèi)外區(qū)域的大小B．電壓脈沖曲線外區(qū)域的大小C．電壓脈沖曲線內(nèi)區(qū)域的大小D．電壓脈沖的高度E．以上都不是37．流式細胞儀的數(shù)據(jù)參數(shù)中熒光信號反映的是A．顆粒中被染上熒光部分數(shù)量的多少B．顆粒的大小C．細胞內(nèi)部構(gòu)造復(fù)雜程度D．細胞表面的光滑程度E．以上都不是38．單參數(shù)直方圖反映的是A．不同熒光強度的顆粒數(shù)量B．同樣熒光強度的顆粒數(shù)量C．不同熒光強度的顆粒性質(zhì)D．同樣熒光強度的顆粒性質(zhì)E．以上都不是39．單參數(shù)直方圖中A．縱坐標表達被測細胞的數(shù)量，橫坐標分為1024脈沖信號通道B．縱坐標表達被測細胞的性質(zhì)，橫坐標分為1024測量參數(shù)C．縱坐標表達被測細胞的數(shù)量，橫坐標分為1124測量參數(shù)D．縱坐標表達被測細胞的性質(zhì)，橫坐標分為1024脈沖信號通道E．縱坐標表達被測細胞的數(shù)量，橫坐標分為1024細胞40．雙參數(shù)直方圖涉及A．點圖B．點圖、二維等高圖C．點圖、二維等高圖、三維等高圖D．點圖、二維等高圖、假三維等高圖E．點圖、二維、三維和假三維等高圖41．等高線圖由類似地圖上的下述哪種線構(gòu)成A．實線B．虛線C．連線D．雙線E．等高線42．假三維等高圖中的一維不是參數(shù)，而是A．細胞B．細胞數(shù)C．線性D．對數(shù)E．峰值43．Regiou設(shè)立是根據(jù)下述哪項信號強弱劃定分析區(qū)域A．同一張單參數(shù)和三參數(shù)直方圖B．同一張雙參數(shù)和三參數(shù)直方圖C．同一張單參數(shù)和雙參數(shù)直方圖D．同一張單參數(shù)和多參數(shù)直方圖E．同一張雙參數(shù)和多參數(shù)直方圖44．gate設(shè)立是指在某一張選定參數(shù)的直方圖上根據(jù)該圖的細胞群分布選定待分析的特定細胞群，并規(guī)定該樣其它參數(shù)組合的直方圖只體現(xiàn)A．該群細胞的分布狀況B．ＲBC的分布狀況C．ＷBC分布狀況D．Pt分布狀況E．CD4+細胞分布狀況45．進行流式細胞分析第一步是制備A．兩個細胞的重疊B．多個細胞的粘連C．細胞碎片D．單細胞懸液E．細胞熒光染色46．制備單細胞懸液時，測定前普通要把哪項從血液中分離出來A．單核細胞或淋巴細胞B．單核細胞或血小板C．淋巴細胞或血小板D．Ｔ淋巴細胞或B淋巴細胞E．紅細胞或血小板47．從新鮮實體組織制備單細胞懸液的目的是A．分離細胞B．不損傷細胞C．既分離細胞又不損傷細胞D．破壞組織間的膠原纖維E．分解組織間的蛋白質(zhì)48．新鮮實體組織單細胞懸液制備的慣用辦法有A．機械法B．酶解決法C．化學(xué)試劑解決法D．表面活性劑解決法E．以上都不是(二)A2型題(否認型)1．流式細胞儀分析技術(shù)不涉及A．激光技術(shù)B．計算機技術(shù)C．電子顯微鏡技術(shù)D．流體噴射技術(shù)E．分子生物學(xué)技術(shù)2．不是帶通濾片允許通過的光波長是A．525nmBPB．575nmBPC．620nmBPD．625nmBPE．675nmBP3．與散射光的強弱無關(guān)的是A．細胞的大小B．細胞的形狀C．細胞的標記D．細胞的光學(xué)同性E．胞內(nèi)顆粒折射4．熒光染料在488nm激發(fā)光下發(fā)出熒光顏色錯誤的是A．綠色B．橙色C．白色D．橙紅色E．紅色5．對培養(yǎng)細胞的分選不適宜選擇高速，是由于A．細胞太多B．細胞太大C．細胞膜脆弱D．細胞核脆弱E．胞漿所占比例大6．不是流式細胞儀數(shù)據(jù)顯示的方式是A．單參數(shù)直方圖B．雙參數(shù)直方圖C．三參數(shù)直方圖D．假三維等高圖E．前向散射光示意圖（三）B1型題（配伍題）問題1～3A．量子產(chǎn)額和消光系數(shù)B．吸取C．波長差D．標記染色E．熒光信號1．熒光染料應(yīng)有較高的：2．發(fā)射光波長與激發(fā)光波間有較大的：3．熒光染料對488nm激發(fā)光波長有強的：問題4～6A．深藍B．橙紅色C．橙色D．紅色E．深紅色4．FITC的熒光顏色是：5．PE（RD1）的熒光顏色是：6．ＰeCy7的熒光顏色是：問題7～9A．CD3+、CD4+、CD8-B．CD3+、CD4+、CD8+C．CD19、CD20、CD21、CD22D．CD16、CD56、CD11a/CD18E．CD3-、CD16+、CD56+7．臨床擬定為ＮＫ細胞的是：8．成熟B細胞重要體現(xiàn)的是：9．Ｔh細胞體現(xiàn)的是：問題10～12A．ＴdＴB．ＰＩC．ＭDＲD．CD4+/CD8+倒置E．ＨＬA－B2710．用流式細胞儀檢測的胞質(zhì)內(nèi)抗原之一是：11．用于腫瘤耐藥基因分析時，可檢測到的是：12．AIDS患者免疫診療指標之一是：二、填空題1．血液中各類細胞的密度不同，其中____________與Ｆicoll分層液密度1.077相稱，離心后位于分層液與血漿層的界面中。2．FITC是免疫熒光技術(shù)中最慣用的染料，但其發(fā)射熒光的強度受影響較大。3．兩種熒光發(fā)射信號重疊時，其檢測精確性差，普通采用的辦法來消除重疊信號。4．細胞儀根據(jù)細胞流經(jīng)光照射區(qū)時＿＿＿＿＿＿的強弱來分析和分選細胞。5．式細胞術(shù)是對的理化特性進行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。三、判斷題1．流式細胞儀的工作原理借鑒了熒光顯微鏡技術(shù)。2．鏡組的作用是將激光和熒光變成平行光。3．熒光染料濃度較稀時，熒光強度與溶液成反比。四、名詞解釋1．細胞自發(fā)熒光2．分選得率3．前向散射光五、簡答題1．簡述流式細胞儀的工作原理。2．鞘液的重要作用是什么？3．流式細胞儀熒光測量的基本原理是什么？4．簡述細胞分選的原理？5．何謂同型對照？六、敘述題1．用流式細胞儀進行細胞分選的技術(shù)規(guī)定有哪些？2．制備合格的單細胞懸液時應(yīng)注意些什么？3．請介紹流式細胞儀在血液病檢測中的應(yīng)用。原則答案一、選擇題（一）A1型題(原則型)1.E2.D3.B4.E5.C6.A7.B8.D9.E10C11.E12.A13.B14.D15.B16.E17.A18.D19.A20.D21.C22.E23.A24.C25.D26.B27.E28.D29.A30.E31.E32.B33.D34.E35.A36.C37.A38.B39.A40.D41.E42.B43.C44.A45.D46.B47.C48.E(二)A2型題(否認型)1.C2.E3.C4.C5.C6.D(三)B1型題(配伍題)1.A2.C3.B4.A5.C6.E7.E8.C9.A10.A11.C12.D二、填空題1．單核－淋巴細胞2．pＨ3．熒光賠償4．電壓信號5．單個細胞三、判斷題1.√2.√3.×四、名詞解釋1．細胞自發(fā)熒光：大部分哺乳動物細胞內(nèi)的吡啶或黃素類核苷酸都存在自發(fā)熒光，用紫外光或藍光激發(fā)可藍色或綠色熒光。2．分選得率：指從一群體細胞懸液中分辨出目的細胞總量，再經(jīng)分選后獲得目的細胞的實際得率。3．前向散射光：激光束照射細胞時，光以相對較小的角度0.5~10°向前方散射的訊號。五、簡答題1．流式細胞儀的工作原理：借鑒了熒光顯微鏡技術(shù)，將激發(fā)光改為激光，使含有更加好的單色性；運用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)，提高特異性與敏捷度；將固定的標本臺改為流動的單細胞懸液，并用計算機進行信號的數(shù)據(jù)解決分析，能同時從一種細胞上獲得多個參數(shù)資料。2．鞘液的重要作用：鞘液是輔助樣本流進行正常檢測的基質(zhì)液，其重要作用是包裹在樣本流的周邊，使其保持處在噴嘴中心位置以確保檢測精確性，同時避免樣本流中細胞靠近孔壁而堵塞噴嘴。3．流式細胞儀熒光測量的基本原理：熒光測量時，熒光信號由被測細胞上標記的特異性熒光染料受激光激發(fā)后產(chǎn)生，每種熒光染料都有特定的激發(fā)波長，激發(fā)后產(chǎn)生特定波長熒光與顏色，通過波長選擇通透性濾光片，將不同波長熒光信號辨別開，送到不同的光電倍增管，通過一系列信號轉(zhuǎn)換、放大、數(shù)字解決，可在計算機上顯示出來。4．細胞分選的原理：當細胞懸液形成液流柱流經(jīng)流動室，流動室上方的壓電晶體產(chǎn)生機械振動帶動流動室以相似頻率進行振動，使液流柱斷裂成一連串均勻的液滴，其形成速率約每秒３萬個，其中僅少數(shù)液滴含有細胞，大量為不含細胞的空白液滴。當實驗設(shè)計中設(shè)定了被分選細胞的特性參數(shù)時，這類細胞在形成液滴時會充電，帶有正或負電荷，未設(shè)分選參數(shù)的細胞及空白液滴不帶電荷。帶電液滴在落入電極偏轉(zhuǎn)極的高壓靜電場，依所帶電荷是正或負而發(fā)生向右或左道偏轉(zhuǎn)，落入指定收集器中完畢分選。5．同型對照為免疫熒光標記中的陰性對照。由于熒光標記單抗的組來源不同，應(yīng)選用相似來源的未標記單抗作為同型對照來調(diào)節(jié)及設(shè)立電流電壓，在此基礎(chǔ)上進行樣本檢測可使熒光標記單抗的信號保持特異性，如不用同型對照，成果的可靠性將受到影響。六、敘述題１．用流式細胞儀進行細胞分選的技術(shù)規(guī)定有：①分選速度，普通規(guī)定分選速度達5000個/秒左右，以確保被分選細胞的生物活性不受影響。分選速度與儀器性能有關(guān)，與細胞懸液中被分選細胞含量呈正有關(guān)。分選速度應(yīng)按細胞的特性決定，如培養(yǎng)細胞因其膜脆弱，不適宜選擇高速；而骨髓來源的細胞因所占比例不變，宜選高速。②分選純度，與儀器精密度及被選細胞與其它細胞有無重疊特性有關(guān)，也與實驗設(shè)計的選擇親密有關(guān)。③分選收獲率，即通過測量點的分選細胞與實際收獲的分選細胞的比例，同樣與不選細胞有否重疊有關(guān)。收獲率與純度有對應(yīng)關(guān)系：規(guī)定純度高，收獲率相對低；規(guī)定收獲率高，則純度相對減少。實際工作中，應(yīng)在不影響純度的狀況下，獲得最高收獲率。④分選得率，是指從一群