過氧化氫干霧滅菌器對潔凈環(huán)境滅菌效果的驗證研究

目的:確認潔凈區(qū)環(huán)境的空氣微生物指標經(jīng)過氧化氫干霧滅菌器的預設(shè)參數(shù)滅菌處理后達到預期的滅菌效果，符合潔凈區(qū)的微生物限度要求。方法:過氧化氫干霧滅菌器把過氧化氫液體形態(tài)變成純正的霧形態(tài)，使其彌漫至整個滅菌的空間進行熏蒸滅菌，滅菌過程結(jié)束后，通過測試滅菌潔凈區(qū)的過氧化氫氣體滅菌濃度分布均勻性、過氧化氫干霧滅菌效果的生物指示劑實驗確認、潔凈區(qū)的沉降菌監(jiān)測、潔凈區(qū)的浮游菌監(jiān)測、空氣中過氧化氫殘留監(jiān)測等五項指標來驗證干霧滅菌器對潔凈區(qū)環(huán)境的滅菌效果。結(jié)論:經(jīng)過過氧化氫熏蒸滅菌后，潔凈區(qū)域環(huán)境的微生物被有效殺滅，過氧化氫殘留符合要求，對潔凈區(qū)環(huán)境無影響，經(jīng)過氧化氫干霧滅菌器的滅菌處理后，潔凈區(qū)的微生物限度指標達到預期要求。過氧化氫干霧滅菌技術(shù)是利用特殊的噴霧設(shè)備將過氧化氫消毒液霧化為粒徑＜10μm的小顆粒，這些小顆粒在空中可在短時間內(nèi)將其水分迅速揮發(fā)為干顆粒，研究表明，過氧化氫的霧化粒子越小，在空氣中懸浮的時間越長，就越有機會與空氣中的細菌充分接觸而達到滅菌的目的。過氧化氫干霧的性質(zhì)主要包括有:(1)過氧化氫干霧在空氣中進行無規(guī)則運動，遵循布朗運動原理并且不會沉降;(2)過氧化氫干霧不會聚集在一起或者產(chǎn)生大的液滴;(3)過氧化氫干霧在表面接觸后會反彈，從而不會破裂而濕潤表面［1］。過氧化氫干霧的這些性質(zhì)讓其具備良好的擴散效果和表面接觸效果，非常適合應用于接觸熏蒸式滅菌。過氧化氫干霧滅菌與其他氣霧滅菌技術(shù)的比較見表1［2］。表1過氧化氫干霧滅菌與其他氣霧滅菌技術(shù)的比較過氧化氫滅菌器能夠把過氧化氫液體形態(tài)變成純正的干霧形態(tài)，以使其彌漫到整個待滅菌空間完成熏蒸滅菌的處理過程。過氧化氫干霧滅菌技術(shù)可以對潔凈車間內(nèi)空氣及區(qū)域內(nèi)設(shè)備物品的外表面滅菌，使滅菌空間的微生物負載得以有效消除。該技術(shù)目前被廣泛用于制藥、生物技術(shù)醫(yī)學產(chǎn)品、化妝品以及保健品的生產(chǎn)。可安全用于不銹鋼、塑料、玻璃、地板、墻壁等各種表面和空間消毒。過氧化氫干霧滅菌設(shè)備所用過氧化氫消毒液的濃度一般在5%～10%，滅菌的成本較低;干霧滅菌器系統(tǒng)使用少量的殺孢子劑就能完成高效的殺菌效果，由于用量少，具備較好的材料兼容性，對設(shè)備及其附件、墻壁、地面及輔助工具沒有任何腐蝕性，是新一代的生態(tài)環(huán)保型滅菌技術(shù)［2］。本文對潔凈區(qū)環(huán)境采用過氧化氫干霧滅菌器的滅菌效果及過氧化氫殘留情況進行驗證研究。1、材料與方法1.1驗證用設(shè)備歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器，供應商法國歐菲姆。1.2驗證用的試劑材料過氧化氫殺孢子劑、嗜熱脂肪芽孢生物指示劑(ATCC7953)、化學指示劑、恒溫培養(yǎng)箱、浮游菌采樣器、胰酪大豆胨瓊脂平皿培養(yǎng)基、德爾格過氧化氫濃度監(jiān)測儀。1.3實驗方法過氧化氫滅菌器干霧滅菌效果的驗證操作過程應制定詳細的驗證方案，大致的操作過程見文獻［2］。1．3．1過氧化氫干霧分布均勻性確認方法將歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器放置在指定位置，并準備好適量的過氧化氫。滅菌前關(guān)閉潔凈區(qū)空調(diào)系統(tǒng)新風進口閥門及排風閥門，潔凈區(qū)內(nèi)設(shè)備保持正常工作狀態(tài)。將化學指示劑分別放置在過氧化氫滅菌器所在房間的四周墻角(墻角放置分上下兩層，下層離地10cm，指示劑編號為1～4，上層離天花板10cm，指示劑編號為5～8)及設(shè)備關(guān)鍵位置(指示劑編號為9～32)。按照經(jīng)計算的殺孢子劑用量調(diào)試好對應設(shè)備的用量，按下設(shè)備上的啟動按鈕，設(shè)備進行60s倒計時后，設(shè)備自行啟動，開始噴霧，人員撤離出潔凈區(qū)。達到設(shè)定噴霧量時，設(shè)備自行停機，開始滅菌計時，滅菌保持120min后結(jié)束，然后開啟凈化空調(diào)系統(tǒng)并置換新風30min，操作人員方可進入潔凈區(qū)檢查化學指示劑，觀察指示劑變色情況。1．3．2滅菌效果確認方法［3］過氧化氫干霧分布均勻性測試合格后再進行滅菌效果確認，將生物指示劑(嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7953)分別放置在房間的四周墻角及設(shè)備關(guān)鍵位置。使用生物指示劑對滅菌房間及設(shè)備進行監(jiān)測。將歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器放置在遠離設(shè)備及墻壁的地方，噴嘴口離設(shè)備或墻壁的距離不少于3．0m。每個潔凈房間內(nèi)使用1臺過氧化氫滅菌器，按照經(jīng)計算的過氧化氫殺孢子劑用量分別對四臺歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器進行用量設(shè)置，四臺歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器A1、A2、A3、A4號設(shè)備用量依次設(shè)定為:630，650，650，700mL。潔凈房間(過氧化氫滅菌器)使用的生物指示劑編號依次為1－4、5－8、9－12、13－17。關(guān)閉空調(diào)系統(tǒng)進排風。按設(shè)備上的啟動按鈕，開啟歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器，過氧化氫干霧通過噴頭注入車間內(nèi)。達到設(shè)定噴霧量時，設(shè)備自行停機，開始滅菌計時，滅菌保持120min后結(jié)束。將經(jīng)過氧化氫干霧滅菌后的生物指示劑全部放置于56℃培養(yǎng)箱內(nèi)，恒溫培養(yǎng)48h，另取未經(jīng)過氧化氫干霧滅菌的生物指示劑同時同步以同種方式接種培養(yǎng)，作為陽性對照。將對照管及滅菌后的生物指示劑進行對比觀察。以確認過氧化氫干霧器在設(shè)定參數(shù)下的滅菌效果。1．3．3沉降菌監(jiān)測方法取胰酪大豆胨瓊脂平皿培養(yǎng)基80個，根據(jù)潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測的取樣計劃，擺放在經(jīng)過氧化氫干霧滅菌器滅菌后房間及設(shè)備表面，每個取樣位點的沉降菌平皿暴露采樣4h，同時取3個培養(yǎng)基作空白對照，采集完的培養(yǎng)基及空白對照培養(yǎng)基倒置于30～35℃培養(yǎng)箱中連續(xù)恒溫培養(yǎng)5d，記錄培養(yǎng)皿中菌落數(shù)，并與潔凈區(qū)沉降菌的指標對比分析。1．3．4浮游菌監(jiān)測方法浮游菌監(jiān)測的取樣點為過氧化氫干霧滅菌器滅菌后房間，根據(jù)潔凈區(qū)浮游菌監(jiān)測的取樣計劃，使用胰酪大豆胨瓊脂平皿培養(yǎng)基，放置在浮游菌采樣器上，進行空氣浮游菌的取樣，各個取樣點的取樣量設(shè)為1000L，同時取3個培養(yǎng)基作空白對照，采集浮游菌樣品的培養(yǎng)基及空白對照培養(yǎng)基倒置于30～35℃培養(yǎng)箱中連續(xù)恒溫培養(yǎng)5d，記錄培養(yǎng)皿中菌落數(shù)，并與潔凈區(qū)浮游菌的指標對比分析。1．3．5空氣中過氧化氫殘留監(jiān)測方法通過空調(diào)以及排風系統(tǒng)的全排風和過氧化氫自身分解成水和氧氣，房間內(nèi)部過氧化氫殘留一般在30min內(nèi)能降到職業(yè)健康允許暴露水平值(1×10-6)以下(依據(jù)“美國職業(yè)安全與人體健康”標準:當環(huán)境中過氧化氫濃度小于1×10-6時，對人體健康是安全的)。過氧化氫干霧滅菌結(jié)束，開啟凈化空調(diào)系統(tǒng)30min后，參照“過氧化氫干霧分布均勻性”的測試位點設(shè)計方案，用德爾格過氧化氫濃度監(jiān)測儀對4個潔凈房間內(nèi)的過氧化氫殘留濃度進行測試。2、結(jié)果及分析

2.1過氧化氫干霧分布均勻性確認結(jié)果標準:指示劑的過氧化氫反應區(qū)域應由紫色變成紅色。待滅菌潔凈區(qū)內(nèi)過氧化氫干霧滅菌的過氧化氫化學指示劑的測試確認情況見表2。表2待滅菌潔凈區(qū)內(nèi)過氧化氫滅菌化學指示劑的測試結(jié)果2.2滅菌效果確認結(jié)果標準:對照管應為陽性即變色(呈黃色)，滅菌后生物指示劑的菌管不變色(呈紫色)表示生物指示劑試驗通過。過氧化氫干霧滅菌效果的生物指示劑測試情況見表3。表3四個潔凈房間過氧化氫干霧滅菌效果的生物指示劑測試情況結(jié)果表明:經(jīng)過56℃培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)48h，對照管明顯變色(呈黃色)，結(jié)果判斷為陽性，有微生物生長;經(jīng)滅菌處理的過氧化氫干霧滅菌效果測試用的17支生物指示劑的菌管不變色(呈紫色)，結(jié)果為陰性，判定為無微生物生長。由此確認設(shè)定參數(shù)條件下，歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器在潔凈區(qū)使用的滅菌效果合格。2.3沉降菌監(jiān)測結(jié)果

根據(jù)潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測的取樣計劃，過氧化氫干霧滅菌的沉降菌培養(yǎng)結(jié)果為各采樣點的沉降菌菌落數(shù)及空白對照均為Ocfu/皿，表明歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器滅菌后的潔凈區(qū)環(huán)境達到A級潔凈度下沉降菌標準規(guī)定，符合潔凈區(qū)沉降菌限度的要求。2.4浮游菌監(jiān)測結(jié)果根據(jù)潔凈區(qū)浮游菌監(jiān)測的取樣計劃，過氧化氫干霧滅菌的浮游菌培養(yǎng)結(jié)果顯示各采樣點的浮游菌菌落數(shù)及空白對照均為Ocfu/皿，表明歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器滅菌后的潔凈區(qū)環(huán)境達到A級潔凈度下浮游菌標準規(guī)定，符合潔凈區(qū)浮游菌限度的要求。2.5過氧化氫殘留濃度量監(jiān)測結(jié)果

標準:B+A潔凈區(qū)內(nèi)空氣中的過氧化氫殘留濃度量:≤1mg/L。經(jīng)過凈化處理后，歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器滅菌后空氣中過氧化氫殘留量監(jiān)測情況見表4。表4過氧化氫滅菌器滅菌后空氣中過氧化氫殘留量監(jiān)測結(jié)果(單位:×10-6

)結(jié)果表明:過氧化氫干霧滅菌結(jié)束經(jīng)30min排風后，用德爾格過氧化氫濃度監(jiān)測儀對潔凈車間進行過氧化氫殘留測試，測試結(jié)果表明，潔凈區(qū)空氣中的過氧化氫殘留濃度量均≤1×10－6-6，過氧化氫殘留測試符合標準規(guī)定，不會對人體造成危害。3、結(jié)語

本文通過使用化學指示劑對過氧化氫干霧均勻性進行監(jiān)測，確認了如下結(jié)果:(1)歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器干霧滅菌，潔凈房間內(nèi)的過氧化氫分布均勻;(2)通過使用生物指示劑對歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器干霧滅菌效果進行監(jiān)測，確認了過氧化氫干霧達到有效的滅菌效果;(3)通過對過氧化氫干霧滅菌的房間及房間設(shè)備進行沉降菌監(jiān)測、浮游菌監(jiān)測，確認了使用歐菲姆OXY－30000過氧化氫滅菌器干霧滅菌后的潔凈區(qū)域及設(shè)備微生物水平能達到A級潔凈級別要求；(4)通過使用過氧化氫殘留濃度監(jiān)測儀對車間進行過氧化氫殘留測試，過氧化氫殘留濃度量均≤1×10-6，符合標準規(guī)定，表明過氧化氫殘留不會對人體造成危害。潔凈區(qū)域經(jīng)過過氧化氫熏蒸消毒滅菌后，潔凈區(qū)域環(huán)境的微生物被殺滅，過氧化氫殘留對潔凈區(qū)環(huán)境無影響，干霧滅菌器的滅菌效果達到預期要求。干霧滅菌器是一種將液體消毒液霧化然后進行消毒的設(shè)備。設(shè)備利用超聲霧化器產(chǎn)生電子高頻振蕩(振蕩頻率為1．7MHz或2．4MHz。超過人聽覺范圍，對人體及動物無傷害)以及通過陶瓷霧化片產(chǎn)生的高頻諧振，來實現(xiàn)將液態(tài)水分子結(jié)構(gòu)打散而產(chǎn)生自然飄逸的水霧，在霧化過程中將釋放大量的負離子，其與空氣中漂