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學(xué)必求其心得,業(yè)必貴于專精學(xué)必求其心得,業(yè)必貴于專精學(xué)必求其心得,業(yè)必貴于專精專題3胚胎工程胚胎工程是指對動物早期胚胎或配子(針對胚胎發(fā)育過程)所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù);研究對象主要限定于高等脊椎動物,尤其是哺乳動物;重點(diǎn)內(nèi)容包括胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等.(一)動物胚胎發(fā)育的基本過程1、受精作用:成熟的精卵融合成為受精卵的過程(獲能精子+減II中期的成熟卵細(xì)胞)過程:精卵識別、精子附著于卵膜、精卵質(zhì)膜融合——受精時精卵質(zhì)膜融合后,次級卵母細(xì)胞才最終完成減II,精卵核融合場所:輸卵管上段2、胚胎發(fā)育:受精卵發(fā)育到幼體胚后發(fā)育:出生到性成熟個體發(fā)育:受精卵發(fā)育到性成熟3、動物胚胎發(fā)育的基本過程(1)卵裂期(2~8):細(xì)胞數(shù)量增加,有機(jī)物總量/總體積減小,每個細(xì)胞都具有全能性,未出現(xiàn)細(xì)胞分化,每個細(xì)胞都能發(fā)育成完整新個體(2)桑椹胚(16~32)(3)囊胚/胚泡:細(xì)胞開始分化,形成滋養(yǎng)層(胚胎附屬結(jié)構(gòu)/胚外結(jié)構(gòu))和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(胚胎干/ES細(xì)胞,發(fā)育全能性),之間為囊胚腔注意題目要求填寫滋養(yǎng)層細(xì)胞還是滋養(yǎng)層原腸胚:三胚層分化,其將分化成各種器官原基;--哺乳動物胚胎有機(jī)物總量增加(胚泡期已著床),其他動物有機(jī)物減少PS早期胚胎(桑葚胚和早期囊胚)(二)胚胎干細(xì)胞1、哺乳動物胚胎干細(xì)胞來源于囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ES)或胎兒的原始性腺(EK)2、形態(tài)特征:具有胚胎細(xì)胞的特性,體積小,核大,核仁明顯,二倍體核型功能特征:具有發(fā)育全能性胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng):分離早期胚胎中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán);胰酶處理解離培養(yǎng)——飼養(yǎng)層(胚胎成纖維細(xì)胞):促進(jìn)生長,抑制分化
4、胚胎干細(xì)胞的主要用途是:①基因敲除;②用分化誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞定向分化,組織器官移植;③治療人類的某些頑疾,修復(fù)壞死或退化的部位;④胚胎干細(xì)胞核移植,經(jīng)胚激活、胚胎培養(yǎng)、胚胎移植;⑤改良和創(chuàng)造動物新品種胚胎工程的應(yīng)用1。體外受精(1)卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng):①卵巢經(jīng)促性腺激素處理超數(shù)排卵,使用超聲監(jiān)視器確定卵泡位置,插入穿刺針吸取卵泡液,取出卵母細(xì)胞(各階段卵母細(xì)胞均有可能)②體外培養(yǎng)至成熟(減II中)(2)精子的采集和獲能(獲得能與卵細(xì)胞結(jié)合的能力):獲能液由相關(guān)物質(zhì)組成非ATP(3)受精:獲能精子和成熟卵細(xì)胞在體外合適環(huán)境中共同培養(yǎng)——試管動物/珍稀動物保護(hù)(體外受精)Cf克隆動物(核移植)胚胎體外培養(yǎng):(1)由于胚胎不同發(fā)育時期生理代謝需求不同,需配制一系列含有不同成分的培養(yǎng)液;由于哺乳動物胚胎發(fā)育條件復(fù)雜,尚不能實(shí)現(xiàn)胚胎全體外培養(yǎng)(2)目的:檢測受精狀況和受精卵的發(fā)育能力(3)培養(yǎng)液成分:水、無機(jī)鹽、有機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸、動物血清(4)胚胎去向:①胚胎移植②液氮冷凍保存胚胎移植——胚胎可能來自受精卵/核移植/胚胎分割;8細(xì)胞期之后(1)供體:經(jīng)濟(jì)價值高、遺傳性狀優(yōu)良受體:①同種②生理狀態(tài)相同/同期發(fā)情但未配種③常見或存量大④具有健康體質(zhì)和正常繁殖能力(2)胚胎移植的意義:大大縮短供體的繁殖周期,充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個體的繁殖能力(3)生理學(xué)基礎(chǔ):①動物發(fā)情排卵后,同種動物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的。②早期胚胎在一定時間內(nèi)處于游離狀態(tài)。(胚胎收集)③受體對移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng).(胚胎存活)——若同種不需接受免疫檢查,若不同種需要④供體胚胎與受體建立生理聯(lián)系(僅提供胚胎發(fā)育場所),但其遺傳特性不受影響(4)基本程序主要包括:①對供、受體的選擇和處理:同期發(fā)情處理(激素處理):供體促性腺激素,受體前列腺素或孕酮超數(shù)排卵:供體促性腺激素②配種或人工授精③胚胎收集、檢查、培養(yǎng)或保存:沖卵(早期胚胎)④胚胎移植到受體的相應(yīng)部位(輸卵管/子宮角)⑤移植后檢查胚胎分割(無性繁殖)(1)意義:快速繁殖良種畜(2)材料:卵裂球或早期胚胎(3)操作過程(囊胚為例):(1
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