復(fù)方白頭翁膠囊對(duì)腹瀉犬小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

復(fù)方白頭翁膠囊對(duì)腹瀉犬小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

動(dòng)物腹瀉是獸醫(yī)臨床常見(jiàn)病之一，也是致死率最高的疾病之一。主要是條件致病菌引起的,目前治療腹瀉的藥物多為抗生素,但抗生素長(zhǎng)期使用所引起的藥物殘留及其產(chǎn)生的耐藥性問(wèn)題日益嚴(yán)重。應(yīng)用中獸藥治療腹瀉并解決藥物殘留和耐藥性問(wèn)題,越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外的關(guān)注。研究表明,中藥治療腹瀉多從抗菌和腸黏膜修復(fù)兩方面起作用。復(fù)方白頭翁膠囊是由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)研制的新型抗腹瀉中藥制劑,經(jīng)臨床試驗(yàn)驗(yàn)證,對(duì)犬大腸桿菌性腹瀉具有很好的治療效果。該試驗(yàn)采用病理圖像分析技術(shù)研究了復(fù)方白頭翁膠囊對(duì)腹瀉犬小腸絨毛高度、隱窩深度和V/C值的影響,從而為進(jìn)一步研究復(fù)方白頭翁膠囊治療腹瀉的機(jī)制提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1各組大鼠腸道攻毒、攻毒、治療30只體重(3.0±0.5)kg幼犬,雌雄各半,購(gòu)自北京芳元緣養(yǎng)殖場(chǎng)。將所有實(shí)驗(yàn)犬平均分為3個(gè)組:A組(陰性對(duì)照組),B組(陽(yáng)性對(duì)照組,大腸桿菌攻毒),C組(中藥治療組,大腸桿菌攻毒+治療),每組10只。大腸桿菌攻毒量為300億/3kg,攻毒后12h,中藥治療組給予復(fù)方白頭翁膠囊進(jìn)行治療,治療量為每天1次,每次1粒,連用3d。1.2儀器、實(shí)驗(yàn)方法復(fù)方白頭翁膠囊:由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院提供。大腸桿菌:C83917O9:987p,購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所菌種室。伊紅染液:伊紅Y1g,75%酒精100mL。中性甲醛:甲醛(濃)120mL,加蒸餾水880mL,磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O)4g,磷酸氫二納(Na2HPO4)13g。LeicaRM2126RT型切片機(jī):上海錸卡儀器有限公司,上海。BH2生物顯微鏡:Olympus,日本。病理圖像分析系統(tǒng)6.0:Olympus公司,日本。1.3常規(guī)he染色實(shí)驗(yàn)第四天將實(shí)驗(yàn)犬放血處死,外科手術(shù)方法打開(kāi)腹腔,迅速取出十二指腸、空腸和回腸各2cm左右。各段采樣位置:十二指腸,距幽門口2~5cm處采集;空腸,整個(gè)空腸中段處采集;回腸,距回盲口處3~5cm處采集。十二指腸、空腸、回腸組織采集后,取各小腸段1cm生理鹽水沖洗干凈,放入10%中性甲醛中固定。石蠟包埋,連續(xù)橫斷切片,厚6μm,進(jìn)行常規(guī)HE染色。光鏡下詳細(xì)觀察和比較各組腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化情況,并利用Moditec照相處理軟件和病理圖像分析系統(tǒng),每個(gè)腸管取2張切片,每張切片選取3個(gè)最長(zhǎng)絨毛高度、最深隱窩深度進(jìn)行測(cè)量。1.4處理數(shù)據(jù)所有數(shù)據(jù)用Mean±SD表示。采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,one-wayANOVA分析和LSD多重比較。2結(jié)果2.1組隱窩深度值比較陰性對(duì)照組腸絨毛高度顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組和中藥治療組,其中中藥治療組腸絨毛高度高于陽(yáng)性對(duì)照組,且差異顯著(P<0.05)。3組中隱窩深度值以陽(yáng)性對(duì)照組最大,其次是中藥治療組,兩組間差異不顯著(P>0.05),陰性對(duì)照組與中藥治療組差異不顯著(P>0.05),但與陽(yáng)性對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。V/C值在數(shù)值上表現(xiàn)為陰性對(duì)照組最大,中藥治療組大于陽(yáng)性對(duì)照組,除陰性對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組差異顯著(P<0.05)外,其他各組差異均不顯著(P>0.05)。見(jiàn)表1。2.2治療組和陰性組v/c值比較陰性對(duì)照組腸絨毛高度顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組和中藥治療組(P<0.05),中藥治療組絨毛高度與陽(yáng)性對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。陰性對(duì)照組V/C值大于中藥治療組(P<0.05)和陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05)?；啬c的隱窩深度從數(shù)值上看,以陽(yáng)性對(duì)照組高于中藥治療組(P>0.05)和陰性對(duì)照組(P<0.05),中藥治療組隱窩深度雖大于陰性對(duì)照組,但差異不顯著。見(jiàn)表2。2.3組患者隱窩深度較大時(shí),比陰性對(duì)照組更少中藥治療組腸粘膜高度、隱窩深度和V/C值顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05)。與陰性對(duì)照組相比,中藥治療組除隱窩深度較大外(P<0.05),其他均小于陰性對(duì)照組(P<0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組絨毛膜高度和V/C值均小于陰性對(duì)照組(P<0.05),而隱窩深度比陰性對(duì)照組大(P<0.05)。見(jiàn)表3。3腸速康治療小鼠腹瀉的臨床效果臨床上采用中草藥治療腹瀉并取得了很好的效果,李有田等發(fā)現(xiàn)復(fù)方山芪顆粒具有很好的抗腹瀉作用;謝世榮等研究發(fā)現(xiàn)復(fù)方兒茶水提液可以通過(guò)抗炎對(duì)抗炎性介質(zhì)的瀉下作用,產(chǎn)生抗腹瀉作用;時(shí)維靜等用白頭翁湯治療由蓖麻油引起的小腸腹瀉和由番瀉葉引起的大腸性腹瀉所,取得了很好的成果。該試驗(yàn)所用中藥復(fù)方由白頭翁、秦皮、三七等幾味中藥組成。白頭翁有明顯的抗病原微生物作用。對(duì)痢疾桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、結(jié)核桿菌均能抑制,對(duì)腸粘膜有收斂作用,故能止瀉、止血。所含白頭翁素有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛及抗痙攣?zhàn)饔?可緩解腹痛、腹瀉,減輕出血。經(jīng)臨床試用于幼犬大腸桿菌性腹瀉,結(jié)果表明,具有良好的治療效果。小腸是機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的主要部位,吸收是小腸絨毛的主要功能。腸絨毛高度的增加能夠使小腸吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的面積增大,所以腸絨毛的長(zhǎng)短直接影響著動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育。絨毛高度與細(xì)胞數(shù)量呈顯著相關(guān),只有成熟的絨毛上皮細(xì)胞才具有養(yǎng)分吸收功能。因此絨毛短時(shí),成熟細(xì)胞少,養(yǎng)分吸收能力低。當(dāng)腸道受到侵襲或應(yīng)激反應(yīng)時(shí),腸絨毛就會(huì)受損變短,絨毛上皮細(xì)胞就會(huì)減少。該試驗(yàn)中所有大腸桿菌感染病例,腸絨毛高度均明顯小于比陰性對(duì)照組(P<0.05),但中藥治療組的腸絨毛高度高于陽(yáng)性對(duì)照組。說(shuō)明腸速康具有保護(hù)和促進(jìn)腸絨毛的修復(fù)的功能,但修復(fù)的機(jī)理尚有待進(jìn)一步研究。小腸隱窩是絨毛根部上皮陷入固有層形成的管狀腺。隱窩深度主要是反映上皮細(xì)胞的生成率,上皮細(xì)胞不斷從隱窩基部向絨毛端部遷移、分化,形成具有吸收能力的絨毛細(xì)胞,以補(bǔ)充正常的脫落。如果此過(guò)程減慢,則基部的細(xì)胞生成率降低,使隱窩變淺。但當(dāng)腸道生理機(jī)能發(fā)生改變時(shí),會(huì)產(chǎn)生大量具有分泌功能的未成熟上皮細(xì)胞,此種細(xì)胞的過(guò)量產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體腹瀉的發(fā)生。該試驗(yàn)中可以明顯的看出陰性對(duì)照組隱窩深度小于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05)和中藥治療組(P>0.05),雖然在統(tǒng)計(jì)上差異不顯著,中藥組十二指腸、回腸的隱窩深度相比陽(yáng)性對(duì)照組分別減少了16%,10.2%。絨毛高度/隱窩深度的比值(V/C值)則綜合反映小腸的功能狀態(tài)。比值下降,表示消化吸收功能下降,常伴隨腹瀉的發(fā)生。比值上升,消化吸收功能增強(qiáng),腹瀉率下降。該試驗(yàn)組中中藥治療組各組V/C值大于陽(yáng)性對(duì)照組,其中兩