臨床醫(yī)學(xué)專業(yè) 山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制備工藝研究

PAGE\*romanPAGE\*romanii山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制備工藝研究中文摘要工作包括：條件的優(yōu)選，對確定的工藝進(jìn)行了驗(yàn)證。以上研究有效利用了山楂資源，提高了山楂類制劑的技術(shù)水平。關(guān)鍵詞：山楂；制備工藝ABSTRACTInthispaper,thetridecidacidcomponentsandflavonoidsinhawthornleaveswereextractedbymeansofmacroporousresintreatmentandacid-basetreatment.Atthesametime,theeffectivepartsofhawthorntotalflavonoidsandhawthorntotaltriterpeneacidswereusedasrawmaterialstoprepareChinesemedicinedroppills.Themainresearchworkincludes:Solubilityandbasicpropertiesofpowderwerestudiedintheextractionoftotalflavonoidsfromhawthornandtotaltriterpenateacidfromhawthorn.Preliminarystabilitystudieswerecarriedout,andtheinteractionbetweenthetwoeffectivepartsandtheauxiliarymaterialsforthepreparationofdroppillswasstudied.Thepossibledispersionofthedruginthedroppillmatrixwasinvestigated.Finally,thetypeofpolyethyleneglycolfordroppingpillswasselected,andthecompositionofthewholeprescriptionwasstudied.Optimizationofthepreparationconditionsofdrippreparationwascarriedout,andthedeterminationprocesswasverified.Theaboveresearchhasmadeeffectiveuseofhawthornresourcesandimprovedthetechnicallevelofhawthornpreparations.KeyresinPAGE\*romanPAGE\*romanv目 錄前 言 1第一章綜 述 2山楂的研究概述 2山楂來源 2山楂的化學(xué)成分 3山楂的藥理作用 4山楂總黃酮類研究 7滴丸研究的概述 8高脂血癥的藥物研究概述和研究展望 10高脂血癥概述 10目前臨床上常用的藥物簡述如下： 10中藥的研究展望： 12本文主要研究工作和創(chuàng)新點(diǎn) 12第二章指標(biāo)性成分測定方法的研究 14山楂葉黃酮的薄層色譜法鑒別 14試驗(yàn)儀器和藥品 14溶液的制備 14薄層層析 14比色法測定山楂葉總黃酮的含量 15實(shí)驗(yàn)儀器和藥品 16實(shí)驗(yàn)方法 16實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)選 162.2.4結(jié)論 21反相高效液相色譜法測定山楂葉黃酮中的有效成分含量 21儀器與試藥 21色譜條件 21對照品溶液的制備 23線性關(guān)系的考察 23供試品溶液的制備 24方法學(xué)考察 242.3.7討論 26比色法測定山楂果中總?cè)扑崽崛∥锏暮?27實(shí)驗(yàn)儀器和藥品 27對照品溶液的配制 27供試品溶液的配制 27測定波長選擇 27顯色劑用量及條件優(yōu)選 27樣品的測定方法 29線性關(guān)系的考察 29精密度試驗(yàn)： 29重復(fù)性試驗(yàn)： 30穩(wěn)定性考察 30回收率試驗(yàn) 312.4.12結(jié)論 32薄層色譜掃描法測定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量 32試驗(yàn)儀器與藥品 32對照品溶液的制備 32展開劑的選擇 32提取條件的優(yōu)選 32掃描條件的選擇 33供試品的測定方法 33方法學(xué)的考察 342.5.8討論 37本章結(jié)論 37第三章有效部位的提取精制工藝研究 39山楂葉中總黃酮的提取精制工藝研究 39試驗(yàn)儀器和藥品 39山楂葉藥材中總黃酮含量的測定。 39山楂葉總黃酮提取精制工藝的初步選擇 39山楂總黃酮乙醇提取工藝影響因素的考察 39山楂總黃酮提取工藝優(yōu)化 41樹脂吸附性能的考察 44工藝的驗(yàn)證 503.1.8討論 50山楂果中總?cè)扑岵课惶崛」に嚨难芯?50提取工藝優(yōu)選 51提取工藝的驗(yàn)證 543.2.3討論 54本章結(jié)論 55第四章制劑處方前的研究 56材料和儀器 56方法與結(jié)果 56山楂黃酮提取物和山楂三萜酸提取物表觀溶解度測定 56粉體學(xué)基本性質(zhì)的測定 57指標(biāo)性成分化學(xué)穩(wěn)定性考察 61藥物在基質(zhì)中的分散程度考察 644.3討論 65第五章滴丸制備工藝的研究 66試驗(yàn)儀器和藥品 66聚乙二醇基質(zhì)的初步優(yōu)選 66滴丸的處方設(shè)計 67因素水平設(shè)計 67數(shù)據(jù)處理方式 67正交試驗(yàn)結(jié)果 68滴制條件的優(yōu)化 695.5結(jié)果 715.6驗(yàn)證 715.7討論 71第六章結(jié)論與展望 726.1結(jié)論 726.2展望 73參考文獻(xiàn) 74PAGEPAGE1前 言心血管疾病是目前威脅我國人民健康的重大疾病之一降血脂藥物需要長期服用，患者對藥物的副作用敏感，均有當(dāng)使用兩種有效部位組方時，需要考察為何選擇這兩種有效部位組方和兩3:3：5組方[2]，制成單方制劑。山楂中黃酮類成分和三萜酸類成分均為脂溶性成分，在水中溶解度低。目－中藥滴丸。第一章第一章綜述第一章綜 述山楂的研究概述1000制、藥理及臨床研究都有較大發(fā)展。山楂來源山楂在我國供藥用者8種[3]。其名稱和分布，見表1-1。表1-1序號 品 種山楂(Crataeguspinnatifids)，山海關(guān)以南稱山楂，主產(chǎn)東北、河北、內(nèi)蒙、河南、山東、山西、陜西等省。朝鮮和蘇聯(lián)西伯利亞亦有分布。山里紅(C.pinnatifidavarMajor)，產(chǎn)地同山楂。野山楂(C.cuneatasiebetzuse)，產(chǎn)于河南、湖南、湖北、江西等省。云南山楂(C.seabrifolia)，產(chǎn)于云、貴、川等省。湖北山楂(C.hupehensis)，產(chǎn)于湖北、湖南、江蘇、浙江、江西、四川、陜西等省。甘肅山楂(C.kansuensis)，產(chǎn)于甘肅、山西、河北、陜西、貴州、四川各地。華中山楂(C.wilsonii)，產(chǎn)地同甘肅山楂.桔紅山楂(C.aurantia古也有分布。山楂的化學(xué)成分2050關(guān)于山楂化學(xué)成分有兒茶酚精、胡蘿卜素鞣酸，及三萜類成分山楂酸、熊果酸、齊墩果酸21山楂中黃酮類成分主要有金絲桃苷、蘆丁等。三萜酸類成分主要有熊果酸、齊墩果酸山楂酸。研究表明山楂果實(shí)中總黃酮與果實(shí)大小、果肉薄厚呈正相關(guān)，山里紅及云山楂的藥理作用山楂的心血管作用(1)降血脂作用：學(xué)者對山楂黃酮調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝作用進(jìn)行了大量研究[3]，LDLRLDLRLDLR山楂葉制劑益心酮有降血清膽固醇作用，酮，使動物廓清速度加快，廓清時間縮短。(2)降壓作用：較小劑量注射對麻醉兔、小鼠有降壓作用。山楂乙醇浸出物靜脈給藥，能3h(3)舒張血管作用：山楂總黃酮可增加冠脈流量抗實(shí)驗(yàn)性心肌缺氧，抗心率失常等作用，這對冠心病等心血管疾病的防治顯然是有益的[30]。(4)抗心率失常作用：山楂浸膏對垂體后葉素引起的心率不齊，有一定的抑制作用。(5)抗氧化作用：山楂葉乙醇提取物對羥自由基和超氧陰離子的生成有清除和抑制作用。三萜酸類的藥理作用多數(shù)的研究表明山楂黃酮類成分具有降壓、增加冠脈血流量、降血脂、強(qiáng)心和抗心律失常的藥理作用。助消化作用山楂中脂肪酸可促進(jìn)脂肪分解，山楂酸等可提高蛋白分解酶的活性，有助消化[18]?？拱┳饔蒙介崛∥飳θ伺叻渭?xì)胞及誘癌細(xì)胞的抑制作用。這些顯示山楂有抗癌作用[2]。提高機(jī)體免疫力100%進(jìn)作用[19～20][34]?？咕饔蒙介鍎┖鸵掖继崛∫簩ΩＪ狭〖矖U菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、變形桿菌、大腸桿菌有抗菌作用[35]。止痛作用山楂能使血管舒張，有助于解除局部瘀血狀態(tài)，并有收縮子宮、促進(jìn)子宮復(fù)原的作用[3]。山楂總黃酮類研究總黃酮的提取分離其中常用的提取方法概述如下[13]：（1）水煮浸提法：流程為：山楂葉→水浸煮（2次）→濾液濃縮→沉淀→過濾→干燥。（2）溶劑萃取法：流程為：山楂葉→用70%乙醇提取→減壓回收乙醇→水分散→用正丁醇萃取→回收正丁醇→總黃酮。（3）聚酰胺分離法：流程為：山楂葉→用70%乙醇提取→回收乙醇→加入聚酰胺粉→用乙醇梯度洗脫→收集各級洗脫液→合并濃縮。（4）樹脂吸附法：流程為：山楂葉→浸漬→回收乙醇→過濾→樹脂分離→回收乙醇→干燥單成分的分離山楂葉乙醇提取物經(jīng)聚酰胺柱層析分離即可得到牡荊素[13]。其中丙酮提取物經(jīng)硅膠柱層析，氯仿—甲醇—水梯度洗脫，薄層層析檢控，相同部分合并，分別得到槲皮素、金絲桃苷、牡荊素、牡荊素鼠李糖苷、鹽酸二乙胺等化合物。成分的測定研究人員利用高效液相色譜和薄層色譜測定山楂葉黃酮[39]。量的如斯多苷。滴丸研究的概述Nernst－Noyes—Whitney因：dCDS(C

C)

公式（1-1）dt V s tdC/dt面積，Cs，Ctt對難溶性藥物Ct較小，Cs>>Ct，且對某一藥物來說，D/Vδ＝k所dC/dt＝kSCs 公式（1-2）Csk這些亞穩(wěn)態(tài)分子擴(kuò)散能量高，溶出快。由于滴丸劑具有溶出快、生物利用度高、療效好、藥物穩(wěn)定性好及制備簡便、質(zhì)量易控等優(yōu)點(diǎn)，因此受到醫(yī)藥界廣泛的重視。高脂血癥的藥物研究概述和研究展望高脂血癥概述心血管疾病是目前威脅我國人民健康的重大疾病之一，而由脂質(zhì)代謝紊亂所致的高脂血癥是動脈粥樣硬化及冠心病調(diào)脂治療是心血管病藥物防治的重要內(nèi)容之一。臨床上常用的藥物，有如下幾種：他汀類HGM-CoAHGM-CoA活性而導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)源性膽固醇合成減少貝丁酸類臨床常用的有非諾貝特、苯扎貝特、吉非羅齊等。其他常用藥物(1)多烯脂肪酸類[45]常用的有月見草油膠丸、魚油烯康丸等，為不飽和脂肪酸制劑。(2)煙酸類[45](3)在降脂治療中可配合使用抗氧化維生素等[45]。常用降血脂中藥降膽固醇的中藥有生姜、人參、大黃、短毛五加、葛根、麻仁、徐長卿等；降甘油三酯的中藥有赤陽子、銀杏葉中藥的研究展望：隨著近年來深入的研究,認(rèn)為中藥制劑具有療效肯定,毒副作用少,藥物食研究表明有降脂作用的中草藥有幾十種，其中山楂是其中研究較多，效果（LDL本文主要研究工作和創(chuàng)新點(diǎn)料、工藝過程和制劑的質(zhì)量。主要創(chuàng)新點(diǎn)如下：確保了山楂黃酮提取部位的質(zhì)量。3.減少了有機(jī)溶劑對藥品的污染，提高了有效部位的含量。本文進(jìn)行的其它研究工作如下：建立了山楂中黃酮類成分的薄層色譜鑒別方法選擇乙醇提取的工藝條件。及對藥物在基質(zhì)中的分散狀態(tài)的初步研究。優(yōu)選滴丸的處方組成和制劑過程中的工藝條件。第二章第二章指標(biāo)性成分測定方法的研究第二章指標(biāo)性成分測定方法的研究山楂葉黃酮的薄層色譜法鑒別中蘆丁、金絲桃苷的TLC鑒別方法。試驗(yàn)儀器和藥品硅膠G薄層板，煙臺化工研究所；甲醇、甲酸，丁酮，乙酸乙酯均為分析純?nèi)芤旱闹苽鋵φ掌啡芤旱闹苽洌壕芊Q取蘆丁對照品，制取蘆丁對照品溶液。精密稱取金絲桃苷對照品，制取金絲桃苷對照品溶液。供試品溶液的制備：取山楂總黃酮提取物，制取作為供試液。陰性對照溶液制備：按山楂滴丸制備方法，除山楂總黃酮外，制取陰性對照溶液。薄層層析G365nm2－1圖2－1山楂葉黃酮薄層色譜圖比色法測定山楂葉總黃酮的含量實(shí)驗(yàn)儀器和藥品島津2401紫外分光光度計；容量瓶；秒表蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：購自中國藥品生物制品檢定所，批號：0080-9705；乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純；聚酰胺，100目實(shí)驗(yàn)方法聚酰胺的處理取適量聚酰胺，裝柱，使用適量乙醇沖洗后，改用60％乙醇處理，即以60％乙醇充分洗滌后，烘干，備用。對照品溶液的配制105℃60％60％50mL，25mL60％（1mL0.4mg。供試品溶液的制備精密稱取山楂總黃酮提取物0.02g，加入10mL60％乙醇分散溶解，加入0.3g0.3g100mL60％50mL瓶中，定容，作為供試品溶液。實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)選測定波長選擇吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按下述的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法顯色，用紫外-可見分300～600nm510nm2－2。0.350.3吸收度A吸收度A0.20.150.10.050400 450 500 550 600波長（nm）2－2顯色劑用量的選擇0.412mg/mL5mL，5％NaNO210％Al（NO3）30.4、0.4mL；0.8、0.8mL；1.2、1.2mL；1.6、1.6mL；2.0、2.0mL顯色測定。其它按下述的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法顯色。結(jié)果見表2-1表2-1加入量（mL）0.40.81.21.62.0吸收度0.3410.6220.76507640.768顯色后時間的選擇1mol/LNaOH2min、5min、10min15min、20min、25min、40min、60min、90min2-2表2-2時間（min）2510152025406090蘆丁0.3400.3190.3080.3030.3030.3020.3020.3010.301樣品0.3760.3530.3410.3380.3370.3370.3370.3360.335供試品的測定工藝10mL60％乙0.3g0.3g100mL60％乙醇溶解50mL25mL60％5mL，5％NaNO21.2mL，6min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm線性關(guān)系的考察精密吸取蘆丁對照品液(0.412mg/mL)0mL1mL2mL3mL4mL25mL60％5％NaNO26min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm3853x-0.0022(r=0.9999)0～2.06mg2－3。1吸收度0.8吸收度0.60.40.200 0.5 1 1.5 2 2.5標(biāo)準(zhǔn)品量（mg）圖2－3精密度試驗(yàn)6，RSD％0.505％2－3。表2－3序號吸收度平均值RSD（％）10.35320.352340.3530.3540.3540.50550.35760.355重復(fù)性試驗(yàn)6RSD％0.86％2－4。序號含量（％）平均值（％）RSD（％）序號含量（％）平均值（％）RSD（％）173.5272.13473.172.673.00.86573.8672.7加樣回收率試驗(yàn)915mg、20mg、25mg32－5。序號樣品含黃酮量標(biāo)準(zhǔn)品加入量測得量回收率序號樣品含黃酮量標(biāo)準(zhǔn)品加入量測得量回收率平均回收率RSD（mg）（mg）（mg）（％）（％）（％）114.7115.6030.1098.63214.9315.6030.4999.74315.0415.6030.3197.88420.1915.6035.7299.57520.5915.6036.23100.2598.771.03621.6215.6036.7897.16725.1715.6040.5298.39824.8615.6040.1497.94924.3915.6039.8999.35結(jié)論反相高效液相色譜法測定山楂葉黃酮中的有效成分含量-2儀器與試藥實(shí)驗(yàn)儀器和藥品日本島津LC－10AVP高效液相色譜儀；Metler十萬分之一電子分析天平；超聲清洗儀。其他試劑為分析純色譜條件色譜柱為 intersil ODS－3 C18柱（5μm， 250×4.6mm）（（；1.0mL/min255nm；柱溫：25℃。abc時間t/min對照品溶液的制備25mL0.45μm線性關(guān)系的考察25mL1、2、3、4、5mL10mL，混勻。再經(jīng)微見圖2－5。峰面積積分值峰面積積分值00 0.2 0.4 0.6 0.8金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品量（μg）圖2－5精密稱取牡荊素-2”-O-6.85mg25mL容量瓶中，加12345mL10mL，2－6。峰面積積分值2000000峰面積積分值150000000 0.5 1 1.5標(biāo)準(zhǔn)品量（μg）圖2－6供試品溶液的制備7030mL10min70％丙酮溶液反復(fù)洗3～450mL，搖勻。方法學(xué)考察精密度試驗(yàn)取同一份山楂黃酮提取物的供試液連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣，測定金絲桃苷的峰面－6表2－6序號123456金絲桃苷峰面積206866320614862076218208759020861472091575牡荊素峰面積351672235045293529571354889835464453555673重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取9份同一批山楂黃酮提取物，其中15mg、20mg、25mg各3份，按3.5所述方法制備供試品溶液，采用HPLC分別檢測。數(shù)據(jù)見表2－7。序號取樣量金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積金絲桃苷含量序號取樣量金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積金絲桃苷含量牡荊素含量10.01592260765443300.55.15%11.39%20.01588261076443829.25.17%11.43%30.015772543804324465.08%11.23%40.01952325092552656.45.16%11.42%50.01997332945566006.55.16%11.42%60.01997336427571925.95.21%11.53%70.02399402808684773.65.15%11.39%80.02398408101693771.75.21%11.54%90.02398402415684105.55.14%11.39%穩(wěn)定性試驗(yàn)HPLC-2”-O-鼠李糖苷峰面2－8。時間（h）金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積0322375時間（h）金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積0322375548037.11318424541325.82327101556061.74321900545221.28326140554438.814324190552137.524322612548340.3回收率試驗(yàn)0.01g2－9。序 取樣量金絲桃苷含量牡荊素含量金絲桃苷加入量序 取樣量金絲桃苷含量牡荊素含量金絲桃苷加入量牡荊素加入量金絲桃苷測得量牡荊素測得量金絲桃苷牡荊素回號 /g回收率/%收率/%/mg/mg/mg/mg/mg/mg1 0.010420.53771.19000.44240.97440.45040.9929101.8101.92 0.010410.53711.18870.44240.97440.44460.9793100.5100.53 0.010320.53231.17810.55301.2180.56791.2485102.7102.54 0.010390.53601.18630.55301.2180.56021.2326101.3101.25 0.010490.54121.19780.66361.46160.67491.4704101.7100.66 0.010540.54371.20330.66361.46160.67951.4981102.4102.5討論對于山楂葉總黃酮提取物中金絲桃苷和牡荊素-2”-O-鼠李糖苷的含量比色法測定山楂果中總?cè)扑崽崛∥锏暮繉?shí)驗(yàn)儀器和藥品島津2401紫外分光光度計；容量瓶；水浴鍋；溫度計；對照品溶液的配制1.5mg10mL容量瓶中加無水乙醇溶解，并定10mL，作為對照品溶液。供試品溶液的配制50mL容量瓶中加無水乙醇溶解，50mL，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。測定波長選擇經(jīng)紫外掃描在548nm有最大吸收，空白無干擾。顯色劑用量及條件優(yōu)選香草醛—冰醋酸液用量的優(yōu)選取熊果酸對照品(0.15mg/mL)2.0mL5份，805%香草0.25mL0.50mL0.75mL1.00mL2.0mL，60155.0mL搖勻，補(bǔ)加冰醋酸至25mL定容，在548nm處測定吸收值，結(jié)果見表2-10。表2-105％香草醛－冰醋酸用量（mL）0.250.500.751.001.25吸收值0.4370.4660.4690.4840.478結(jié)果表明5%香草醛-冰醋酸用量為1.00mL最佳。高氯酸的用量的優(yōu)選取熊果酸對照品(0.15mg/mL)2.0mL5805%香1.00mL1.0mL1.5mL2.0mL2.5mL3.0mL60155.0mL25mL定容，在548nm處測定吸收值，結(jié)果見表2－11。表2－11 高氯酸用量（mL）1.01.52.02.53.0吸收值0.3300.3910.4640.4880.485結(jié)果表明，高氯酸用量為2.5mL時最佳。顯色后水浴的溫度的考察2－12。表2－12 顯色水浴溫度（℃）5060708090100吸收值0.4580.4750.4950.5420.5630.6526060℃。樣品的測定方法最終的實(shí)驗(yàn)工藝為：精密吸取供試樣品液5%2.5mL，60155.0mL25mL定548nm處測定吸收值。按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算。線性關(guān)系的考察精密吸取熊果酸對照品無水乙醇液(0.15mg/mL)0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL2.5mL5%1.0mL，2.5mL，60155.0mL25mL548nm2-6。吸收度吸收度

0.145

0.282

0.425

0.562

0.697

0.8380 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5熊果酸的取樣量（mg）圖2-7精密度試驗(yàn)：52－13。表2－13序號吸收度平均值RSD％10.40720.41030.4050.4101.2240.41250.418重復(fù)性試驗(yàn)：6RSD1.932－14。表2－14序號 總?cè)扑岷?/p>

（％）

RSD％160.32160.3262.2359.8461.9561.2663.0穩(wěn)定性考察0.15mg/mL2.0mL按標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法操作。結(jié)果見表2-15。表2-15時間(min)吸收度平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(%)00.59810.52620.4730.4930.06914.130.43940.43150.429100.425200.4210.4230.00410.98400.423600.418800.4061000.4031200.3910.3830.0256.51500.3621800.351回收率試驗(yàn)9769%2-16。序號樣品中相當(dāng)于熊加入熊果酸的測定熊果酸的量回收率序號樣品中相當(dāng)于熊加入熊果酸的測定熊果酸的量回收率平均回收RSD果酸含量（μg）量（μg）（μg）（％）率（％）（％）131373125619997.98230023125603997.183428673204312531255973631299.3999.4698.570.91530023125609098.82630853125618399.14結(jié)論測定方法。薄層色譜掃描法測定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量描法測定熊果酸含量。試驗(yàn)儀器與藥品日本島津CS－9301型雙波長薄層掃描儀G甲酸等均為分析純。對照品溶液的制備精密稱取熊果酸對照品適量2.5mg，制作為對照品溶液。展開劑的選擇正丁醇—氯仿—醋酸乙酯等展開優(yōu)選，環(huán)已烷—氯仿—醋酸乙酯—甲酸效果最佳，顯色清晰，附近沒有干擾。提取條件的優(yōu)選342－17表2－17Tab.2-17thecontentsofursolicacidoffiveextractiontimes提取時間（h）12345熊果酸含量（％）35777掃描條件的選擇經(jīng)對顯色后分別在熊果酸對照品及供試品色譜斑點(diǎn)處和空白處掃描紫外吸收光譜，熊果酸顯色后色譜斑點(diǎn)最大吸收峰在530～540nm之間。比較后確定使用雙波長掃描，掃描方法為反射式鋸齒掃描，波長為λs＝535nm，λr＝700nm，狹縫1.2×1.2mm，SX=3，靈敏度中等。見圖2－7。圖2－8熊果酸的薄層掃描圖Fig2-8TheTLCchromatogramofursolicacid供試品的測定方法4小時，提取液回收乙醚至干，殘渣用石油醚（30～60℃）浸泡15l（2分鐘，傾去石油醚。殘渣加適量無水乙醇―氯仿（3：2）25ml勻，作為供試品溶液。（200010ul，2ulG10％硫1055～7（附錄ⅥB薄層掃描法方法學(xué)的考察線性關(guān)系的考察2.04.06.08.010.0μL對照品溶液(0.54mg/ml)，點(diǎn)于同一Gy=-477.31+1546.6x，r=0.9997(y為吸收度積分值；x為對照品量)，線性范圍為：1.08～5.40μg2－8。色譜峰面積色譜峰面積00 2 4 6熊果酸的量（μg）圖2－9熊果酸的線性關(guān)系穩(wěn)定性試驗(yàn)4μLG0.511.5234662－18。表2－18穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Tab.2-18stability時間（h）吸收度積分值平均值RSD（％）0.52875.2412935.381.52918.0422865.322909.371.6632861.7942912.0762997.73精密度試驗(yàn)G52－19。52－19。序號（吸收度積分值）同板精密度不同板精密度179069.8379069.83278274.8880374.583序號（吸收度積分值）同板精密度不同板精密度179069.8379069.83278274.8880374.58375222.5774954.92477639.2575028.33574592.9074997.80平均值76959.8976885.09RSD％2.5383.422重現(xiàn)性試驗(yàn)52－20。序號熊果酸含量（％）平均含量（％）RSD％17.24序號熊果酸含量（％）平均含量（％）RSD％17.2427.35347.117.037.231.9257.3967.28加樣回收率試驗(yàn)(，9份，精密加入熊果酸對照品溶液(0.494mg/mL)適量，按樣品含量測定方法制備供試品溶液并測定熊果酸的含量，計算回收率，測得熊果酸的平均100.32%，RSD=2.14%2－21。已知量加入量測得量回收率平均回收率已知量加入量測得量回收率平均回收率序號（mg）（mg）（mg）（％）（％）13.5202.7176.19998.6023.4272.7176.176101.2033.4942.7176.277102.4043.5073.4586.85596.8053.5363.4587.004100.30100.322.1463.4403.4586.83698.2073.4274.1997.62099.8783.4664.1997.774102.6093.5074.1997.827102.87討論條件，均未能使熊果酸和齊墩果酸成功分離，包括甲醇－水(88：12)、甲醇－磷酸鹽緩沖液（9：1、24－乙腈(30：70)、甲醇－水－冰醋酸(33：67：0.2)等。本章結(jié)論的指標(biāo)性成分測定方法。3.C18為流255nm、柱溫：25℃的色譜條件，同時測定了山楂黃酮提取部位中的金絲桃苷和牡荊素-2”-O-第三章第三章有效部位的提取精制工藝研究第三章有效部位的提取精制工藝研究山楂葉中總黃酮的提取精制工藝研究試驗(yàn)儀器和藥品CrataeguspinnatifidaBgemajorN.E.Br的析純山楂葉藥材中總黃酮含量的測定。1000.5g，加入40mL60％乙醇，6030min3次，合并10mL600.3g0.3g100mL60％50mL2.2的測定。山楂葉總黃酮提取精制工藝的初步選擇少了有機(jī)溶劑的污染，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步開展了工藝優(yōu)選研究。山楂總黃酮乙醇提取工藝影響因素的考察乙醇濃度對山楂總黃酮提取率的影響精密稱取山楂葉粗粉（20目）25g共4份，分別加0，30，60，95％乙醇500mL1.5h中含有量相比，按公式（－－1提取率％＝提取物中黃酮量100％藥材中黃酮量

公式（3－1）表3－1乙醇濃度(%) 0 30 60 95提取率(%) 25.1 49.9 73.1 63.6提取時間對山楂總黃酮提取率的影響精密稱取山楂葉粗粉（20目）25g560500mL，1h5，20，30，40，60min，濾過，殘渣用少量溶媒洗滌，合量，與藥材中含有量相比，按公式(3－1)3－2。表3－2時間(min) 5 20 30 40 提取率(%) 5.1 48.7 62.1 63.9 71.4。溶劑用量對山楂總黃酮提取率的影響（20目60500mL1h60min，濾過，殘渣用少量溶媒洗滌，合并濾液，減壓干燥，得粗粉。按上述總黃酮測定方法操作，測定山楂總黃酮含量，與藥材中含有量相比，按公式（－－。表3－3溶劑用量(mL) 125 250 375 500提取率(%) 34.1 49.9 57.1 73.1提取溫度對山楂總黃酮提取率的影響（20目6040、60、80、10090min，濾過，殘渣用少量溶3－4。表3－4溫度(℃)406080100提取率(%)32.562.768.775.3山楂總黃酮提取工藝優(yōu)化3－5U10（10×53）均勻設(shè)計表安排3－6。g（0目2得粗粉。按上述總黃酮測定方法操作，測定山楂總黃酮含量，用公式計算提取率。水平溶劑用量*乙醇濃度(%)水平溶劑用量*乙醇濃度(%)溫度(℃)加熱時間(min)1560404027655560397070804117585100513801001206157178199211023表3－6因素序號溶劑用量(倍)乙醇濃度(%)溫度(℃)加熱時間(min)提取率(%327708512055.839804010026.3411607010055513651008067.761575408039.171780706050.9819601006093.392170554069.5102375854090.6表3－6中數(shù)據(jù)用spss10.0y(選入變量的影響后)對y考慮剔除。最終確定方程如下：Y=9.022+4.659x1-0.868x2+0.181x3+0.700x4+0.0184x1x3-0.0427x1x4式中：y：提取率，x1：溶劑用量，x2：乙醇濃度，x3：提取溫度，x4：加熱時間，x1x3、x1x4：因素的交互作用。R＝0.9975，S＝2.585，F(xiàn)＝98.953，P<0.00155，方程有顯著意義。（轉(zhuǎn)換公式如下：

i）的liilbliil

公式（3－2）i iliixilyy3－7表3－7因素x1x2x3x4x1x3x1x4標(biāo)準(zhǔn)偏回歸系數(shù)1.340-0.3070.1930.9910.521-0.360有提取率高、生產(chǎn)成本低的優(yōu)點(diǎn)，更適合工業(yè)生產(chǎn)。圖3－1樹脂吸附性能的考察樹脂的預(yù)處理大孔吸附樹脂（40～60目）48h，裝柱。254nm再用蒸餾水洗至無醇味，備用。裝柱0.2g餾水浸泡，備用。D101型大孔吸附樹脂吸附率和解吸率的比較（72.4％）200mL，放入恒溫（30℃）18h，充分吸附后，濾過。測定溶液中剩余山楂總黃酮含量，按公式（3-3）計算：吸附量＝溶液體積吸附前溶液濃度－吸附后溶液濃度樹脂重量（干）

公式（3-3）9mm70測定解吸液中總黃酮含量。按公式（3-4）3－8。解吸百分率＝洗脫液的平衡濃度洗脫液的體積吸附量樹脂重量（干）

公式（3-4）表3－8不同型號大孔樹脂的吸附量和解吸率Tab.3-8Absorptionanddesorptionofdifferenttypemacroporeousresins型號 D-101 D-101A D-101C吸附量(mg/g) 256.5 231.4 280.2解吸率(%) 95.4 98.7 94.8由表3－8D-101CD-101A濃度對吸附的影響（吸附等溫線）0.5g40mL不同濃度的0.8mL，在表面皿上水浴蒸去溶劑，按山楂總黃酮含量測定方法測定含量。按公式（3-3）計算吸附量。以平衡濃度為橫坐標(biāo)，吸附量為縱坐標(biāo)，得到吸附等溫線，見圖3－2。吸附量(mg/g)吸附量(mg/g)00 5 10 15平衡濃度(mg/ml)圖3－23－2Brunauer－5）表示：qqbc1bc

公式（3－5）q（/b為吸附平衡常數(shù)；q（/；C為山楂總黃酮的平衡濃度。上式可改成：c1q

1q

公式（3－6）c~c以q 作圖，可得一直線，由直線的斜率可得飽和吸附量q為687mg/g。溫度對吸附的影響0.5g540mL濃度5mg/mL24h，（3－3）計算吸附量。結(jié)果見圖3－3。300吸附量(mg/g)吸附量(mg/g)2001501005000

20 40 60 80溫度(℃)圖3－33.1.6.6鹽離子對吸附的影響0.5g105mg/mL40mLNaClKCl0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mol/L（30℃）24h1.6.43－4吸附量(mg/g)400吸附量(mg/g)NaClKCl300NaClKCl20010000 1 2 3鹽濃度(mol/L)圖3－43.1.6.7山楂總黃酮的吸附曲線6BV/h2mg/mL的山楂總5mL3－5。濃度(mg/mL)2濃度(mg/mL)100 100 200 300 400體積(mL)圖3－53.1.6.8洗脫液的考察0.5g5mg/mL20mL30％、50％、70％、95洗脫，作圖3－6。濃度(μ濃度(μg/mL)30% 50%30% 50%70%90%00 10 20 30體積(ml)圖3－63.1.6.9洗脫劑流速的考察0.5g5mg/mL20mL7，14，21，35BV/h的流速洗脫，以洗脫液的體積為橫坐標(biāo)，洗脫液的濃度為縱坐標(biāo)作圖3－7。7BV/h 14BV/h21BV/h35BV/h7BV/h 14BV/h21BV/h35BV/h濃度(μg/mL)100050000 5 10 15 20洗脫液體積(mL)圖3－73.1.6.10大孔吸附樹脂吸附純化山楂總黃酮的工藝1.0g處理過的樹脂1mL1g10mL，將上述水溶液6BV/h12BV14BV/h的流速洗去雜15BV70％乙醇用同一流速洗脫。工藝的驗(yàn)證g701mL1g6BV/h12BV的水14BV/h15BV7065％以上。討論60。山楂果中總?cè)扑岵课惶崛」に嚨难芯?0提取工藝優(yōu)選醇提取條件的確定3－9。表3－9乙醇濃度（％）提取時間（h）乙醇用量（倍）16041527062038082550g，加入設(shè)定濃度乙醇回流提取設(shè)定時量取適量稠膏真空干燥，精密稱定，按含量測定方法測定計算提取率作為指標(biāo)。3－10。三萜酸類提取率＝干膏出膏率×總?cè)扑岷勘?－10序號ABCD結(jié)果111112.65212222.58313331.71421232.08522312.80623122.44731322.61832131.62933212.16Ⅰ6.947.346.717.61Ⅱ7.327.006.827.63Ⅲ6.396.317.125.41R0.310.340.140.74平方和142.58142.69142.23145.40s0.14580.18360.03001.0854變差來源離差平方和自由度均方F值P變差來源離差平方和自由度均方F值P值A(chǔ)0.145820.07294.855p<0.01B0.183620.09186.116p<0.01C0.030020.01501D1.085420.542736.154p<0.01誤差0.030020.0150總和1.444880.7224酸濃度的確定200g，2873222NaOH2最后用適量水沖洗，真空干燥，即得總?cè)扑崽崛∥铮姳?－12。表3－12編號硫酸濃度（％）收率（％）總?cè)扑岷浚ǎィ┤扑崃刻崛÷?%)138.1342.754266.6483.168394.3572.451堿濃度的確定200g，87322，2NaOH2最后用適量水沖洗，3－13。表3－13編號堿液濃度（％）收率（％）總?cè)扑岷浚ǎィ┤扑崃刻崛÷?%)115.4462.484234.5582.61353.9592.301提取工藝的驗(yàn)證28722，2NaOH23－14。表3－14批次收率（％）總?cè)扑岷浚ǎィ┤扑崃刻崛÷?%)熊果酸含量（％）14.6572.6227.1524.5582.617.0934.8542.5927.21討論提取率高、成本低、無有機(jī)溶劑污染等的優(yōu)點(diǎn)。本章結(jié)論通過以上試驗(yàn)確定了山楂葉中黃酮類的提取精制工藝和山楂果中三萜酸類的提取精制工藝。具體工藝如下：g0L70℃40min，11.5L60%40min，合并過濾1mL6BV/h12BV14BV/h15BV70％乙醇用同一流速洗脫。洗脫液真空干燥，得黃褐色粉末，即得總黃酮提取部位。70％2871.1g/mL26％90℃2，30mL23％NaOH2第四章第四章制劑處方前的研究第四章制劑處方前的研究中藥劑型的研究是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，就制劑學(xué)而言，制劑處方前研究是在中藥經(jīng)過提取、精制等工藝后，對半成品的物理化學(xué)性質(zhì)、與輔料的配伍變化以及體外溶出特性等方面的研究，是中藥劑型研究前一個非常重要的環(huán)節(jié)具有重要意義。材料和儀器s－40：南4000600010000、單硬脂酸酯：北京化學(xué)試劑公司方法與結(jié)果山楂黃酮提取物和山楂三萜酸提取物表觀溶解度測定930.1mol/LpH6.810mL，置水浴0.8μm減4介質(zhì)時間(h)黃酮（μg/mL介質(zhì)時間(h)黃酮（μg/mL）三萜酸（μg/mL）24501.7192.3水48527.9207.572537.8212.324432.762.70.1mol/L鹽酸48490.275.772485.374.724508.7201.1pH6.8緩沖溶液48530.6212.872529.9209.8粉體學(xué)基本性質(zhì)的測定粒子形態(tài)取樣品顯微鏡照相，見圖4－1。abcd圖4-1粒子形態(tài)圖粒度分布取樣品適量，均勻分散在載玻片上，滴少量石蠟，使沒有重疊粒子，加蓋玻片，驅(qū)除氣泡，測定其定向徑，見圖4-2。0.4分布頻率(%)分布頻率(%)0.20.105~10 11~16 17~22 23~27 28~31 >32粒徑范圍(μm)0.35分布頻率(%)分布頻率(%)0.250.20.150.10.0506~1213~1920~2627~3334~4041~47 >48粒度范圍(μm)圖4-2堆密度的測定10mL10cm1054－2。休止角的測定采用固定圓錐底法測定。取樣品適量，使其通過玻璃漏斗中流下，傾入培rH，由公式測定6次，取平均值，見表4－2。tgaHr表4－2Tab.4-2Micrometiticpropertiesofsamples性質(zhì)黃酮三萜酸n平均粒徑(μm)(g/cm3)16.081.825±0.2126.331.581±0.285休止角56.5±2.1363.2±1.946指標(biāo)性成分化學(xué)穩(wěn)定性考察光照試驗(yàn)3600Lx計算相對4－3。表4－3時間(d) 黃酮（%） 三萜酸0 100.0 100.01 99.4 99.93 99.4 100.25 98.9 98.710 99.2 99.5溫度影響試驗(yàn)恒溫干燥箱中4－4表4－4溫度溫度(℃)Time(d)黃酮（%）三萜酸(%)0100.0100.0199.499.1403102.499.3598.899.81097.2101.2199.4100.26035100.498.999.899.11098.298.0199.799.3803598.698.199.498.41099.098.7濕度影響試驗(yàn)0.3～0.4mm75（NaCl、25℃計算相對百分含量，4－5。表4－5時間時間(d)75%黃酮（%）90%70%三萜酸(%)90%0100.0100.0100.0100.01101.298.498.799.5399.799.298.4101.2598.9100.199.999.61099.298.899.298.9提取物吸濕平衡曲線的測定d0.90.80.7總黃酮吸濕量總黃酮吸濕量(%)0.50.40.30.20.100.3 0.45 0.6 0.75 0.9 1相對濕度(%)圖4－34.2.3.5提取物與輔料的相互作用peg4000、peg6000、peg10000、泊洛沙姆、s40Rf藥物在基質(zhì)中的分散程度考察本文采用差示掃描量熱法考察藥物的分散狀態(tài)。測定條件：參比物，樣品約，空氣，升溫速率，紙速，掃描溫度自室溫，結(jié)果見圖4－4。圖4－435％以內(nèi)比較合適，能夠形成分散較好的分散體，起提高生物利用度。4.3討論0.1mol/LHCl顯微照片顯示，總黃酮提取物、總?cè)扑崽崛∥锪Ｗ泳鶠椴灰?guī)則形狀，其中黃酮提取物粒子形狀規(guī)則，休止角較小，粉體流動性較好?；瘜W(xué)穩(wěn)定性初步考察結(jié)果表明，總黃酮提取物、總?cè)扑崽崛∥飳?、熱、濕穩(wěn)定?？梢赃M(jìn)一步進(jìn)行制劑工作。第五章第五章滴丸制備工藝的研究第五章滴丸制備工藝的研究2000定的方法測定試驗(yàn)樣品的溶散時限；并任取20粒稱重，求出變異系數(shù)。試驗(yàn)儀器和藥品山楂葉總黃酮提取物，山楂總?cè)扑崽崛∥铮鹤灾?；泊洛沙姆，s－40聚乙二醇基質(zhì)的初步優(yōu)選13400060001000010％2％10～12℃，10/分的滴速滴制，濾除冷卻劑，-15℃～-20℃24h5－1?；|(zhì)丸重變異系數(shù)（％）溶散時限（min）基質(zhì)丸重變異系數(shù)（％）溶散時限（min）外觀質(zhì)量Peg40004.325.21外觀不圓Peg60003.455.64圓整度較好Peg100004.636.63外觀不圓滴丸的處方設(shè)計因素水平設(shè)計50.6mm，10～12℃，進(jìn)行滴丸的5－2。表5－2 水平提取物比例（％）硬脂酸（％）泊洛沙姆18812025225510330815數(shù)據(jù)處理方式采用多指標(biāo)全概率評分法，對結(jié)果進(jìn)行處理，用于正交表的計算。因本試驗(yàn)中丸重差異和溶散時限重要程度相同，為方便起見，可按下式計算。P(Bi)=P(Bi|A1)+PBi|A2) （i=1，2，…，n）正交試驗(yàn)結(jié)