生物制品生產(chǎn)工藝-診斷用生物制品的生產(chǎn)

診斷制劑的制備診斷抗體(血清)標記抗體診斷抗原血清學(xué)反應(yīng)抗原

變態(tài)反應(yīng)抗原熒光素標記抗休酶標記抗體放射性同位素標記抗體診斷制劑

利用微生物、微生物提取物或動物血清等材料制成的，用于傳染病、寄生蟲病血清學(xué)和變態(tài)反診斷應(yīng)用的制品，稱為診斷用生物制劑(diagnosticum)，也稱為診斷液。主要包括診斷抗原、診斷抗體(血清)和標記抗體等三大類。診斷生物制劑用于診斷的原理，是基于抗原和抗體能特異性結(jié)合這一基本特性,故診斷中可以用已知抗原檢測未知抗體，或用已知抗體檢測未知抗原。對于診斷制劑的最基本要求是特異性、敏感性和實用性。診斷抗體(血清)標記抗體診斷抗原血清學(xué)反應(yīng)抗原

變態(tài)反應(yīng)抗原（一）血清學(xué)反應(yīng)抗原1．凝集反應(yīng)抗原

凝集反應(yīng)抗原是顆粒性抗原，如細菌和紅細胞等。在有電解質(zhì)存在條件下，能與特異性抗體結(jié)合，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。如布氏桿菌凝集反應(yīng)抗原(試管、平板和全乳環(huán)狀凝集反應(yīng)抗原)、馬流產(chǎn)凝集反應(yīng)抗原、雞白痢全血凝集反應(yīng)抗原等。

血清學(xué)反應(yīng)抗原是用已知微生物或其浸出物、代謝產(chǎn)物、感染動物組織制成，用以檢測相應(yīng)的抗體。可與血清中的相應(yīng)抗體發(fā)生特異性結(jié)合，形成可見或可以檢測的復(fù)合物，以確診動物是否受微生物感染或接觸過某種抗原。常用抗原有凝集反應(yīng)抗原、沉淀反應(yīng)抗原和補體結(jié)合反應(yīng)抗原。2．沉淀反應(yīng)抗原沉淀反應(yīng)抗原為膠體狀態(tài)的可溶性抗原，如細菌和寄生蟲的浸出液、培養(yǎng)濾液、組織浸出液和動物血清等，與相應(yīng)抗體相遇，在二者比例合適并有電解質(zhì)存在時，抗原抗體相互交聯(lián)形成免疫復(fù)合物，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀。由于使用方法不同，沉淀反應(yīng)抗原又分為：①環(huán)狀反應(yīng)抗原，如炭疽動物臟器抗原；②絮狀反應(yīng)抗原，如測定抗毒素效價的絮狀反應(yīng)抗原；③瓊脂擴散反應(yīng)抗原和免疫電泳抗原等。

補體結(jié)合反應(yīng)，在補體的參與下可明顯地提高抗原、抗體特異性反應(yīng)的敏感性，可用已知抗原檢測未知抗體，并可用已知抗體檢測未知抗原。

補體結(jié)合反應(yīng)包括反應(yīng)系統(tǒng)(檢測系統(tǒng))和指示系統(tǒng)(溶血系統(tǒng))，反應(yīng)系統(tǒng)為抗原和抗體，指示系統(tǒng)是綿羊紅細胞及溶血素。補體可與反應(yīng)系統(tǒng)的抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合，也可與綿羊紅細胞—溶血素的復(fù)合物結(jié)合而引起溶血，以觀察溶血與否來判定反應(yīng)的結(jié)果。

3．補體結(jié)合反應(yīng)抗原診斷抗體(血清)標記抗體診斷抗原診斷血清

診斷血清是利用血清反應(yīng)以鑒別微生物或診斷傳染病的一種含已知特異性抗體的血清。通常以抗原免疫動物制成，有些則需再經(jīng)吸收除去非特異性抗體成分后供診斷用。含有多型抗體的血清稱為多價診斷血清，只對一個型的稱為單價診斷血清或稱因子血清。單含鞭毛抗體成分的血清稱為H血清；單含菌體成分的血清稱為O血清。此外，還有針對菌毛和針對莢膜的稱為K血清。(1)制備O因子血清可選擇無鞭毛的O型菌變種，或經(jīng)100

C加溫2.5h使H抗原滅能的菌株作抗原。用家兔經(jīng)耳靜脈多次注射，每次間隔4天，劑量為0.5、1、2、3ml等遞增，當(dāng)血清凝集價達到標準后即可采血分離血清制成。若制備特異的單因子抗血清，則需要用相關(guān)菌株吸收。(2)制備H因子血清選取運動力良好的沙門氏菌培養(yǎng)物，加甲醛滅活制成抗原。靜脈注射家兔，可產(chǎn)生高效價的特異性血清。免疫程序與O因子血清制造相同。為獲得單因子血清也需要用相關(guān)菌株吸收。(3)制備Vi因子血清任何含有Vi抗原的菌株均可做為抗原。培養(yǎng)菌液經(jīng)甲醛殺菌后加入0.25%二氯化鈣，以保護Vi抗原的穩(wěn)定性，靜脈注射家兔，通常注射4次后試血。抗體效價合格后采血分離血清，再用W型為主的沙門氏菌吸收，制成特異的Vi因子血清。2．沙門氏菌因子血清的制備診斷抗體(血清)標記抗體診斷抗原概述

具有示蹤效應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)與抗體結(jié)合后，仍保持其示蹤活性和與相應(yīng)抗原特異結(jié)合能力，此種結(jié)合物稱為標記抗體?？梢允聚櫤蜋z測抗原的存在及其含量，多用于鑒定抗原和診斷疾病。常用的標記物有熒光素、酶和放射性同位素?？乖c相應(yīng)的抗體接觸后，立即結(jié)合而形成不易分離的抗原抗體復(fù)合物。由于抗體與某些顯色劑偶聯(lián)，則形成的抗原抗體復(fù)合物由不可見成為可見，從而可以確定組織中是否存在某種抗原，這就是免疫標記技術(shù)的基本原理。根據(jù)抗體標記物的不同分為免疫熒光技術(shù)、免疫酶和放射性同位素標記技術(shù)。熒光素標記抗體熒光抗體是將熒光物質(zhì)標記在抗體上，然后與相應(yīng)的抗原結(jié)合，借熒光顯微鏡觀察抗原抗體復(fù)合物中特異性熒光的存在，從而判斷抗原的存在、位置、分布和含量。免疫熒光技術(shù)是將抗原抗體結(jié)合的特異性、熒光檢測的高敏感性以及顯微鏡的精確性三者結(jié)合的一種檢測技術(shù)?，F(xiàn)已廣泛用于細菌、病毒、原蟲的鑒定和傳染病的快速診斷。紅斑狼瘡(DIF)IgM帶狀沉積

酶標記抗體是用一定方法使抗體與酶共價結(jié)合，利用抗體與抗原反應(yīng)的特異性和酶催化反應(yīng)的高敏感性，通過酶專一性底物的顯色反應(yīng)來顯示樣品中抗原的存在與否，從而對疾病做出診斷。酶標記抗體與被檢抗原形成酶標記的免疫復(fù)合物。結(jié)合在免疫復(fù)合物上的酶，在遇到相應(yīng)的底物時，催化無色的底物，使其水解、氧化或還原，生成可溶性或不溶性的有色產(chǎn)物。根據(jù)有色產(chǎn)物的有無及濃度，可對抗原作定性，定位和定量檢測。（二）酶標記抗體

酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA-間接法)（三）放射性同位素標記抗體

免疫放射分析(immumoradiometricanalysis，IMRA)是一種用放射性同位素標記抗體的分析技術(shù)，具有高度敏感性、精確性和特異性。目前多使用同位素碘作標記，125I半衰期較長(60天)、同位素豐度大、輻射損傷小和計數(shù)率較高。檢測抗原的免疫測定法(IRMA)有兩種：(1)待測抗原與可溶的標記抗體作用。放射性復(fù)合物留在溶液中，未用完的