微生物的純種分離技術(shù)-微生物的接種技術(shù)

模塊七微生物的分離純化技術(shù)Isolationandpurificationofmicroorganisms任務(wù)一、微生物的接種技術(shù)知識(shí)目標(biāo)：掌握微生物接種的基本流程掌握常用的微生物接種技術(shù)技能目標(biāo)：能利用不同的接種技術(shù)進(jìn)行微生物的分離與純化任務(wù)一、微生物的接種技術(shù)內(nèi)容導(dǎo)入自然界中，微生物都是以群居的方式存在的，要想獲得所需菌種，必須把它們從中分離出來加以純化培養(yǎng)。純培養(yǎng)技術(shù)是進(jìn)行微生物學(xué)研究的基礎(chǔ)！任務(wù)內(nèi)容微生物接種技術(shù)定義接種的基本程序常用接種方法一、微生物接種技術(shù)的定義接種就是利用接種工具在無菌條件下將微生物純種由一個(gè)培養(yǎng)器皿轉(zhuǎn)接到另一個(gè)培養(yǎng)容器中的過程。二、接種的基本程序滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的微生物，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的微生物，以免污染環(huán)境滅菌接種環(huán)操作需在無菌室或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無菌室、超凈工作臺(tái)使用前后需進(jìn)行消毒。實(shí)驗(yàn)使用的物品使用前后需嚴(yán)格滅菌沾取標(biāo)本接種三、常用的接種方法斜面接種液體接種劃線接種穿刺接種三、常用的接種方法從已生長(zhǎng)好的菌種斜面上挑取少量菌種移植至另一新鮮斜面培養(yǎng)基上的接種方法。用于好氣性微生物的接種。（一）斜面接種：三、常用的接種方法1）標(biāo)記：在試管上注明菌名、接種日期、接種人姓名2）點(diǎn)燃酒精燈。3）接種：（一）斜面接種三、常用的接種方法（1）手持試管將菌種管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中，中指位于兩管之間。斜面向上，盡量放平。（2）旋松管塞（3）接種環(huán)灼燒滅菌三、常用的接種方法（4）拔管塞：用右手的無名指、小指和手掌邊先后取下菌種管和待接試管的管塞，讓試管口緩緩過火滅菌(切勿燒得過燙)三、常用的接種方法（5）取菌:接種環(huán)冷卻，輕沾取少量菌體或胞子，然后將接種環(huán)移出菌種管，注意不要使接種環(huán)碰到管壁，取出后帶菌接種環(huán)不可通過火焰。三、常用的接種方法（6）接種:在火焰旁迅速將沾有菌種的接種環(huán)伸入待接斜面管。從斜面培養(yǎng)基底部向上作“Z”形來回密集劃線，勿劃破培養(yǎng)基。接種針僅在斜面培養(yǎng)基的中央拉一條直線作斜面接種，直線接種可觀察不同菌種的生長(zhǎng)特點(diǎn)。三、常用的接種方法

(7)塞管塞：取出接種環(huán)，灼燒試管口，并在火焰旁將管塞旋上。不要用試管去迎棉塞，以免試管在移動(dòng)時(shí)納入不潔空氣。(8)將接種環(huán)灼燒滅菌。放下接種環(huán)，再將棉花塞旋緊。三、常用的接種方法斜面接種示意圖三、常用的接種方法由斜面菌接種到液體培養(yǎng)基（如試管或三角瓶等）中的方法。操作方法：將接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基時(shí)使環(huán)在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散，塞上棉塞再輕輕搖勻。如果菌種是培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基中時(shí)，一般用移液管或滴管接種（二）液體接種三、常用的接種方法目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以便獲得純菌、活菌計(jì)數(shù)。方法：★分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本★連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本（三）劃線接種三、常用的接種方法分區(qū)劃線接種分區(qū)劃線法適用范圍：適用于濃度較大的樣品分區(qū)劃線法三、常用的接種方法第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線三、常用的接種方法連續(xù)劃線法適用范圍：適用于濃度較小的樣品連續(xù)劃線法三、常用的接種方法用接種針從菌種斜面上挑取少量菌體并把它穿刺到固體或半固體的深層培養(yǎng)基中的接種方法。用于厭氣性細(xì)菌培養(yǎng)、檢查細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能力、保藏菌種。只適宜于細(xì)菌和酵母的接種培養(yǎng)（四）穿刺接種三、常用的接種方法穿刺接種方法：標(biāo)記點(diǎn)燃酒精燈接種。（1）手持試管（2）旋松棉塞（3）接種針灼燒滅菌，把在穿刺中可能伸入試管的其他部位也灼燒滅菌拔出棉塞取菌穿刺（將接種針自培養(yǎng)基中心平穩(wěn)、快速垂直刺入培養(yǎng)基，至接近試管底部，然后沿接種線拔出）塞上棉塞接種針灼燒滅菌思考與討論、任務(wù)1、微生物接種技術(shù)定義思考與討論：我學(xué)到什么？任務(wù)1、接種時(shí)，為何要盡量使試管平放？2、穿刺接種時(shí)能否將接種針直接穿透培養(yǎng)基？2、接種的基本程序3、常用接種方法：斜面接種、劃線接種、液體接種、穿刺接種模塊七微生物的分離純化技術(shù)Isolationandpurificationofmicroorganisms任務(wù)一、微生物的接種技術(shù)知識(shí)目標(biāo)：了解純種分離技術(shù)的原理掌握接種技術(shù)和無菌操作技術(shù)技能目標(biāo)：能利用不同的接種技術(shù)進(jìn)行微生物的分離與純化任務(wù)一、微生物的接種技術(shù)內(nèi)容導(dǎo)入自然界中，微生物都是以群居的方式存在的，要想獲得所需菌種，必須把它們從中分離出來加以純化培養(yǎng)。純培養(yǎng)技術(shù)是進(jìn)行微生物學(xué)研究的基礎(chǔ)！任務(wù)內(nèi)容微生物分離純化的原因微生物無菌技術(shù)一、微生物分離、純化的原因培養(yǎng)物：在人為條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體在無菌條件下，通過分離、培養(yǎng)獲得的一種微生物的過程純培養(yǎng)：從一個(gè)細(xì)胞或同種細(xì)胞群繁殖得到的后代。純培養(yǎng)物：一、微生物分離、純化的原因通過分離、純化技術(shù)從混雜的天然微生物群中分離出特定的微生物。接種技術(shù)無菌操作技術(shù)二、微生物無菌技術(shù)(aseptictechnique)保證待檢物品不被環(huán)境中微生物污染；防止被檢微生物在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。（一）無菌操作的目的：二、微生物無菌技術(shù)(aseptictechnique)（二）無菌操作技術(shù)定義：在操作過程中人為地排除一切微生物或一切不需要的微生物。二、微生物無菌技術(shù)(aseptictechnique)①殺死規(guī)定操作系統(tǒng)（如試管、三角瓶和培養(yǎng)皿）中的一切微生物，使操作系統(tǒng)變成無菌；1、無菌操作要點(diǎn)一二、微生物無菌技術(shù)(aseptictechnique)②在操作系統(tǒng)與外界的聯(lián)系之間隔絕一切微生物穿過（如用火焰封閉三角瓶和試管等的開口,用棉花過濾空氣、用濾器過濾水等）;2、無菌操作要點(diǎn)二二、微生物無菌技術(shù)(aseptictechnique)③在無菌室、超凈操作臺(tái)或空氣流動(dòng)較小的清潔環(huán)境中，進(jìn)行接種或其他不可避免的敞開作業(yè)，防止不需要的微生物侵入作業(yè)系統(tǒng)。3、無菌操作要點(diǎn)三二、微生物無菌技術(shù)(aseptictechnique)（1）定期檢查無菌環(huán)境的空氣是否符合規(guī)定；（2）用紫外線滅菌處理30~60min；（四）進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備（3）檢查無菌器材是否完備；（4）實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入無菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟＃?）緩沖室內(nèi)換上洗凈并經(jīng)紫外線燈照射過的工作衣、帽、鞋。二、微生物無菌技術(shù)(aseptictechnique)（1）在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動(dòng)作；（2）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放。（五）無菌操作要求（3）在火焰上方操作；（4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；（5）在接種培養(yǎng)物時(shí)，協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn)。（6）不能用嘴直接吸吹吸管。（7）帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒。二、微生物無菌技術(shù)(aseptictechnique)接種和分離工具1.接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.接種鋤5.接種鏟6.接種匙7.